【摘 要】 目的 對(duì)近年TGF-β1/Smad3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路與創(chuàng)傷后瘢痕形成的相關(guān)研究作一綜述。 方法 廣泛查閱國內(nèi)外近年有關(guān)TGF-β1/Smad3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路及與創(chuàng)傷后瘢痕形成的文獻(xiàn)，并進(jìn)行綜述。 結(jié)果 TGF-β1是纖維化疾病的重要影響因子，通過TGF-β1/Smad3信號(hào)通路轉(zhuǎn)導(dǎo)產(chǎn)生其生物學(xué)效應(yīng)。該途徑受多種因子調(diào)控并在細(xì)胞及分子水平與其他信號(hào)通路串話。該途徑參與創(chuàng)傷后早期炎性反應(yīng)、創(chuàng)面愈合及后期病理性瘢痕的形成。在分子水平干預(yù)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的各個(gè)環(huán)節(jié)，可以影響纖維化及細(xì)胞外基質(zhì)沉著的進(jìn)程。 結(jié)論 TGF-β1/Smad3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑是影響創(chuàng)傷后瘢痕形成及細(xì)胞外基質(zhì)沉著的重要途徑。對(duì)該途徑進(jìn)行深入研究，可為臨床促進(jìn)創(chuàng)面的愈合及病理性瘢痕的防治奠定理論基礎(chǔ)。
目的 通過比較瘢痕疙瘩及正常皮膚中細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶（extracellular signal-regulated kinase，ERK）、應(yīng)激活化蛋白激酶（c-Jun amino-terminal kinase，JNK）信號(hào)通路的表達(dá)，探討其在瘢痕疙瘩形成中的作用。 方法 取四川大學(xué)華西醫(yī)院燒傷整形科收治的26 例患者皮膚組織，其中行瘢痕疙瘩切除患者（實(shí)驗(yàn)組）16 例，瘢痕疙瘩形成時(shí)間8 個(gè)月～ 10 年；胸部6 例，耳垂4 例，會(huì)陰部2 例，肩部3 例，腹部1 例；均經(jīng)病理檢查確診為瘢痕疙瘩。10 例整形手術(shù)患者自愿捐贈(zèng)的正常皮膚作為對(duì)照組，腹部4 例，大腿3 例，肩部2 例，背部1 例。取標(biāo)本采用Envision 二步法行免疫組織化學(xué)染色，觀察磷酸化及非磷酸化JNK 和ERK 表達(dá)情況，并采用Image Pro Plus 4.5 圖像分析系統(tǒng)測定積分吸光度（IA）值，觀察陽性染色強(qiáng)度。 結(jié)果 免疫組織化學(xué)染色觀察顯示，對(duì)照組正常皮膚成纖維細(xì)胞中未見明顯的磷酸化及非磷酸化ERK、JNK 陽性表達(dá)；而實(shí)驗(yàn)組主要在成纖維細(xì)胞中表達(dá)，陽性顆粒主要位于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核內(nèi)。實(shí)驗(yàn)組磷酸化ERK 及JNK 的IA 值明顯高于對(duì)照組（P lt; 0.05），非磷酸化ERK 及JNK 兩組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。 結(jié)論 磷酸化JNK、ERK 信號(hào)通路蛋白在瘢痕疙瘩中異常高表達(dá)，提示該通路可能與瘢痕疙瘩形成密切相關(guān)。
目的 探討構(gòu)建包含瘢痕疙瘩、瘢痕疙瘩周圍皮膚和正常皮膚的組織芯片方法。 方法 標(biāo)本均由2009 年3 月－ 5 月收治患者自愿捐贈(zèng)，其中瘢痕疙瘩組27 例，瘢痕疙瘩周圍皮膚組13 例，正常皮膚組27 例。根據(jù)瘢痕疙瘩組織和皮膚的組織學(xué)特點(diǎn)和實(shí)驗(yàn)需要，對(duì)傳統(tǒng)組織芯片制作和切片方法進(jìn)行改良。采集實(shí)驗(yàn)標(biāo)本后行石蠟包埋制備供體蠟塊，制作黏附平臺(tái)，用取樣針依次鉆取組織芯并固定于黏附平臺(tái)。將組織芯與黏附平臺(tái)整體移入包埋鑄模，預(yù)熱后，注入70℃溶蠟填滿鑄模，室溫冷卻為組織芯片蠟塊。