目的 探討一種快速、簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)的骨質(zhì)疏松癥(osteoporosis,OP)體外模型制備方法。 方法 18個(gè)月健康雌性山羊80只,取雙側(cè)新鮮股骨80對(duì),根據(jù)脫鈣時(shí)間不同,隨機(jī)分為4組,每組20對(duì):對(duì)照組(A組)、1~5 d組(B組)、6~10 d組(C組)和11~15 d組(D組)。B、C、D組股骨標(biāo)本用18%EDTA脫鈣液浸泡,A組不作處理。每組于對(duì)應(yīng)浸泡時(shí)間段內(nèi)每天取4對(duì)股骨,采用定量CT對(duì)股骨內(nèi)、外側(cè)髁進(jìn)行掃描并計(jì)算骨密度(bone mineral density,BMD);采用電子萬(wàn)能試驗(yàn)機(jī)進(jìn)行三點(diǎn)彎曲試驗(yàn)和拉伸、壓縮極限強(qiáng)度試驗(yàn),測(cè)量相應(yīng)力學(xué)參數(shù)。 結(jié)果 隨脫鈣時(shí)間延長(zhǎng),A、B、C、D組股骨內(nèi)、外側(cè)髁BMD均呈下降趨勢(shì),組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P lt; 0.05);各組股骨外側(cè)髁BMD均顯著高于股骨內(nèi)側(cè)髁,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P lt; 0.05)。三點(diǎn)彎曲試驗(yàn)顯示,A、B組破壞荷載、極限強(qiáng)度及彈性模量均顯著高于C、D組(P lt; 0.05);A、B組間及C、D組間比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P gt; 0.05)。壓縮和拉伸極限強(qiáng)度試驗(yàn)顯示,A組壓縮和拉伸極限強(qiáng)度顯著高于C、D組(P lt; 0.05),與B組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P gt; 0.05);B組兩指標(biāo)顯著高于D組(P lt; 0.05),與C組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P gt; 0.05);C、D組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P gt; 0.05)。 結(jié)論 以18% EDTA浸泡山羊股骨6~15 d是一種快速、簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)的OP體外模型制備方法。
目的體外評(píng)估PKH26標(biāo)記對(duì)山羊髓核細(xì)胞生物學(xué)功能的影響,并結(jié)合活體熒光成像系統(tǒng)評(píng)價(jià)種子細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)的生物學(xué)行為。 方法取1歲齡山羊椎間盤分離髓核組織,通過酶消化法獲取原代細(xì)胞,倒置相差顯微鏡下觀察,傳代獲取第1代髓核細(xì)胞,行PKH26熒光標(biāo)記,熒光顯微鏡下觀察標(biāo)記后的細(xì)胞熒光強(qiáng)度,并行甲苯胺藍(lán)和Ⅱ型膠原免疫細(xì)胞化學(xué)染色觀察,錐蟲藍(lán)染色比較標(biāo)記前后細(xì)胞活性,MTT法檢測(cè)標(biāo)記前后細(xì)胞增殖特性,實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)細(xì)胞Ⅰ、Ⅱ型膠原及蛋白聚糖基因表達(dá)。將標(biāo)記后的髓核細(xì)胞接種至一體化纖維化-髓核支架的髓核部分,纖維環(huán)部分作為陰性對(duì)照,體外培養(yǎng)3 d后植入5只6周齡雄性裸鼠體內(nèi),培養(yǎng)6周后活體成像技術(shù)檢測(cè)髓核細(xì)胞-支架復(fù)合物在體內(nèi)的熒光強(qiáng)度及范圍。