目的 組織工程骨的神經(jīng)化能有效促進支架材料內(nèi)血管生成，修復(fù)骨缺損。研究降鈣素基因相關(guān)肽（calcitonin gene-related peptide，CGRP）對人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVECs）增殖與遷移的作用，進一步揭示組織工程骨的神經(jīng)化促血管生成機制。 方法 體外分離獲取HUVECs，并通過血管性血友病因子（von Willebrand factor，vWF）與CD31 抗原鑒定，取第1 代細胞用于實驗。實驗分為6 組，分別以0（A 組）、1 × 10—12（B 組）、1 × 10—11（C 組）、1 × 10—10（D 組）、1 × 10—9（E 組）、1 × 10—8 mol/L（F 組）濃度CGRP 干預(yù)HUVECs。采用細胞免疫熒光觀察HUVECs 的CGRP1 受體（CGRP1 receptor，CGRP1R）表達情況，AlarmarBlue 法動態(tài)檢測各組HUVECs 增殖率，Transwell 小室檢測各組HUVECs 的遷移能力，ELISA 法檢測HUVECs 分泌VEGF 的水平，Westernblot 法檢測其局部黏著斑激酶（focal adhesion kinase，F(xiàn)AK）的表達。 結(jié)果 分離的細胞通過形態(tài)學及vWF、CD31 免疫熒光鑒定為HUVECs，并可見CGRP1R 在細胞質(zhì)和細胞膜表達。CGRP 呈時間- 濃度依賴性刺激HUVECs 增殖；B ～ F組各時間點細胞增殖能力均高于A 組（P lt; 0.05），F(xiàn) 組各時間點細胞增殖能力最高。B ～ F 組遷移細胞數(shù)均顯著高于A組（P lt; 0.05），最大增幅達3 倍以上。B ～ F 組VEGF 分泌量均顯著高于A 組（P lt; 0.05）；C、D 組促進細胞分泌VEGF 的能力最強。Western blot 檢測示，與A組相比，B～F組CGRP刺激HUVECs 3、7、10 d 后，F(xiàn)AK表達明顯增加（P lt; 0.05）。 結(jié)論 CGRP 對HUVECs 的增殖和遷移有直接促進作用，可能作用機制為CGRP 能促進VEGF 分泌和增加FAK 的表達。
目的 觀察外源性降鈣素基因相關(guān)肽（calcitonin gene-related peptide，CGRP）在大鼠BMSCs 遷移中的作用及對VEGF、血管黏附分子1（vascular cell adhesion molecule 1，VCAM-1）表達的影響，探討CGRP 通過BMSCs促進血管生成的作用機制。 方法 全骨髓法分離、培養(yǎng)SD 大鼠BMSCs，采用Western blot 法于傳代培養(yǎng)1、2、3 周時檢測BMSCs 中CGRP 受體（CGRP receptor，CGRPR）蛋白的表達。使用濃度為1 × 10-8 mol/L 的CGRP 作用于BMSCs作為實驗組，單純BMSCs 作為對照組，在培養(yǎng)72 h 時采用細胞趨化實驗檢測CGRP 對BMSCs 遷移的影響；在培養(yǎng)1、3、5、7 d 采用實時熒光定量PCR 檢測CGRP 作用后VCAM-1 mRNA 的表達變化，采用免疫細胞化學染色、Western blot 法檢測CGRP 作用后VEGF 的表達變化。 結(jié)果 Western blot 檢測示BMSCs 穩(wěn)定表達CGRPR，2 周時表達最高。細胞趨化實驗顯示，實驗組CGRP 刺激后穿膜遷移細胞數(shù)（3.20 ± 1.77）個/HP，較對照組（1.11 ± 0.49）個/HP 明顯增多（t=4.230，P=0.001）。實時熒光定量PCR 檢測示，實驗組VCAM-1 mRNA 表達隨時間延長逐漸增加，7 d 時最高；實驗組3、5、7 d的VCAM-1 mRNA 表達量與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）。免疫細胞化學染色示，培養(yǎng)1、3 d 兩組均無陽性染色；培養(yǎng)5、7 d 實驗組VEGF 染色呈陽性，對照組無陽性染色。Western blot 檢測示，培養(yǎng)1、3 d 兩組均未檢測到VEGF蛋白表達；培養(yǎng)5、7 d 實驗組VEGF 蛋白表達量均明顯高于對照組（P lt; 0.05）；實驗組5 d 的VEGF 蛋白表達量明顯高于7 d（P lt; 0.05）。 結(jié)論 CGRP 能促進BMSCs 遷移及VEGF 表達，這可能是CGRP 調(diào)節(jié)骨內(nèi)部血流變化而影響骨代謝的機制之一。