切片后行HE 染色、免疫組織化學(xué)染色觀察，并與傳統(tǒng)方法制備的組織芯片進(jìn)行比較。 結(jié)果 改良法構(gòu)建的組織芯片蠟塊包含67 個(gè)位點(diǎn)，表面平整，外觀無明顯裂紋，位點(diǎn)完整、分布均一、無明顯移位。HE 染色示各位點(diǎn)厚薄均勻、染色層次分明、對(duì)比明顯、邊緣銳利，符合原始病理診斷；免疫組織化學(xué)染色示組織芯片中各個(gè)位點(diǎn)染色后組織量充足，能夠滿足對(duì)染色結(jié)果進(jìn)行對(duì)比的要求。而傳統(tǒng)法制作的組織芯片HE 染色示多個(gè)位點(diǎn)缺失，個(gè)別位點(diǎn)移位明顯。 結(jié)論 采用改良法能夠成功制作包含瘢痕疙瘩、瘢痕疙瘩周圍皮膚和正常皮膚的組織芯片，構(gòu)建的組織芯片將成為研究瘢痕疙瘩發(fā)病機(jī)制的有效工具。
【摘 要】 目的 探討耳部瘢痕疙瘩手術(shù)切除方式和術(shù)后放療等綜合治療的療效。 方法 2000 年1 月－ 2005 年12 月收治42 例（71 側(cè)）耳部瘢痕疙瘩患者。男8 例，女34 例；年齡16 ～ 50 歲，平均26.2 歲。病程6 個(gè)月～ 4 年。穿耳孔32 例，創(chuàng)傷7 例，耳部病變手術(shù)3 例。瘢痕疙瘩范圍0.3 cm × 0.3 cm × 0.2 cm ～ 6.0 cm × 4.0 cm × 1.0 cm，形狀呈球形、啞鈴形、結(jié)節(jié)形。根據(jù)瘢痕疙瘩不同大小和范圍，選擇不同術(shù)式，切除瘢痕并行缺損修復(fù)。術(shù)后24 h 內(nèi)，高能電子束照射10 次，每次2 Gy，總劑量20 Gy，對(duì)有復(fù)發(fā)傾向者，及時(shí)行“得寶松” 1 mg 及2％利多卡因按1 ∶ 3 混合液局部瘢痕內(nèi)注射3 次，每3 周1 次。 結(jié)果 術(shù)后患者切口均Ⅰ期愈合，皮瓣均成活。37 例（64 側(cè)）獲隨訪1 年，獲臨床治愈；5 例（7 側(cè)）于術(shù)后3 ～ 6 個(gè)月有復(fù)發(fā)傾向，及時(shí)局部注射“得寶松”后未見復(fù)發(fā)。根據(jù)劉文閣等療效標(biāo)準(zhǔn)判定治愈37 例，顯效5 例。 結(jié)論 耳部瘢痕疙瘩盡早采用個(gè)體化手術(shù)方式，結(jié)合早期放療，可取得滿意效果，是治療的選擇方案之一。
【摘 要】 目的 了解病理性瘢痕（增生性瘢痕與瘢痕疙瘩）中脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物和銅鋅超氧化物歧化酶（copper，zinc-superoxide dismutase，CuZn-SOD）的變化。 方法 取2005 年5 月－ 2005 年8 月收治患者自愿捐獻(xiàn)的標(biāo)本。瘢痕疙瘩組10 例，年齡16 ～ 35 歲，平均病程2.2 年；增生性瘢痕組10 例，年齡17 ～ 32 歲，平均病程8 個(gè)月；正常皮膚組8 例，年齡16 ～ 34 歲。應(yīng)用化學(xué)比色法測定3 組標(biāo)本中 CuZn-SOD 活力和丙二醛（malonaldehyde，MDA）含量，采用免疫組織化學(xué)方法觀察CuZn-SOD 蛋白在病理性瘢痕中的表達(dá)，并對(duì)其進(jìn)行評(píng)分。 結(jié)果 正常皮膚組、增生性瘢痕組及瘢痕疙瘩組MDA 含量分別為（0.821 3 ± 0.086 4）、（1.139 0 ± 0.106 7）、（1.190 0 ± 0.074 8）nmol/mg prot；CuZn-SOD 活力分別為（20.60 ± 5.56）、（31.65 ± 2.21）、（34.36 ± 5.01）U/mg prot。增生性瘢痕組和瘢痕疙瘩組MDA 含量與CuZn-SOD 活力同正常皮膚組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）；增生性瘢痕組及瘢痕疙瘩組間比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。免疫組織化學(xué)染色觀察：3 組表皮角質(zhì)形成細(xì)胞和真皮成纖維細(xì)胞均有CuZn-SOD 蛋白陽性表達(dá)。