目的：采用常壓間歇性低氧(intermittent hypoxia,IH)大鼠的動物模型，觀察間歇性常壓低氧預(yù)處理的促血管生成作用。方法:成年雄性Wistar大鼠25只，體重210～215 g，隨機(jī)分為2大組:對照組(C組，n=5)和間歇性低氧預(yù)處理組(IH組，n=20)。IH組動物進(jìn)行間歇性低氧預(yù)處理(4 h/d，間歇缺氧1 d者為IH1組，7 d者為IH2組，14 d者為IH3組，28 d者為IH4組)，按計(jì)劃完成實(shí)驗(yàn)后測定心肌血管內(nèi)皮生長因子(VEGF) 蛋白表達(dá)及毛細(xì)血管密度。結(jié)果：間歇性低氧預(yù)處理大鼠心肌VEGF蛋白表達(dá)增加，心肌毛細(xì)血管密度增高。結(jié)論：間歇性低氧預(yù)處理能促進(jìn)大鼠心肌內(nèi)的血管生成，其機(jī)制可能與心肌VEGF表達(dá)增高有關(guān)。
目的 觀察“一站式”復(fù)合技術(shù)治療冠狀動脈多支病變患者的早中期隨訪結(jié)果。方法 2007年 6月 至 2009年 12月共 104例冠狀動脈多支病變患者在阜外心血管病醫(yī)院接受“一站式”復(fù)合技術(shù)再血管化治療，其中男 93例 ,女 11例；年齡 35～81（61.8±10.2）歲。所有患者均為包括左前降支（ left anterior descending，LAD）病變在內(nèi)的多支病變?！耙徽臼健睆?fù)合技術(shù)要點(diǎn)為：胸骨下段小切口左側(cè)第 2肋間橫斷胸骨，心臟不停跳完成左乳內(nèi)動脈（left internal mammary artery，LIMA）至 LAD吻合，關(guān)胸后立即造影確定 LAD血運(yùn)重建滿意后即經(jīng)胃管給予波立維300 mg,靜脈肝素化［全血激活凝血時(shí)間（ ACT）＞250 s］，行經(jīng)皮冠狀動脈介入（percutaneous coronary intervention，PCI）治療其他非前降支狹窄病變。結(jié)果 本組患者均順利施行“一站式”復(fù)合技術(shù)再血管化治療，全部行 LIMA至 LAD血管移植，植入藥物支架 191枚，裸金屬支架 3枚；全組無手術(shù)及院內(nèi)死亡。所有患者均獲得隨訪，平均隨訪 1.5年，其中 1例出現(xiàn)支架狹窄，再次接受介入治療；全組無心肌梗死發(fā)生，無腦血管事件及死亡患者。結(jié)論 “一站式”復(fù)合技術(shù)再血管化是治療多支冠狀動脈粥樣硬化心臟病的一種安全有效的選擇。
目的 探討冠狀動脈旁路移植術(shù)（CABG）中移植血管血流量與圍手術(shù)期心肌梗死(MI)發(fā)生率之間的關(guān)系，為臨床提供借鑒。 方法 采集2010年1~6月在北京大學(xué)第一醫(yī)院連續(xù)58例因冠心病接受單純擇期非體外循環(huán)冠狀動脈旁路移植術(shù)（OPCAB）患者的臨床資料。術(shù)中均采用左乳內(nèi)動脈（LIMA）吻合于左前降支（LAD），其他靶血管則以大隱靜脈（SV）作為旁路移植血管，在關(guān)胸前循環(huán)狀態(tài)穩(wěn)定條件下，應(yīng)用瞬時(shí)流量測定技術(shù)測量各移植血管的血流量，并計(jì)算移植血管總血流量。根據(jù)術(shù)后是否發(fā)生圍手術(shù)期MI，將患者分成兩組：MI組11例，其中男7例，女4例；年齡67.4±10.3歲；非MI組，47例，其中男38例，女9例；年齡63.3±9.9歲。分析兩組患者術(shù)前及術(shù)中的相關(guān)危險(xiǎn)因素。 結(jié)果 MI組與非MI組的手術(shù)時(shí)間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（205.4±59.6 min vs. 183.4±32.4 min，t1.691, P=0.096）。