目的 應(yīng)用重組腺相關(guān)病毒2（recombinant adeno-associated virus 2，rAAV2）介導(dǎo)hTGF-β1 基因體內(nèi)轉(zhuǎn)染兔退變椎間盤髓核細(xì)胞，觀察基因產(chǎn)物的表達(dá)及其對(duì)退變髓核細(xì)胞蛋白多糖合成的生物調(diào)節(jié)作用。 方法 于24 只成年新西蘭大白兔，雌雄不限，體重1.7 ～ 2.2 kg，L1、2、L2、3、L3、4、L4、5 椎間盤注射25 μL 濃度為1 mmol/L 的纖維結(jié)合素片段（fibronectin fragment，F(xiàn)n-f）制備椎間盤退變模型，注射Fn-f 4 周時(shí)的造模椎間盤模擬早期退變的椎間盤。將24 只兔隨機(jī)分為3 組（n=8），A、B、C 組分別于造模椎間盤髓核內(nèi)注射25 μL rAAV2-hTGF-β1（1 × 1012 vg/mL）、rAAV2- 增強(qiáng)綠色熒光蛋白（enhanced green fluorescent protein，EGFP，rAAV2-EGFP）、PBS。術(shù)后1 周A、C 組各處死2 只兔，取髓核組織采用免疫組織化學(xué)染色觀察hTGF-β1 的表達(dá)；術(shù)后4、8、12 周每組取2 只兔髓核組織，35S 整合分析法檢測(cè)新合成蛋白多糖的含量；術(shù)后12 周處死B 組2 只兔，熒光顯微鏡觀察髓核組織中EGFP 的表達(dá)。 結(jié)果 術(shù)后1 周，免疫組織化學(xué)染色示A 組髓核細(xì)胞及基質(zhì)中廣泛存在強(qiáng)陽性染色顆粒，C 組僅存在少量陽性顆粒。35S 整合法檢測(cè)示，各時(shí)間點(diǎn)A 組35S 蛋白多糖合成率均高于B、C 組，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05） ；B、C 組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。術(shù)后12周， 熒光顯微鏡下觀察B 組盤髓核組織可見大量綠色熒光表達(dá)。 結(jié)論 新型基因轉(zhuǎn)導(dǎo)載體rAAV2 可有效介導(dǎo)hTGF-β1基因體內(nèi)轉(zhuǎn)染兔退變髓核細(xì)胞，基因產(chǎn)物可持續(xù)表達(dá)超過12 周，hTGF-β1 可有效促進(jìn)退變髓核細(xì)胞蛋白多糖的合成。
目的 褪黑素可提高軟骨生長因子的表達(dá)，刺激軟骨基質(zhì)的合成；通過觀察注射褪黑素后大鼠骨性關(guān)節(jié)炎（osteoarthritis，OA）關(guān)節(jié)軟骨中BMP-2 和IL-1β 的表達(dá)，探討褪黑素對(duì)損傷軟骨的防治作用。 方法 SPF 級(jí)4 周齡SD 雄性大鼠40 只，體重120 ～ 150 g，隨機(jī)分為4 組，每組10 只。正常對(duì)照組（A 組）大鼠不作任何處理。OA 模型組（B組）、OA 模型/ 去松果體模型組（C 組）、OA 模型/ 去松果體模型/ 褪黑素治療組（D 組）于大鼠左膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射0.2 mL濃度為4% 的木瓜蛋白酶溶液，每2 天1 次，共2 周，制備大鼠OA 模型。木瓜蛋白酶注射2 周后，將C、D 組大鼠置于持續(xù)24 h（光照度為500 lx）光照環(huán)境中，制備去松果體模型。D組于制備去松果體模型第2 天開始于左膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射0.2 mL濃度為20 mg/mL 的褪黑素溶液，每周4 次，共4 周。在最后1 次注射褪黑素1 周后，抽取A、B、C 組大鼠心尖處血液應(yīng)用ELISA 法檢測(cè)血清褪黑素水平；之后處死各組動(dòng)物，取材行大體觀察、組織學(xué)及免疫組織化學(xué)染色觀察。 結(jié)果 模型制備后大鼠均存活。A、B、C 組相同時(shí)間點(diǎn)血清中褪黑素水平比較以及同組各時(shí)間點(diǎn)比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。A 組關(guān)節(jié)軟骨表面光滑平整，有彈性；軟骨細(xì)胞排列整齊。B、C 組關(guān)節(jié)軟骨表面粗糙，局部區(qū)域軟骨面可見缺損及軟骨下骨外露現(xiàn)象；軟骨細(xì)胞排列及結(jié)構(gòu)較紊亂。D 組關(guān)節(jié)軟骨表面較B、C 組平整，軟骨缺損及外露現(xiàn)象減少；軟骨細(xì)胞排列及結(jié)構(gòu)較整齊。各組組織學(xué)及BMP-2、IL-1β 免疫組織化學(xué)染色觀察Mankin 評(píng)分及積分吸光度值比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。 結(jié)論 持續(xù)光照能加速大鼠OA 關(guān)節(jié)軟骨的退變。采用0.2 mL 濃度為20 mg/mL 的褪黑素溶液于關(guān)節(jié)腔注射4 周后能夠延緩大鼠OA 的進(jìn)一步退變，其作用機(jī)制可能與上調(diào)軟骨生長因子BMP-2 及下調(diào)炎性因子IL-1β 表達(dá)有關(guān)。