目的探究低氧三維培養(yǎng)微環(huán)境對骨髓間充質(zhì)干細胞增殖的影響及影響機制。 方法P5 代小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞和聚-3 羥基丁酸酯-co-4 羥基丁酸酯［P（3HB-co-4HB）］分別在三維常氧（20%）和三維低氧（4%）條件下共同培養(yǎng)，24 h 后 CCK-8 法測定兩組細胞的增殖情況；12 h 后實時熒光定量 PCR（real-time quantitative PCR）檢測 HIF-1α 基因表達水平；24 h 后 Western blotting 檢測兩組 HIF-1α 蛋白的表達情況。 結果共同培養(yǎng) 24 h 后，CCK-8 法檢測顯示低氧組 OD 值顯著大于常氧組 (0.455±0.027 vs. 0.352±0.090，n=12，P<0.05)；低氧培養(yǎng) 12 h 后，低氧組的 HIF-1α mRNA 表達水平顯著高于常氧組（P<0.05）；低氧培養(yǎng) 24 h 后，同常氧組（0.47±0.05）比較，低氧組（0.63± 0.06）HIF-1α 蛋白相對表達水平顯著增高（n=3，P<0.05）。 結論低氧三維微環(huán)境可促進骨髓間充質(zhì)干細胞的增殖，這種效應可能與 HIF-1α 信號通路的激活有關。
【摘要翻譯】 一 氧化氮合酶( NOS) -2( NOS-2) 的誘導和一氧化氮產(chǎn)物增加是過敏性氣道疾病的共同特征。嚴重哮喘與氣道S-亞硝基硫醇減少相關。S-亞硝基硫醇是NO的生化產(chǎn)物, 可通過促炎癥轉錄因子NF-κB 的S-亞硝基化抑制炎癥反應。因此, 重建氣道S-亞硝基硫醇對治療可能有益。我們對此假設在以卵清蛋白誘導的過敏性炎癥大鼠模型中進行驗證。未使用或使用卵清蛋白致敏的動物均在卵清蛋白激發(fā)前于氣管內(nèi)灌注S-亞硝基谷胱甘肽( GSNO;50 μl, 10 mM) , 并在48 h 以后進行分析。GSNO 給藥增加了肺組織S-亞硝基硫醇水平。與對照組比, GSNO 降低了卵清蛋白致敏動物NF-κB 的活性, 但對支氣管肺泡灌洗細胞總數(shù)、分類計數(shù)及杯狀細胞化生標記物均無顯著影響。GSNO給藥也改變了HIF-1 的活性, 導致未致敏大鼠HIF-1 活化,但抑制卵清蛋白致敏大鼠的HIF-1 活性。我們使用NOS-2基因敲除小鼠來評價內(nèi)源性一氧化氮合成酶-2 在調(diào)節(jié)NF-κB和( 或) HIF-1 活性及氣道過敏性炎癥的作用。盡管在NOS-2 基因敲除小鼠中卵清蛋白誘導的NF-κB 活力輕度增高, 這與支氣管肺泡灌洗中性粒細胞輕度增加有關, 其他的過敏性炎癥指標和HIF-1 活性在NOS-2 基因敲除及野生型小鼠之間卻無明顯相差?？傮w來說, 我們的研究表明GSNO灌注能抑制氣道過敏性炎癥中NF-κB 活性, 但是并不能顯著地影響大部分炎癥及杯狀細胞化生指標, 這樣可能因為對其他信號通道( 比如HIF-1) 的影響而限制了它的治療價值?！臼鲈u】 GSNO 是近年哮喘治療研究的熱點。既往的研究發(fā)現(xiàn)GSNO 在哮喘治療中有一定前景。本研究卻發(fā)現(xiàn)GSNO 氣管內(nèi)滴注雖能抑制過敏性氣道炎癥中NF-κB 活性,但并不能顯著抑制氣道炎癥反應及杯狀細胞化生這兩個哮喘關鍵病理改變, 可能與GSNO 同時影響了HIF-1 等其他信號通路有關。該研究表明GSNO 對哮喘氣道炎癥治療效果有限, 同時表明哮喘氣道炎癥調(diào)控機制較為復雜, 治療藥物的設計需考慮多種信號通路對哮喘氣道炎癥的影響。