結(jié)果 倒置相差顯微鏡觀察示原代髓核細(xì)胞簇狀生長(zhǎng),呈卵圓形,第1代髓核細(xì)胞呈類軟骨樣細(xì)胞形態(tài);標(biāo)記后的第1代髓核細(xì)胞甲苯胺藍(lán)染色和Ⅱ型膠原免疫細(xì)胞化學(xué)染色均呈陽(yáng)性;標(biāo)記后熒光強(qiáng)度均勻,標(biāo)記前后細(xì)胞活性均在95%以上;標(biāo)記前后細(xì)胞生長(zhǎng)曲線比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P gt; 0.05);實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)示標(biāo)記前后細(xì)胞Ⅰ、Ⅱ型膠原和蛋白聚糖基因相對(duì)表達(dá)量差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P gt; 0.05)?;铙w成像技術(shù)顯示體內(nèi)髓核支架有強(qiáng)烈熒光,纖維環(huán)支架未見熒光。結(jié)論 PKH26標(biāo)記對(duì)髓核細(xì)胞的活性、增殖及細(xì)胞表型的表達(dá)無明顯影響,結(jié)合體內(nèi)活體熒光成像系統(tǒng)可以追蹤細(xì)胞在體內(nèi)的生物學(xué)行為。
目的 探討靜水壓聯(lián)合IGF-1對(duì)體外單層培養(yǎng)的山羊顳下頜關(guān)節(jié)盤細(xì)胞絲狀肌動(dòng)蛋白(filamentous actin,F(xiàn)-actin)的影響,分析靜水壓、IGF-1與F-actin的關(guān)系變化對(duì)細(xì)胞生物學(xué)行為改變的影響。 方法取4只1月齡山羊雙側(cè)顳下頜關(guān)節(jié)盤,采用酶消化法分離培養(yǎng)顳下頜關(guān)節(jié)盤細(xì)胞,以Ⅰ、Ⅱ型膠原免疫組織化學(xué)染色鑒定。取第2、3代細(xì)胞根據(jù)干預(yù)方法不同分為4組:A組以完全培養(yǎng)基培養(yǎng),作為對(duì)照;B組以強(qiáng)度0.2 MPa、頻率1 Hz的靜水壓作用3 h;C組以含10 ng/mL IGF-1的完全培養(yǎng)基培養(yǎng);D組采用靜水壓與IGF-1聯(lián)合培養(yǎng),方法同B、C組。于干預(yù)后24、72 h行免疫熒光染色觀察F-actin變化,測(cè)定單個(gè)細(xì)胞熒光強(qiáng)度。 結(jié)果經(jīng)形態(tài)學(xué)觀察及免疫組織化學(xué)染色鑒定,所培養(yǎng)細(xì)胞為顳下頜關(guān)節(jié)盤細(xì)胞。干預(yù)24 h時(shí)A、C組細(xì)胞熒光染色強(qiáng),保持了細(xì)胞正常形態(tài),且分布清晰;B組F-actin排列紊亂;D組F-actin變細(xì),排列混亂。72 h時(shí)A、C組F-actin排列整齊;B組F-actin排列紊亂、模糊不清,部分F-actin斷裂,形成偽足;D組F-actin變細(xì),排列紊亂、斷裂。隨時(shí)間延長(zhǎng),A、B、D組熒光強(qiáng)度均呈增強(qiáng)趨勢(shì),兩時(shí)間點(diǎn)間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P lt; 0.05);C組兩時(shí)間點(diǎn)間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.284,P=0.781)。干預(yù)24 h,C組熒光強(qiáng)度最高,B組最低,與A、D組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P lt; 0.05)。72 h時(shí),B、D組熒光強(qiáng)度顯著低于A、C組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P lt; 0.05);B、D組間及A、C組間比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P gt; 0.05)。 結(jié)論靜水壓可以引起山羊顳下頜關(guān)節(jié)盤細(xì)胞F-actin發(fā)生斷裂及重排,IGF-1上調(diào)F-actin的表達(dá);靜水壓聯(lián)合IGF-1誘導(dǎo)產(chǎn)生的F-actin斷裂、重排可能引起細(xì)胞生物學(xué)行為的改變。
