目的 應(yīng)用重組腺相關(guān)病毒2（recombinant adeno-associated virus 2，rAAV2）介導(dǎo)hTGF-β1 基因體內(nèi)轉(zhuǎn)染兔退變椎間盤(pán)髓核細(xì)胞，觀(guān)察基因產(chǎn)物的表達(dá)及其對(duì)退變髓核細(xì)胞蛋白多糖合成的生物調(diào)節(jié)作用。 方法 于24 只成年新西蘭大白兔，雌雄不限，體重1.7 ～ 2.2 kg，L1、2、L2、3、L3、4、L4、5 椎間盤(pán)注射25 μL 濃度為1 mmol/L 的纖維結(jié)合素片段（fibronectin fragment，F(xiàn)n-f）制備椎間盤(pán)退變模型，注射Fn-f 4 周時(shí)的造模椎間盤(pán)模擬早期退變的椎間盤(pán)。將24 只兔隨機(jī)分為3 組（n=8），A、B、C 組分別于造模椎間盤(pán)髓核內(nèi)注射25 μL rAAV2-hTGF-β1（1 × 1012 vg/mL）、rAAV2- 增強(qiáng)綠色熒光蛋白（enhanced green fluorescent protein，EGFP，rAAV2-EGFP）、PBS。術(shù)后1 周A、C 組各處死2 只兔，取髓核組織采用免疫組織化學(xué)染色觀(guān)察hTGF-β1 的表達(dá)；術(shù)后4、8、12 周每組取2 只兔髓核組織，35S 整合分析法檢測(cè)新合成蛋白多糖的含量；術(shù)后12 周處死B 組2 只兔，熒光顯微鏡觀(guān)察髓核組織中EGFP 的表達(dá)。 結(jié)果 術(shù)后1 周，免疫組織化學(xué)染色示A 組髓核細(xì)胞及基質(zhì)中廣泛存在強(qiáng)陽(yáng)性染色顆粒，C 組僅存在少量陽(yáng)性顆粒。35S 整合法檢測(cè)示，各時(shí)間點(diǎn)A 組35S 蛋白多糖合成率均高于B、C 組，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05） ；B、C 組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。術(shù)后12周， 熒光顯微鏡下觀(guān)察B 組盤(pán)髓核組織可見(jiàn)大量綠色熒光表達(dá)。 結(jié)論 新型基因轉(zhuǎn)導(dǎo)載體rAAV2 可有效介導(dǎo)hTGF-β1基因體內(nèi)轉(zhuǎn)染兔退變髓核細(xì)胞，基因產(chǎn)物可持續(xù)表達(dá)超過(guò)12 周，hTGF-β1 可有效促進(jìn)退變髓核細(xì)胞蛋白多糖的合成。
引用本文： 劉海飛,寧斌,王德春,胡有谷. 重組腺相關(guān)病毒2 介導(dǎo)hTGF-β1 基因體內(nèi)轉(zhuǎn)染兔退變髓核細(xì)胞對(duì)蛋白多糖含量的影響. 中國(guó)修復(fù)重建外科雜志, 2010, 24(5): 618-621. doi: 復(fù)制
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