目的 探討生肌玉紅膠原在缺血組織中促進血管新生的作用效果及其作用機理。方法 Wistar大鼠48只按隨機配對方法隨機均分為空白組、對照組（膠原）及實驗組（生肌玉紅膠原）3組；在大鼠后肢缺血模型基礎上于大鼠右后肢缺血組織中植入不同的膠原制劑，分別于模型制作術后3，7、14及28d取埋植的膠原制劑標本及標本周圍約0.5cm 范圍的缺血肌肉組織。通過激光散斑成像系統(tǒng)觀察大鼠右后肢缺血模型制作術后各時點的血流灌注情況，采用光度計法測定膠原制劑（生肌玉紅膠原）內(nèi)的血紅蛋白含量，采用免疫組化染色方法檢測標本周圍肉芽組織中的微血管計數(shù)，采用實時熒光定量RT-PCR 方法檢測缺血肌肉組織中各時點低氧誘導因子（HIF）-1αmRNA以及血管內(nèi)皮生長因子（VEGF） mRNA的表達。結果 大鼠右后肢缺血模型制作成功即刻大鼠患肢呈現(xiàn)明顯的缺血狀態(tài)，其血流灌注值明顯低于術前（P ＜0.01）；在術后3d卻呈明顯的充血狀態(tài)，其血流灌注值明顯升高，且略高于術前水平，但差異無統(tǒng)計學意義（P ＞0.05）；在術后7～14d大鼠患肢的血流灌注值呈逐漸下降趨勢，至術后28d又開始回升， 該3個時點實驗組大鼠患肢的血流灌注值均高于空白組（P ＜0.05）， 對照組與空白組比較其差異均無統(tǒng)計學意義（P ＞0.05）；術后7及14d實驗組大鼠肢體的血流灌注值高于對照組（P ＜0.05）。各時點實驗組膠原標本內(nèi)血紅蛋白含量均高于對照組 （P ＜0.01）。實驗組微血管計數(shù)于術后7及14d高于對照組（P ＜0.05）； 實驗組術后各時點HIF-1α mRNA及VEGF mRNA的表達水平均高于對照組和空白組（P ＜0.05），而對照組與空白組間比較差異無統(tǒng)計學意義（P ＞0.05）。結論 生肌玉紅膠原通過誘導HIF-1α mRNA及VEGF mRNA血管新生相關基因的表達而改善缺血組織的血流灌注，促進微血管新生，從而達到促進組織修復的功效。
目的 探討HIF-1α和BAK蛋白在胃癌中的表達情況，以及二者在胃癌中的相互關系及作用。方法 應用免疫組化SABC染色法檢測80例胃癌組織和20例正常胃組織中的HIF-1α和BAK蛋白的表達情況。結果 胃癌中HIF-lα和BAK蛋白的表達陽性率分別為56.3%（45/80）和67.5%（54/80），而在胃正常組織中分別為5.0%（1/20）和20.0%（4/20），二者在胃癌中的表達顯著高于胃正常組織，其差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。HIF-1α蛋白表達與胃癌組織的浸潤范圍、分化程度及淋巴結轉移有關（P＜0.05），與臨床分期、年齡及性別無關（P＞0.05）；BAK蛋白表達與胃癌浸潤及分化程度相關（P＜0.05），與淋巴結轉移、臨床分期、年齡及性別無關（P＞0.05）。胃癌組織中HIF-1α與BAK蛋白的陽性表達之間呈正相關（列聯(lián)系數(shù)r=0.056，P＜0.05）。結論 HIF-1α與BAK蛋白在胃癌的臨床分期及浸潤轉移中存在關系，這對于研究胃癌的發(fā)生和發(fā)展，以及對于探索以二者為靶點的抗腫瘤治療有重要意義。
