目的 探討1,25(OH)2VD3在誘導(dǎo)小鼠胚胎干細胞(embryonic stem cells,ESCs)向成骨細胞分化過程中的重要作用。 方法 取2 d 齡昆明小白鼠顱蓋骨進行成骨細胞分離培養(yǎng);參照并改進zur Nieden 等的方法制備擬胚體(embryoid bodies,EBs)。將EBs 根據(jù)培養(yǎng)液不同分為4 組:A 組:不含白血病抑制因子EBs 培養(yǎng)液;B 組:EBs 培養(yǎng)液中添加50 μg/mL 維生素C、50 mmol/L β- 磷酸甘油;C 組:培養(yǎng)液同B 組,另每孔接種5 × 104 個第3 代成骨細胞;D組與C 組相同,另添加4 × 10-9 mol/L 1,25(OH)2VD3。檢測ALP 活性,實時定量PCR 檢測骨鈣素mRNA 的表達,茜素紅S 染色進行礦化骨結(jié)節(jié)計數(shù)。 結(jié)果 EBs 貼壁后前5 d,各組ALP 表達未發(fā)生明顯變化,5 d 后ALP 表達逐漸增加,其中D 組在第20 天表達水平最高。光鏡下可見輪廓清晰大小不等的紅色結(jié)節(jié)。茜素紅S 染色測得A、B、C、D 組骨結(jié)節(jié)數(shù)分別為(20 ± 8)、(18 ± 5)、(31 ± 1)、(50 ± 1)個;實時定量PCR 測得A、B、C、D 組骨鈣素 mRNA 分別為10.18 ± 1.17、20.29 ± 1.03、18.84 ± 4.07、32.15 ± 5.23;C、D 組與A、B 組比較差異均有統(tǒng)計學意義(P lt; 0.05),A、B 組間比較差異無統(tǒng)計學意義(P gt; 0.05),C、D 組間比較差異有統(tǒng)計學意義(P lt; 0.05)。 結(jié)論 在濃度為4 × 10-9 mol/L 1,25(OH)2VD3和維生素C、β- 磷酸甘油共同作用下,有效促進了ESCs 源性成骨細胞的產(chǎn)生。