正常皮膚組、增生性瘢痕組及瘢痕疙瘩組在表皮角質(zhì)形成細(xì)胞中免疫組織化學(xué)評(píng)分分別為（2.20 ± 0.45）、（4.14 ± 0.90）、（4.43 ± 0.79）分；在真皮成纖維細(xì)胞中評(píng)分分別為（1.60 ± 0.89）、（4.00 ± 0.82）、（4.43 ± 0.53）分。增生性瘢痕組和瘢痕疙瘩組CuZn-SOD 蛋白表達(dá)與正常皮膚組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）；增生性瘢痕組及瘢痕疙瘩組間比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt;0.05）。 結(jié)論 病理性瘢痕中脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA 含量增加，CuZn-SOD 活力升高、表達(dá)增強(qiáng)。
目的 觀察并探討p53 基因表達(dá)及其72 位編碼子基因多態(tài)性對(duì)瘢痕疙瘩臨床表型的影響。 方 法 取35 例自愿捐獻(xiàn)瘢痕疙瘩組織，男19 例，女16 例；病程4 個(gè)月～ 8 年。同時(shí)收集自身外周血作基因型分析。根據(jù)觀察范圍不同，實(shí)驗(yàn)共分為兩組（n=35）。中央組：各瘢痕疙瘩中央部（中央2/3 半徑范圍內(nèi)）；周邊組：各瘢痕疙瘩周邊部（周邊1/3 半徑范圍內(nèi)）。兩組再根據(jù)瘢痕疙瘩最大橫徑大小分3 個(gè)亞組：lt; 1 cm 為小體積組（n=5），1 ～ 3 cm 為中體積組（n=21），gt; 3 cm 為大體積組（n=9）。采用PCR 法擴(kuò)增p53 基因外顯子4，并進(jìn)行基因測序；免疫組織化學(xué)方法檢測P53蛋白表達(dá)變化；TUNEL 法檢測瘢痕疙瘩組織中成纖維細(xì)胞凋亡，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果 瘢痕疙瘩p53 遺傳基因型為Arg/Arg 者7 例，Pro/Arg 者21 例，Pro/Pro 者7 例，與臨床表型分布有相關(guān)性（P lt; 0.05）；中、小體積周邊組及中央組P53 蛋白染色陽性，大體積周邊組偶見細(xì)胞染色陽性?；蛐蜑锳rg/Arg、Arg/Pro 及Pro/Pro 的標(biāo)本吸光度值分別為3 439.359 8 ± 538.527 5、3 273.186 2 ± 375.213 9 及1 691.372 9 ± 98.989 3，各基因型間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05） ；TUNEL 法檢測成纖維細(xì)胞凋亡，鏡下可見凋亡細(xì)胞呈均勻分布，大、中、小體積周邊組凋亡細(xì)胞指數(shù)分別為31.000 0 ±3.266 0、42.300 0 ± 4.354 8、44.600 0 ± 5.253 6，各組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。 結(jié) 論 瘢痕疙瘩臨床表型與P53 蛋白表達(dá)密切相關(guān)，組織中p53 基因72 位編碼子基因多態(tài)性的變異有利于瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞凋亡。
目的 探討瘢痕疙瘩患者TNF 受體Ⅱ（TNF receptor Ⅱ，TNFR- Ⅱ）基因1 573 位點(diǎn)突變的情況。 方 法 收集22 例自愿捐獻(xiàn)的經(jīng)臨床及病理確診的瘢痕疙瘩標(biāo)本，其中男6 例，女16 例；年齡18 ～ 53 歲。設(shè)患者自身外周靜脈血標(biāo)本為正常對(duì)照。提取基因組DNA，PCR 擴(kuò)增TNFR- Ⅱ基因1 573 位點(diǎn)片段，DNA 測序，將測序結(jié)果與GeneBank 比較。 結(jié)果 實(shí)驗(yàn)提取DNA 濃度均gt; 0.5 μg/μL，純度（A260/A280）均gt; 1.5，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測，與所設(shè)計(jì)DNA 片段大小相近，符合實(shí)驗(yàn)要求。13 例瘢痕疙瘩標(biāo)本檢測示不同程度突變，突變率為59.1%；9 例1 663 編碼子發(fā)生點(diǎn)突變，占總數(shù)的40.9%。與外周靜脈血比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.01）。突變類型主要為點(diǎn)突變、插入、缺失，為多位點(diǎn)、多類型，呈多態(tài)性。 結(jié)論 TNFR- Ⅱ基因1 573 位點(diǎn)突變與瘢痕疙瘩的發(fā)生有關(guān)。