目的評(píng)價(jià)使用新型氨基酸聚合物(multi-amino-acid copolymer,MAACP)復(fù)合納米羥基磷灰石(nano-hydroxyapatite,n-HA)人工椎板在山羊頸椎椎板切除術(shù)后阻隔硬膜外瘢痕粘連、壓迫的應(yīng)用價(jià)值。 方法2歲齡雄性山羊15只,體重(30 ± 2)kg,隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組(n=9)和對(duì)照組(n=6)。實(shí)驗(yàn)組行C4椎板切除,MAACP/n-HA人工椎板植入;對(duì)照組僅行C4椎板切除。術(shù)后4、12、24周分別取實(shí)驗(yàn)組2、2、5只,對(duì)照組2、2、2只山羊,行大體觀察傷口感染、人工椎板有無移位碎裂、椎管形狀等,并根據(jù)大體觀察Rydell瘢痕粘連程度評(píng)級(jí)標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)兩組手術(shù)節(jié)段粘連程度;行X線片、CT影像學(xué)觀察,24周時(shí)測(cè)量C3、C4、C5椎管面積及椎管矢狀徑,以正常山羊(n=2)作為正常組;24周MRI觀察脊髓神經(jīng)是否受壓;然后處死取材,行組織學(xué)觀察。 結(jié)果術(shù)后所有動(dòng)物切口愈合良好,未見毒性及免疫排斥反應(yīng)。術(shù)后實(shí)驗(yàn)組手術(shù)節(jié)段粘連程度明顯優(yōu)于對(duì)照組(Z= —2.52,P=0.00)。術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)X線片及CT觀察示實(shí)驗(yàn)組人工椎板位置無移位,外形完整,骨性椎管逐漸得到重建;對(duì)照組C4椎板及棘突缺損,軟組織影突入椎管。術(shù)后24周,C4椎管面積和椎管矢狀徑實(shí)驗(yàn)組和正常組均顯著高于對(duì)照組(P lt; 0.05),實(shí)驗(yàn)組與正常組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P gt; 0.05)。實(shí)驗(yàn)組MRI示C4平面腦脊液信號(hào)通暢,無軟組織突入椎管,硬膜無粘連受壓;對(duì)照組椎板缺損處瘢痕組織突入椎管與硬膜粘連, 硬膜輕度受壓。組織切片HE染色及Masson三色染色示實(shí)驗(yàn)組人工椎板完整無明顯降解,人工椎板與自體骨結(jié)合界面周圍少量成骨;對(duì)照組椎板缺損處纖維組織長(zhǎng)入。 結(jié)論新型MAACP/n-HA人工椎板可在體內(nèi)長(zhǎng)久維持生物力學(xué)穩(wěn)定,對(duì)周圍瘢痕向椎板缺損處生長(zhǎng)有良好機(jī)械阻隔作用。
目的 探討采用毒藜?jí)A肌肉注射形成先天性腭裂山羊模型的方法以及先天性腭裂畸形對(duì)山羊面中部發(fā)育的影響。 方法 取40 只8 ~ 12 月齡雜交波爾雌性山羊,體重35 ~ 55 kg,以配種日期定為孕0 d,于孕30 d 經(jīng)B超確認(rèn)懷孕后隨機(jī)將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為4 組。取30 只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物按照注射劑量分為實(shí)驗(yàn)組1、實(shí)驗(yàn)組2、實(shí)驗(yàn)組3(n=10),分別于孕31 ~ 42 d 肌肉注射毒藜?jí)A10、15、20 mg/d;余10 只作為對(duì)照組不作處理。每組于孕120 d 及出生后1 個(gè)月,各取5 只胎羊或小羊行頭顱三維CT 重建,測(cè)量上頜最前磨牙前方的兩側(cè)凹陷處間距(PPMM),及以此線為基準(zhǔn)測(cè)量上頜骨最前點(diǎn)至此線的垂直距離(APMM);完成三維CT 重建后行硬腭大體觀察,并制備干顱行上頜骨前后向及寬度發(fā)育情況觀察。 結(jié)果 實(shí)驗(yàn)組3 母羊注射藥物后全部流產(chǎn);實(shí)驗(yàn)組2 母羊注射藥物后2 只流產(chǎn),余8 只維持妊娠。