目的 研究脫細(xì)胞血管基質(zhì)快速高效的制備方法并對其進(jìn)行生物相容性評價(jià),為組織工程血管的研究尋找合適的支架材料。 方法 取20 根長50 mm 新鮮山羊頸動脈經(jīng)—80℃冷凍、37℃水浴復(fù)溫,反復(fù)凍融3 次,在506 MPa、4℃條件下超高壓處理20 min,0.125%SDS 中37℃振搖(100 r/min)12 h,徹底去除細(xì)胞后,行HE 染色、Masson染色、掃描電鏡觀察及生物力學(xué)測定研究其組織結(jié)構(gòu)的變化;Hoechst33258 熒光染色和細(xì)胞DNA 殘留量分析評價(jià)脫細(xì)胞效果;通過接觸細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)、MTT 活性測試及皮下埋植實(shí)驗(yàn)對制備的脫細(xì)胞血管基質(zhì)進(jìn)行生物相容性分析。皮下埋植實(shí)驗(yàn)取清潔級SD 大鼠10 只,體重200 ~ 230 g,分為2 組(n=5),實(shí)驗(yàn)組于大鼠背部皮下埋植結(jié)合物理化學(xué)方法處理的脫細(xì)胞血管基質(zhì),對照組埋植單純物理方法處理的脫細(xì)胞血管基質(zhì),分別于術(shù)后1、2、3、4、8 周取出行HE 染色觀察。 結(jié) 果 HE 染色及Masson 染色顯示脫細(xì)胞血管基質(zhì)無細(xì)胞成分殘留,保持較完整的膠原成分;掃描電鏡觀察血管表面以膠原為主,適合細(xì)胞黏附;Hoechst33258 熒光染色脫細(xì)胞血管基質(zhì)材料未見明顯陽性核染色;苯酚- 氯仿提取脫細(xì)胞血管基質(zhì)殘留DNA 含量,電泳檢測分析顯示其中DNA 含量較正常血管顯著降低;生物力學(xué)檢測示脫細(xì)胞血管基質(zhì)最大荷載時(shí)的應(yīng)力及應(yīng)變與正常血管比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,保持了正常血管的力學(xué)特征;接觸細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)與MTT 法測定示脫細(xì)胞血管基質(zhì)與細(xì)胞有良好的黏附性,細(xì)胞毒性為0 ~ 1 級;實(shí)驗(yàn)組皮下埋植術(shù)后8 周材料周圍基本未見炎性細(xì)胞,對照組仍有明顯淋巴細(xì)胞浸潤。 結(jié)論 經(jīng)反復(fù)凍融、超高壓及小劑量SDS 處理的脫細(xì)胞血管基質(zhì)是一種構(gòu)建組織工程血管的理想支架材料。
引用本文: 張蔓菁,劉賓,楊陽,李楊,魯開化. 羊頸動脈脫細(xì)胞血管基質(zhì)的制備及其生物相容性評價(jià). 中國修復(fù)重建外科雜志, 2010, 24(7): 843-849. doi: 復(fù)制