目的系統(tǒng)評價缺氧誘導因子-1α（HIF-1α）蛋白表達與腎細胞癌及其不同臨床病理特征的相關性。 方法計算機檢索The Cochrane Library、PubMed、EMbase、CNKI、VIP、CBM和WanFang Data，搜集國內(nèi)外公開發(fā)表關于HIF-1α蛋白表達與腎細胞癌及其不同臨床病理特征相關性的病例-對照研究，檢索時限均為從建庫至2015年6月。由2位研究者獨立篩選文獻、提取資料和評價納入研究的偏倚風險后，采用RevMan 5.3軟件進行Meta分析。 結果共納入8個病例-對照研究，包括腎細胞癌組429例，正常腎組織組130例。Meta分析結果顯示：HIF-1α蛋白在腎細胞癌組明顯高于正常腎組織組［OR=16.76，95% CI（8.53，32.92），P＜0.000 01］，在腎細胞癌伴淋巴結轉移組明顯高于無淋巴結轉移組［OR=4.33，95% CI（2.53，7.39），P＜0.000 01］，在TNM臨床分期Ⅲ～Ⅳ期組明顯高于Ⅰ～Ⅱ期組［OR=0.30，95% CI（0.18，0.51），P＜0.000 1］，在病理分級G3+G4期組明顯高于G1+G2期組［OR=0.54，95% CI（0.29，0.98），P=0.04］，且差異均有統(tǒng)計學意義；但在腎細胞癌患者年齡≥50歲組與＜50歲組［OR=1.09，95% CI（0.54，2.19），P=0.82］、男性組與女性組［OR=0.77，95% CI（0.48，1.25），P=0.29］的表達差異無統(tǒng)計學意義。 結論HIF-1α蛋白的表達與腎細胞癌臨床分期和病理分級有顯著相關性，其促進了腎細胞癌的形成和發(fā)展。受納入研究數(shù)量和質(zhì)量限制，上述結論尚待開展更多高質(zhì)量研究加以驗證。
目的探討缺氧條件下大鼠髓核細胞中缺氧誘導因子 1α（hypoxia inducible factor 1α，HIF-1α）與自噬相關分子 Beclin1、LC3B 的表達及其相關性。方法取健康成年 SD 大鼠髓核組織，分離培養(yǎng)髓核細胞并傳代。取第 3 代髓核細胞行 HE 染色和Ⅱ型膠原酶免疫熒光染色鑒定后，隨機分為 4 組。A 組細胞于常氧條件下（37℃、5%CO2、20%O2）培養(yǎng)，B 組細胞于缺氧條件下（37℃、5%CO2、1%O2）培養(yǎng)，C 組細胞轉染 HIF-1α-小干擾 RNA 后于缺氧條件下培養(yǎng)，D 組細胞加入自噬抑制劑 3-MA 后于缺氧條件下培養(yǎng)。各組細胞培養(yǎng) 8 h 后，采用 Western blot 和實時熒光定量 PCR（real-time fluorescence quantitative PCR，qRT-PCR）檢測 HIF-1α 與自噬相關分子 Beclin1、LC3B 的表達情況。結果經(jīng)分離純化的第 3 代大鼠髓核細胞 HE 染色后細胞質(zhì)呈淡粉色，細胞核呈藍黑色；Ⅱ型膠原酶免疫熒光染色為陽性。Western blot 和 qRT-PCR 檢測示，B 組 HIF-1α、Beclin1 和 LC3B 蛋白及 mRNA 相對表達量均顯著高于 A 組（P<0.05），C 組均顯著低于 B 組，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。D 組 HIF-1α 蛋白和 mRNA 相對表達量與 B 組比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），Beclin1 和 LC3B 蛋白和 mRNA 相對表達量均較 B 組顯著降低（P<0.05）。結論缺氧條件能誘導大鼠髓核細胞中 HIF-1α 和自噬相關分子 Beclin1、LC3B 的表達，且 HIF-1α 與自噬相關分子的表達具有相關性，即 HIF-1α 下調(diào)能降低自噬相關分子的表達，而缺氧條件下自噬水平下調(diào)對 HIF-1α 的表達無明顯影響。