孕120 d 取材時(shí),實(shí)驗(yàn)組1 取出5 只胎羊,均無腭裂;實(shí)驗(yàn)組2 取出5 只胎羊,其中3 只腭裂,上頜發(fā)育不足;對(duì)照組取出5 只胎羊,均無腭裂。出生后1 個(gè)月,實(shí)驗(yàn)組1 有11 只小羊娩出,均無腭裂;實(shí)驗(yàn)組2 有7 只小羊娩出,其中5 只腭裂,上頜骨明顯發(fā)育不足,飼養(yǎng)及進(jìn)食困難;對(duì)照組有8 只小羊娩出,均無腭裂。硬腭及干顱大體觀察見實(shí)驗(yàn)組2 上頜骨明顯發(fā)育不足。實(shí)驗(yàn)組2 的孕120 d 胎羊及出生后1 個(gè)月小羊PPMM 及APMM 與對(duì)照組比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P lt; 0.05)。實(shí)驗(yàn)組2 的5 只腭裂小羊存活1 ~ 2 個(gè)月。 結(jié)論 采用孕31 ~ 42 d 肌肉注射毒藜?jí)A15 mg/d,可以制備先天性山羊腭裂模型,形成的腭裂山羊面型特征基本符合人類腭裂畸形面中部發(fā)育特征。
目的 通過建立山羊全顳下頜關(guān)節(jié)置換模型,探討采用人工全顳下頜關(guān)節(jié)假體進(jìn)行關(guān)節(jié)置換的穩(wěn)定性及可行性。 方法 取健康成年山羊6 只,雌雄各半,體重35.3 ~ 37.0 kg。根據(jù)山羊顳下頜關(guān)節(jié)正側(cè)位X 線片測(cè)量所得參數(shù),結(jié)合同種山羊頭骨形狀制備人工全顳下頜關(guān)節(jié)假體;隨機(jī)取山羊一側(cè)顳下頜關(guān)節(jié)進(jìn)行全關(guān)節(jié)置換,作為實(shí)驗(yàn)組(n=6);并根據(jù)假體放置部位不同(關(guān)節(jié)窩及髁突)進(jìn)行觀察。另一側(cè)顳下頜關(guān)節(jié)植入鈦板,作為對(duì)照組(n=6)。術(shù)后觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物一般情況,并于4、8、12 周取材行大體、組織學(xué)及掃描電鏡觀察釘- 骨界面結(jié)構(gòu)變化;并行剪切力及ALP 活性檢測(cè),觀察釘- 骨界面的結(jié)合程度及成骨細(xì)胞活性。 結(jié)果 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均存活至實(shí)驗(yàn)完成,開口度正常,咀嚼功能恢復(fù)良好,能夠正常進(jìn)食。術(shù)后4、8、12 周,實(shí)驗(yàn)組假體與對(duì)照組鈦板均固位良好,固位鈦釘無松動(dòng)脫落。組織學(xué)及掃描電鏡觀察提示隨著時(shí)間延長(zhǎng)兩組釘- 骨界面成骨細(xì)胞逐漸增多。除術(shù)后4 周實(shí)驗(yàn)組關(guān)節(jié)窩部位固位鈦釘剪切力及ALP 活性與對(duì)照組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P lt; 0.05)外;其余各時(shí)間點(diǎn)組間比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P gt; 0.05)。 結(jié)論 采用人工全顳下頜關(guān)節(jié)假體對(duì)山羊行關(guān)節(jié)置換后能獲得較好的穩(wěn)定性。
目的 目前對(duì)脊柱側(cè)凸伴發(fā)的脊柱前凸研究較少。通過觀察鎳鈦記憶合金加壓釘(Staple 釘)所致的脊柱前凸骨骺組織學(xué)變化,探討Staple 釘對(duì)胸椎前凸生長(zhǎng)的影響。 方法 2 ~ 3 月齡雌性山羊18 只,體重8 ~ 12 kg,隨機(jī)分為長(zhǎng)釘組、短釘組、空白對(duì)照組,每組6 只。長(zhǎng)釘組和短釘組分別于山羊T6 ~ 11 節(jié)段植入Staple 長(zhǎng)釘(7 mm 齒深)、Staple 短釘(4 mm 齒深),空白對(duì)照組不進(jìn)行干預(yù)。