MI組與非MI組移植血管數(shù)量（3.00±1.00 支 vs. 2.96±0.78 支，t=0.154, P=0.878）、LIMALAD移植血管血流量（15.40±11.37ml/minvs.16.50±10.83ml/min，t=0.301，P=0.764）差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；MI組與非MI組移植血管總血流量（41.03±19.50 ml/min vs. 64.09±32.44 ml/min，t=2.254，P=0.028）差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。移植血管總血流量lt;48.5 ml/min為發(fā)生MI的危險(xiǎn)因素［OR=4.706, 95%CI1.099,20.147）］。 結(jié)論 移植血管總血流量可在一定程度上預(yù)測CABG后急性心肌缺血事件的發(fā)生，總血流量lt;48.5 ml/min的患者術(shù)后發(fā)生圍手術(shù)期MI的概率將明顯增加。
氣管移植目前仍處于動物實(shí)驗(yàn)階段,影響氣管移植應(yīng)用于臨床的主要因素在于移植氣管的再血管化、有效的免疫抑制及供者氣管的保存.帶蒂大網(wǎng)膜包裹移植氣管是移植體再血管化的有效方法.先期將氣管移植體置于大網(wǎng)膜內(nèi),再將帶蒂大網(wǎng)膜氣管移植能明顯提高移植體的再血管化,并降低移植體的感染率.氣管的再血管化仍受到氣管移植長度的限制,為解決這一問題,近年利用分段氣管移植能有效延長氣管移植長度.動物實(shí)驗(yàn)表明,氣管移植同樣存在移植排斥反應(yīng).免疫抑制劑的應(yīng)用能降低排斥反應(yīng),但同時(shí)增加了移植體的感染率.早期大劑量應(yīng)用免疫抑制劑既能有效地抑制氣管移植術(shù)后的排斥反應(yīng),又能降低移植體的感染率.氣管是一個(gè)結(jié)構(gòu)較為簡單的器官,因此,對供者氣管進(jìn)行長期保存是可行的.將氣管置入保護(hù)液進(jìn)行長期低溫冷凍保存取得成功.這一簡單方法既解決了供者氣管缺乏問題,又能解決免疫抑制問題.
目的 比較同一供者及不同供者的人胎盤MSCs（human placenta-derived MSCs，HPMSCs）與人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVECs）三維復(fù)合培養(yǎng)效果，為體外構(gòu)建三維血管化組織工程骨提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法 取健康足月產(chǎn)婦自愿捐贈的胎盤及臍帶組織， 采用Ⅳ型膠原酶消化和人淋巴細(xì)胞分層液密度梯度離心法分離培養(yǎng)HPMSCs，通過流式細(xì)胞學(xué)檢測細(xì)胞表型，取第2代細(xì)胞向成骨細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)鑒定；以Ⅰ型膠原酶消化分離培養(yǎng)HUVECs，通過Ⅷ因子相關(guān)抗原因子免疫組織化學(xué)染色進(jìn)行鑒定。實(shí)驗(yàn)分為兩組，A組取不同供者的第3代HUVECs和成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)3周的第3代HPMSCs以1∶1比例復(fù)合種植于膠原水凝膠，制備細(xì)胞-膠原水凝膠復(fù)合物；B組將同一供者的以上兩種細(xì)胞同法復(fù)合制備復(fù)合物。復(fù)合培養(yǎng)第1、3、5、7天取材，行CD31免疫熒光染色，于激光共聚焦顯微鏡下觀察其成血管傾向，測量復(fù)合物中的索道長度和節(jié)點(diǎn)數(shù)，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果 經(jīng)鑒定，成功分離培養(yǎng)HPMSCs及HUVECs。CD31免疫熒光染色示，與A組相比，B組細(xì)胞-膠原水凝膠復(fù)合物中的HUVECs可在三維空間上較早、較好地伸展，在水凝膠內(nèi)部相互交織能力較強(qiáng)，形成的索道更長，節(jié)點(diǎn)更多，網(wǎng)絡(luò)更密集。