目的 觀察川芎嗪（TMP）對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs）缺氧相關(guān)因子表達(dá)的影響。方法 體外培養(yǎng)HUVECs，取2~5代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。將HUVECs分為對(duì)照組、氯化鈷（CoCl2）缺氧組及50、100、200 mu;mol/L TMP藥物處理組。對(duì)照組不作任何處理。CoCl2缺氧組利用150 mu;mol/L的CoCl2干預(yù)HUVECs 4 h；50、100、200 mu;mol/L TMP藥物處理組在CoCl2干預(yù)HUVECs 4 h后，再加入不同濃度TMP繼續(xù)培養(yǎng)8 h。分別提取各組細(xì)胞RNA和總蛋白，采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）和蛋白免疫印跡法（Western blot）檢測(cè)脯氨酰羥化酶2（PHD2）、缺氧誘導(dǎo)因子-1alpha;（HIF-1alpha;）、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）mRNA和蛋白的表達(dá)。結(jié)果 實(shí)時(shí)RT-PCR檢測(cè)結(jié)果 顯示，與對(duì)照組比較，CoCl2缺氧組PHD2 mRNA表達(dá)下降（t=3.734），HIF-1alpha;和VEGF mRNA表達(dá)升高（t=4.589、3.926），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。50、100、200 mu;mol/L TMP藥物處理組分別與CoCl2缺氧組比較，PHD2 mRNA表達(dá)均升高（t=3.286、3.617、3.886），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；HIF-1alpha; mRNA表達(dá)均無明顯變化（t=1.025、0.726、-1.386），差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；VEGF mRNA表達(dá)均有所下降，但50 mu;mol/L TMP藥物處理組與之差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=1.696，P＞0.05），100、200 mu;mol/L TMP藥物處理組與之差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=2.974、3.492，P＜0.05）。Western blot檢測(cè)結(jié)果 顯示，與對(duì)照組比較，CoCl2缺氧組PHD2蛋白表達(dá)下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=3.122，P＜0.05）；HIF-1alpha;及VEGF蛋白表達(dá)均有不同程度升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=3.778、3.257，P＜0.05）。50、100、200 mu;mol/L TMP藥物處理組分別與CoCl2缺氧組比較，PHD2 蛋白表達(dá)均升高（t=2.813、3.026、3.078），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；HIF-1alpha;、VEGF蛋白表達(dá)均有所下降，但50 mu;mol/L TMP藥物處理組與之差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=2.056、1.986，P＞0.05），100 mu;mol/L TMP藥物處理組（t=3.058、2.976）及200 mu;mol/L TMP藥物處理組（t=3.828、3.136）與之差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論 TMP能上調(diào)缺氧HUVECs中PHD2 mRNA和蛋白的表達(dá)，下調(diào)HIF-1alpha;蛋白、VEGF mRNA和蛋白的表達(dá)。
目的 觀察高糖誘導(dǎo)人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞（HRECs）脯氨酸羥化酶2(PHD2)的表達(dá)變化和對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞屏障功能的影響。方法 將培養(yǎng)至融合的HRECs分為三組，分別為正常對(duì)照組、甘露醇對(duì)照組與高糖組。正常對(duì)照組細(xì)胞培養(yǎng)液含5 mmol/L葡萄糖，甘露醇對(duì)照組細(xì)胞培養(yǎng)液含5 mmol/L葡萄糖和25 mmol/L甘露醇，高糖組細(xì)胞培養(yǎng)液含30 mmol/L葡萄糖。培養(yǎng)24、48 h后收集細(xì)胞蛋白、上清液及RNA。蛋白免疫印跡法檢測(cè)細(xì)胞PHD2、缺氧誘導(dǎo)因子-1alpha;（HIF-1alpha;）及緊密連接蛋白o(hù)ccludin的蛋白表達(dá)水平；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞上清液中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）的含量；實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)細(xì)胞PHD2、HIF-1alpha;、VEGF及occludin基因的轉(zhuǎn)錄水平；相對(duì)分子質(zhì)量7times;104的異硫氰酸熒光素標(biāo)記的葡聚糖檢測(cè)細(xì)胞旁通透性。結(jié)果 與正常對(duì)照組相比，甘露醇對(duì)照組與高糖組HRECs中PHD2蛋白表達(dá)水平均先降低后升高，HIF-1alpha;表達(dá)升高，occludin表達(dá)降低；高糖組細(xì)胞上清液中VEGF含量增加，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（PHD2：F=7.618、8.627，P＜0.05；HIF-1alpha;：chi;2=7.692、7.652，P＜0.05；occludin：F=23.23、7.317，P＜0.05；VEGF：F=10.768、4.562，P＜0.05）。與正常對(duì)照組相比，甘露醇對(duì)照組與高糖組HRECs的PHD2、HIF-1alpha;、VEGF及occludin基因轉(zhuǎn)錄水平升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（PHD2：F=5.69、14.27，P＜0.05；HIF-1alpha;：F=6.07、10.47，P＜0.05；VEGF：F=12.31、9.14，P＜0.05；occludin：F=8.77、8.00，P＜0.05）。與正常對(duì)照組相比，甘露醇對(duì)照組與高糖組細(xì)胞旁通透性增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（chi;2=20.57、F=56.09，P＜0.05）。結(jié)論 高糖誘導(dǎo)HRECs PHD2表達(dá)發(fā)生變化。PHD2可能在內(nèi)皮細(xì)胞屏障破壞中發(fā)揮一定的調(diào)控作用，其機(jī)制與HIF-1alpha;、VEGF有關(guān)。