術(shù)前及術(shù)后3 個(gè)月行X 線片觀察Cobb 角變化,然后處死山羊取脊柱頂椎生長(zhǎng)板和下關(guān)節(jié)突組織進(jìn)行HE 染色觀察骨骺軟骨細(xì)胞,并行免疫組織化學(xué)聚腺苷酸二磷酸核糖聚合酶-p85 片段和細(xì)胞核增殖抗原雙重染色法對(duì)軟骨細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù),并計(jì)算各組軟骨細(xì)胞增殖活躍度。 結(jié)果 術(shù)后3 個(gè)月,長(zhǎng)釘組和短釘組Cobb 角均顯著高于術(shù)前,且顯著高于空白對(duì)照組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P lt; 0.05);長(zhǎng)釘組及短釘組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P gt; 0.05)。HE 染色和免疫組織化學(xué)雙重染色顯示:與空白對(duì)照組相比,長(zhǎng)釘組和短釘組生長(zhǎng)板及下關(guān)節(jié)突軟骨骨骺的增殖層和肥大層的軟骨細(xì)胞數(shù)均明顯減少,軟骨細(xì)胞柱狀排列更不規(guī)則,細(xì)胞外基質(zhì)所占體積比增高;長(zhǎng)釘組的這種趨勢(shì)較短釘組更為明顯。長(zhǎng)釘組和短釘組HE 染色組織學(xué)分級(jí)與空白對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P lt; 0.05),長(zhǎng)釘組與短釘組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P gt; 0.05)。長(zhǎng)釘組和短釘組椎體生長(zhǎng)板及下關(guān)節(jié)突軟骨增殖活躍度與空白對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P lt; 0.01),長(zhǎng)釘組和短釘組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P gt; 0.05)。 結(jié)論 Staple 釘通過影響山羊胸椎的遠(yuǎn)端生長(zhǎng)板及其下關(guān)節(jié)突的骨骺軟骨細(xì)胞增殖活躍度,從而影響骨生長(zhǎng),導(dǎo)致脊柱后凸增加。
目的 探討孕晚期行宮內(nèi)手術(shù)修補(bǔ)胎羊腹壁缺損的可行性。 方法 取8 只孕110 ~ 115 d 的健康山羊,體重14 ~ 22 kg,隨機(jī)分為兩組,分別為可吸收縫線組(A 組,3 只)及生物型補(bǔ)片組(B 組,5 只)。兩組首先切除胎羊全層腹壁分別制備大小約5 cm × 1 cm 及5 cm × 2 cm 的腹壁缺損模型后,分別采用可吸收縫線縫合及兩層生物型補(bǔ)片修補(bǔ)腹壁缺損。觀察術(shù)后母羊及出生后小羊一般情況;于出生后第10 天處死小羊觀察腹腔內(nèi)粘連情況,并取切口瘢痕組織行生物力學(xué)測(cè)定和組織學(xué)觀察。 結(jié)果 術(shù)后共3 只母羊流產(chǎn),其中A 組1 只,B 組2 只;其余母羊均順利娩出小羊。A組小羊腹壁切口愈合好,瘢痕呈線形,腹腔內(nèi)粘連輕;瘢痕厚度為4 ~ 5 mm。B 組小羊腹壁切口均未完全愈合,腹腔內(nèi)粘連輕;瘢痕厚度為3 ~ 4 mm。生物力學(xué)測(cè)定A 組瘢痕組織皮條斷裂力為16 、20 N,B 組為10、14、18 N。組織學(xué)觀察示,A 組瘢痕組織范圍??;B 組見皮膚潰瘍面和其下的纖維結(jié)締組織,伴炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。 結(jié)論 孕晚期行宮內(nèi)手術(shù)修補(bǔ)胎羊腹壁缺損可行;對(duì)于腹壁缺損較小者可直接縫合修補(bǔ),缺損較大者可采用生物型補(bǔ)片修補(bǔ)。