第7天時(shí)B組索道長度和節(jié)點(diǎn)數(shù)分別為（8.11 ± 0.62）mm/mm2及（21.30 ± 1.41）個(gè)/mm2，顯著優(yōu)于A組的（6.68 ± 0.35） mm/mm2及（17.10 ± 1.10） 個(gè)/mm2，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=0.894，P=0.000；t=0.732，P=0.000）。 結(jié)論 將同一供者的HPMSCs與HUVECs體外復(fù)合種植于膠原水凝膠支架上，比不同供者來源的細(xì)胞形成的網(wǎng)絡(luò)成血管傾向更明顯，交織連續(xù)性好，層次豐富。
目的 探討脂肪干細(xì)胞（adipose-derived stem cells，ADSCs）及血管束植入法聯(lián)合應(yīng)用對組織工程支架體內(nèi)血管化的影響，為臨床應(yīng)用組織工程支架復(fù)合物治療股骨頭缺血性壞死提供理論依據(jù)。 方法 取4 月齡SD 大鼠，分離培養(yǎng)ADSCs，并行成骨誘導(dǎo)鑒定。取第3 代ADSCs 接種于納米羥基磷灰石/ 聚酰胺66（nano-hydroxyapatide/polyamide-66，nHA/PA66）支架上制備復(fù)合支架，掃描電鏡觀察細(xì)胞與支架復(fù)合情況。取4 月齡SD 大鼠24 只，體重350 ～ 400 g，隨機(jī)分為3 組，每組8 只。A、B 組分離大鼠雙側(cè)腹壁下動、靜脈，分別將血管束植入培養(yǎng)10 d 的復(fù)合支架及單純nHA/PA66 支架；C 組將培養(yǎng)10 d 的復(fù)合支架包埋入雙側(cè)股四頭肌中。術(shù)后2、4 周每組取4 只大鼠支架標(biāo)本行HE染色及CD34 免疫組織化學(xué)染色觀察，檢測其血管生成情況。 結(jié)果 所分離細(xì)胞經(jīng)鑒定為ADSCs。掃描電鏡觀察示復(fù)合培養(yǎng)10 d，細(xì)胞數(shù)目增多，形態(tài)完全伸展，呈長梭形。術(shù)后2、4 周，HE 染色及免疫組織化學(xué)染色均顯示A 組支架植入動、靜脈周圍有大量血管生成，血管數(shù)量及管壁成熟度均優(yōu)于同一時(shí)間點(diǎn)的B、C 組。術(shù)后2、4 周，A 組血管密度和血管直徑均顯著大于B、C 組，B 組大于C 組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。 結(jié)論 ADSCs 和血管束植入法聯(lián)合應(yīng)用可以促進(jìn)組織工程支架體內(nèi)血管化程度。
【摘 要】 目的 探討毛乳頭細(xì)胞對表皮干細(xì)胞與同種異體脫細(xì)胞真皮基質(zhì)構(gòu)建的組織工程皮膚血管化的影響。 方法 取門診包皮環(huán)切術(shù)患者皮膚，用于表皮細(xì)胞培養(yǎng)；取孕19、20 周引產(chǎn)胎兒頭部皮膚，用于毛乳頭細(xì)胞培養(yǎng)；患者及家屬均知情同意。以中性蛋白酶聯(lián)合胰蛋白酶消化、分離表皮細(xì)胞，Ⅳ型膠原黏附法分選表皮干細(xì)胞；以Ⅰ型膠原酶消化法分離毛乳頭，常規(guī)成纖維細(xì)胞培養(yǎng)液培養(yǎng)。以同種異體脫細(xì)胞真皮基質(zhì)為支架，在真皮基質(zhì)的真皮乳頭側(cè)種植毛乳頭細(xì)胞，基底膜側(cè)種植表皮干細(xì)胞構(gòu)建實(shí)驗(yàn)組組織工程皮膚替代物；對照組組織工程皮膚替代物不種植毛乳頭細(xì)胞。取6 ～ 8 周齡BALB/C-nu 裸鼠60 只，隨機(jī)分成實(shí)驗(yàn)組和對照組（n=30）；實(shí)驗(yàn)動物背部制造1 cm × 1 cm 大小全層皮膚缺損模型，將兩組組織工程皮膚替代物移植修復(fù)創(chuàng)面，2 周后觀察移植皮膚成活率。術(shù)后2、4 周，取移植皮膚替代物標(biāo)本，行HE 及免疫組織化學(xué)染色，觀察移植皮膚替代物CD31 表達(dá)水平，并計(jì)算兩組標(biāo)本血管密度。 