目的 探討wt-P53蛋白對(duì)人瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞（keloid fibroblasts,KFBs）端粒酶活性的影響；明確在人KFBs中wt-P53蛋白與端粒酶活性之間的相互關(guān)系。方法 將來源于人瘢痕疙瘩組織的KFBs隨機(jī)分成兩組，轉(zhuǎn)染組采用腺病毒介導(dǎo)法將野生型wt-p53基因轉(zhuǎn)染至人KFBs；非轉(zhuǎn)染組KFBs未進(jìn)行野生型wt-p53基因轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染48 h后，采用間接免疫熒光法和Western blotting法檢測KFBs wt-P53蛋白的表達(dá)；并于轉(zhuǎn)染后1～7 d，采用TRAP-ELISA法檢測KFBs端粒酶活性。結(jié)果 兩組均有wt-P53蛋白表達(dá)，轉(zhuǎn)染組wt-P53蛋白表達(dá)明顯高于非轉(zhuǎn)染組；轉(zhuǎn)染后1～7 d, 轉(zhuǎn)染組端粒酶活性均明顯低于非轉(zhuǎn)染組（P＜0.05結(jié)論 wt-P53蛋白能夠抑制人KFBs端粒酶活性。
目的 探討瘢痕疙瘩家系標(biāo)本中Fas基因 (外顯子7～9)有無突變以及Fas基因突變在瘢痕疙瘩形成中的意義。方法 實(shí)驗(yàn)標(biāo)本來自南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院整形外科2005年收集的A、B兩個(gè)瘢痕疙瘩家系。采用PCR及基因測序技術(shù)，分別以A家系2例男性患者的瘢痕疙瘩組織為研究對(duì)象, 以其周圍正常皮膚及外周靜脈血作為自身對(duì)照，其配偶的外周靜脈血作為正常對(duì)照，并以B家系2例患者(母親與兒子)的外周靜脈血作為不同家系之間的對(duì)照，共檢測10份標(biāo)本中Fas基因外顯子7～9基因序列。結(jié)果 10份瘢痕疙瘩家系標(biāo)本Fas基因的7、8外顯子均未發(fā)生突變，2例瘢痕疙瘩組織標(biāo)本均在外顯子9編碼區(qū)的11 bp和53 bp兩個(gè)位點(diǎn)上存在單個(gè)堿基基因突變或多態(tài)性改變。結(jié)論 瘢痕疙瘩Fas基因死亡域外顯子9區(qū)段的基因結(jié)構(gòu)異常，極有可能與Fas蛋白的功能改變有關(guān)，從而導(dǎo)致局部瘢痕疙瘩形成。
目的 利用抑制消減雜交（suppression subtractive hybridization，SSH）技術(shù)，比較瘢痕疙瘩與正常皮膚組織之間基因表達(dá)差異，篩選瘢痕疙瘩特有的差異表達(dá)基因片段，為揭示瘢痕疙瘩的病因提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法 提取瘢痕疙瘩與正常皮膚組織細(xì)胞mRNA，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。以瘢痕疙瘩cDNA為檢測子，正常皮膚組織細(xì)胞cDNA為驅(qū)動(dòng)子，選擇四堿基內(nèi)切酶RsaⅠ將cDNA酶切；連接特殊設(shè)計(jì)的接頭進(jìn)行消減雜交和PCR反應(yīng)，得到消減混合物，與T載體連接，轉(zhuǎn)化DH5α感受態(tài)細(xì)菌，建立差異消減文庫。Southern雜交篩選鑒定差異基因，進(jìn)行測序和同源分析。結(jié)果 經(jīng)SSH篩選、Southern雜交鑒定得到13個(gè)瘢痕疙瘩差異表達(dá)基因，其中已知功能的基因11個(gè)，如TA結(jié)合因子1、E4基因轉(zhuǎn)錄因子1、ephrin B2型受體基因、血小板生長因子受體基因等；有與腫瘤發(fā)生有關(guān)的基因，如G抗原7基因等；未知功能基因2個(gè)。結(jié)論 篩選得到的瘢痕疙瘩差異表達(dá)基因，對(duì)了解瘢痕疙瘩發(fā)生發(fā)展的病因?qū)W基礎(chǔ)和指導(dǎo)臨床治療具有重要意義。