目的 研究脫細(xì)胞血管基質(zhì)快速高效的制備方法并對(duì)其進(jìn)行生物相容性評(píng)價(jià),為組織工程血管的研究尋找合適的支架材料。 方法 取20 根長(zhǎng)50 mm 新鮮山羊頸動(dòng)脈經(jīng)—80℃冷凍、37℃水浴復(fù)溫,反復(fù)凍融3 次,在506 MPa、4℃條件下超高壓處理20 min,0.125%SDS 中37℃振搖(100 r/min)12 h,徹底去除細(xì)胞后,行HE 染色、Masson染色、掃描電鏡觀察及生物力學(xué)測(cè)定研究其組織結(jié)構(gòu)的變化;Hoechst33258 熒光染色和細(xì)胞DNA 殘留量分析評(píng)價(jià)脫細(xì)胞效果;通過接觸細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)、MTT 活性測(cè)試及皮下埋植實(shí)驗(yàn)對(duì)制備的脫細(xì)胞血管基質(zhì)進(jìn)行生物相容性分析。皮下埋植實(shí)驗(yàn)取清潔級(jí)SD 大鼠10 只,體重200 ~ 230 g,分為2 組(n=5),實(shí)驗(yàn)組于大鼠背部皮下埋植結(jié)合物理化學(xué)方法處理的脫細(xì)胞血管基質(zhì),對(duì)照組埋植單純物理方法處理的脫細(xì)胞血管基質(zhì),分別于術(shù)后1、2、3、4、8 周取出行HE 染色觀察。 結(jié) 果 HE 染色及Masson 染色顯示脫細(xì)胞血管基質(zhì)無細(xì)胞成分殘留,保持較完整的膠原成分;掃描電鏡觀察血管表面以膠原為主,適合細(xì)胞黏附;Hoechst33258 熒光染色脫細(xì)胞血管基質(zhì)材料未見明顯陽(yáng)性核染色;苯酚- 氯仿提取脫細(xì)胞血管基質(zhì)殘留DNA 含量,電泳檢測(cè)分析顯示其中DNA 含量較正常血管顯著降低;生物力學(xué)檢測(cè)示脫細(xì)胞血管基質(zhì)最大荷載時(shí)的應(yīng)力及應(yīng)變與正常血管比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,保持了正常血管的力學(xué)特征;接觸細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)與MTT 法測(cè)定示脫細(xì)胞血管基質(zhì)與細(xì)胞有良好的黏附性,細(xì)胞毒性為0 ~ 1 級(jí);實(shí)驗(yàn)組皮下埋植術(shù)后8 周材料周圍基本未見炎性細(xì)胞,對(duì)照組仍有明顯淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。 結(jié)論 經(jīng)反復(fù)凍融、超高壓及小劑量SDS 處理的脫細(xì)胞血管基質(zhì)是一種構(gòu)建組織工程血管的理想支架材料。
目的 以雜交波爾山羊?yàn)閷?shí)驗(yàn)對(duì)象,進(jìn)行宮內(nèi)手術(shù)制備先天性腭裂動(dòng)物模型,為研究先天性腭裂畸形對(duì)面中部發(fā)育的影響及早期宮內(nèi)修復(fù)提供適合的動(dòng)物模型。 方法 取20 只8 ~ 12 月齡雌性雜交波爾山羊,體重35 ~ 55 kg,以配種日期定為孕0 d,于孕30 d 經(jīng)B 超確認(rèn)懷孕后隨機(jī)分為兩組。實(shí)驗(yàn)組14 只于孕65 d 行宮內(nèi)手術(shù),形成胎羊口鼻腔穿通腭裂;對(duì)照組6 只不作處理,作為正常對(duì)照。于孕120 d 及出生后1、3 個(gè)月,行大體觀察以及頭顱CT 三維重建,測(cè)量上頜最前磨牙前方的兩側(cè)凹陷處間距(PPMM),并以此線為基準(zhǔn)測(cè)量上頜骨最前點(diǎn)至此線的垂直距離(APMM)。 結(jié)果 術(shù)后實(shí)驗(yàn)組山羊因并發(fā)癥死亡2 只,流產(chǎn)3 只,最終造模成功9 只;手術(shù)成功率為64.3%。除孕120 d 取出胎羊外,兩組均順利產(chǎn)下小羊。實(shí)驗(yàn)組在孕120 d 時(shí)即出現(xiàn)上頜發(fā)育不足,出生后1、3 個(gè)月更明顯不足;對(duì)照組上頜骨發(fā)育正常。兩組各時(shí)間點(diǎn)PPMM及APMM比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P lt; 0.05)。實(shí)驗(yàn)組6 只小羊存活1 ~ 4 個(gè)月;均因小羊咀嚼功能差,不能正常吮吸母乳,常發(fā)生誤吸,導(dǎo)致肺部感染死亡。 結(jié)論 采用宮內(nèi)手術(shù)方法切除部分次生腭中線處組織造成口鼻腔穿通,可制備先天性腭裂山羊模型。