結(jié)果 Ⅳ型膠原分選后表皮細(xì)胞同時(shí)表達(dá)角蛋白19、β1 整合素，提示為表皮干細(xì)胞。由毛乳頭培養(yǎng)出的細(xì)胞表達(dá)α 平滑肌肌動蛋白，提示為毛乳頭細(xì)胞。動物移植術(shù)后2 周，實(shí)驗(yàn)組移植皮膚成活率為93.3%（28/30），對照組為80.0%（24/30），比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=2.31，P=0.00）。HE 染色觀察示實(shí)驗(yàn)組表皮層達(dá)12 層，表皮細(xì)胞體積較大；對照組表皮層達(dá)4 ～ 6 層，表皮細(xì)胞體積較小。實(shí)驗(yàn)組術(shù)后2、4 周，血管密度分別為（38.56 ± 2.49）個(gè)/mm2 和（49.12 ± 2.39）個(gè)/mm2，對照組分別為（25.16 ± 3.73） 個(gè) / mm2 和（36.26 ± 3.24） 個(gè) / mm2，兩組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.01）。 結(jié)論 毛乳頭細(xì)胞可促進(jìn)移植皮膚替代物血管形成，利于表皮層重建，提高組織工程皮膚移植成活率。
目的 探討大鼠BMSCs 來源的成骨細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞復(fù)合殼聚糖- 羥基磷灰石多孔支架植入大鼠橈骨缺損處的成骨作用和成血管作用。 方法 取分離培養(yǎng)至第3 代的SD 大鼠BMSCs 行成骨和成內(nèi)皮細(xì)胞誘導(dǎo)并鑒定。分別將內(nèi)皮細(xì)胞（A 組）、成骨細(xì)胞（B 組）、混合細(xì)胞（成骨細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞比例為1 ∶ 1，C 組）均勻滴加于殼聚糖- 羥基磷灰石多孔支架上制備3 組細(xì)胞- 支架復(fù)合物，MTT 檢測支架內(nèi)細(xì)胞增殖活性。取2 月齡雄性SD 大鼠30 只，制作大鼠橈骨5 mm 長缺損模型并分別植入3 組細(xì)胞- 支架復(fù)合物（n=10）。術(shù)后4、8、12 周分別取移植物行HE 染色觀察，CD34免疫組織化學(xué)染色計(jì)數(shù)微血管密度，RT-PCR 法檢測骨橋蛋白（osteopontin，OPN）和骨保護(hù)素（osteoprotegrin，OPG）mRNA 表達(dá)。 結(jié)果 BMSCs 成骨誘導(dǎo)7 d 后ALP 染色可見細(xì)胞質(zhì)內(nèi)藍(lán)染顆粒，細(xì)胞核呈紅染；內(nèi)皮細(xì)胞誘導(dǎo)14 d 后，CD34 免疫細(xì)胞化學(xué)染色可見細(xì)胞內(nèi)棕色顆粒。MTT 檢測示3 組細(xì)胞活性隨時(shí)間延長逐漸升高。HE 染色示，術(shù)后12 周A 組未見明顯類骨質(zhì)形成，而有較密集的微血管結(jié)構(gòu)及較多纖維組織形成；B、C 組可見均質(zhì)的類骨質(zhì)，呈條索狀和島狀分布，可見大量成骨樣細(xì)胞存在。術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)A、C 組微血管密度均顯著高于B 組（P lt; 0.05）；A 組術(shù)后12 周微血管密度高于C 組（P lt; 0.05），其余2 個(gè)時(shí)間點(diǎn)A、C 組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。A 組3 個(gè)時(shí)間點(diǎn)OPN 和OPG mRNA 表達(dá)水平均較低，與B、C 組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）；B、C 組分別于術(shù)后8、12 周OPN mRNA 表達(dá)達(dá)峰值，4 周時(shí)OPG mRNA 表達(dá)達(dá)峰值。 結(jié)論 BMSCs 來源的成骨細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞按1 ∶ 1 比例共培養(yǎng)于殼聚糖- 羥基磷灰石多孔支架作為組織工程骨移植物，可以促進(jìn)大鼠橈骨缺損部位骨的形成和血管化，促進(jìn)骨缺損愈合。
目的 介紹一種利用在體血管轉(zhuǎn)移入組織工程室（血管化組織工程室）進(jìn)行體內(nèi)組織工程研究的新方法，總結(jié)目前血管化組織工程室內(nèi)進(jìn)行組織工程研究的進(jìn)展。 方法 查閱國內(nèi)外近年來在血管化組織工程室內(nèi)進(jìn)行組織工程研究的文獻(xiàn)，并進(jìn)行綜合分析。 結(jié)果 血管化組織工程室內(nèi)能構(gòu)建出具有血管網(wǎng)絡(luò)的脂肪組織、心肌組織等，常用的血管化組織工程室模型有動靜脈分流環(huán)路模型和腹壁下淺動脈模型。 結(jié)論 體內(nèi)利用血管化組織工程室進(jìn)行組織工程研究的方法有望應(yīng)用于臨床。
目的 骨組織工程所使用的支架材料能否快速、有效地血管化是骨修復(fù)的關(guān)鍵。研究增強(qiáng)型生物活性玻璃/ 膠原復(fù)合材料對血管化的協(xié)同和促進(jìn)作用，為構(gòu)建血管化組織工程骨修復(fù)骨缺損尋找適宜的支架材料。 方法 體外分離獲取人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVECs），并通過血管性血友病因子（von Willebrand factor，vWF）與CD34 抗原鑒定，取第1 代細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。將細(xì)胞接種于增強(qiáng)型生物活性玻璃/ 膠原復(fù)合材料上，掃描電鏡觀察細(xì)胞黏附情況。取細(xì)胞接種于增強(qiáng)型生物活性玻璃/ 膠原復(fù)合材料作為實(shí)驗(yàn)組，等量細(xì)胞直接接種于培養(yǎng)板常規(guī)培養(yǎng)作為對照組，采用alarmarBlue 法動態(tài)檢測細(xì)胞增殖率，實(shí)時(shí)熒光定量PCR 檢測內(nèi)皮細(xì)胞相關(guān)基因VEGF、血管內(nèi)皮生長因子受體1（fms-related tyrosine kinase 1，F(xiàn)lt-1）、血管內(nèi)皮生長因子受體2（kinase insert domain receptor，Kdr）的mRNA 表達(dá)。取SD 大鼠6 只，將支架材料包埋于大鼠股內(nèi)側(cè)皮下，實(shí)驗(yàn)組采用增強(qiáng)型生物活性玻璃/ 膠原復(fù)合材料、中央軸向植入血管束，對照組采用非增強(qiáng)型生物活性玻璃/ 膠原復(fù)合材料，分別于植入5、10 d 取出，行冰凍切片并HE 染色動態(tài)觀察支架材料內(nèi)部的血管化狀態(tài)。 結(jié)果 分離的細(xì)胞通過形態(tài)學(xué)及vWF、CD34 免疫熒光鑒定為HU VECs。掃描電鏡示HUVECs 在支架材料上黏附較好。HUVECs 在實(shí)驗(yàn)組支架材料上增殖明顯，在第3 天后細(xì)胞增殖率開始高于對照組，11 d 達(dá)到增殖平臺期時(shí)細(xì)胞數(shù)仍多于對照組（P lt; 0.05）。實(shí)時(shí)熒光定量PCR 檢測示，培養(yǎng)3 d 實(shí)驗(yàn)組VEGF、Flt-1、Kdr 的mRNA 表達(dá)均顯著高于對照組（P lt; 0.05）。包埋大鼠皮下實(shí)驗(yàn)可見，實(shí)驗(yàn)組5、10 d 時(shí)植入的血管仍通暢，其周圍新生血管隨時(shí)間延長而增多，材料周緣可見宿主血管浸潤生長，但新生血管稀疏；對照組僅有纖維組織生長，10 d 時(shí)材料已大部分降解，組織難以長入。 結(jié)論 增強(qiáng)型生物活性玻璃/ 膠原復(fù)合材料在大鼠體內(nèi)外可促進(jìn)血管化，可能適于作為構(gòu)建血管化組織工程骨的支架材料。