目的：研究轉化生長因子β1（TGF-β1）促進Tenon囊成纖維細胞的增殖作用及核心蛋白多糖（decorin）對TGF-β1促Tenon囊成纖維細胞增殖的影響。方法：（1）取青光眼患者的Tenon囊組織，采用組織塊貼壁培養(yǎng)法進行原代培養(yǎng)細胞培養(yǎng)，細胞經過冷凍與復蘇后，觀察細胞形態(tài)結構與生物學特性。（2）用不同濃度(0.01、0.1、1、5、10ng/mL)TGF-β1作用于Tenon囊成纖維細胞48 h。（3）終濃度為5 ng/mL的TGF-β1 和不同濃度(0.01、0.1、1、2、5μg/mL)的decorin共同作用于Tenon囊成纖維細胞48h。MTT比色法檢測Tenon囊成纖維細胞增殖。結果：（1）體外成功培養(yǎng)Tenon囊成纖維細胞，細胞生長活躍，形狀穩(wěn)定，細胞經過冷凍與復蘇后，仍能保持其原來的細胞形態(tài)結構與穩(wěn)定的生物學特性。（2）1～10ng/mL TGF-β1能促進Tenon囊成纖維細胞的增殖，并與濃度成正比。（3）2～5μg/mL decorin 能抑制TGF-β1促Tenon囊成纖維細胞增殖作用，其抑制作用與濃度成正比。結論： TGF-β1可刺激Tenon囊成纖維細胞增殖，Decorin能抑制TGF-β1促進細胞增殖的作用，其機理可能通過與TGF-β1結合抑制青光眼濾過手術后瘢痕形成。
目的 探討syndecan-1蛋白在肝細胞肝癌的表達及與臨床病理參數(shù)的關系方法 采用免疫組化ABC法檢測syndecan-1在肝細胞肝癌中的表達。結果 發(fā)現(xiàn)在47例肝癌組織中syndecan-1陰性表達28例，其分化不良的肝癌syndecan-1陰性表達率高于分化較好者（分別為78.3%，41.7%，兩者相比Ｐ＜0.05）； 直徑＞5cm的肝癌syndecan-1陰性表達率高于直徑≤5cm肝癌（分別為81.0%，42.3%，兩者相比Ｐ＜0.01）； 大體或鏡下有癌栓者syndecan-1陰性表達率高于無癌栓的肝癌（分別為84.2%，42.9%，兩者相比Ｐ＜0.01）。syndecan-1的陰性表達與患者血清甲胎蛋白水平及Child分級均無明顯的相關性（Ｐ＞0.05）。結論 syndecan -1的低表達與肝癌增大、分化程度低、侵襲轉移發(fā)生等惡性表型相關，可能對這些表型起負調節(jié)作用，可視為抑癌基因。
目的 應用重組腺相關病毒2（recombinant adeno-associated virus 2，rAAV2）介導hTGF-β1 基因體內轉染兔退變椎間盤髓核細胞，觀察基因產物的表達及其對退變髓核細胞蛋白多糖合成的生物調節(jié)作用。 方法 于24 只成年新西蘭大白兔，雌雄不限，體重1.7 ～ 2.2 kg，L1、2、L2、3、L3、4、L4、5 椎間盤注射25 μL 濃度為1 mmol/L 的纖維結合素片段（fibronectin fragment，F(xiàn)n-f）制備椎間盤退變模型，注射Fn-f 4 周時的造模椎間盤模擬早期退變的椎間盤。將24 只兔隨機分為3 組（n=8），A、B、C 組分別于造模椎間盤髓核內注射25 μL rAAV2-hTGF-β1（1 × 1012 vg/mL）、rAAV2- 增強綠色熒光蛋白（enhanced green fluorescent protein，EGFP，rAAV2-EGFP）、PBS。術后1 周A、C 組各處死2 只兔，取髓核組織采用免疫組織化學染色觀察hTGF-β1 的表達；術后4、8、12 周每組取2 只兔髓核組織，35S 整合分析法檢測新合成蛋白多糖的含量；術后12 周處死B 組2 只兔，熒光顯微鏡觀察髓核組織中EGFP 的表達。 結果 術后1 周，免疫組織化學染色示A 組髓核細胞及基質中廣泛存在強陽性染色顆粒，C 組僅存在少量陽性顆粒。35S 整合法檢測示，各時間點A 組35S 蛋白多糖合成率均高于B、C 組，比較差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05） ；B、C 組間比較差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。術后12周， 熒光顯微鏡下觀察B 組盤髓核組織可見大量綠色熒光表達。 結論 新型基因轉導載體rAAV2 可有效介導hTGF-β1基因體內轉染兔退變髓核細胞，基因產物可持續(xù)表達超過12 周，hTGF-β1 可有效促進退變髓核細胞蛋白多糖的合成。
目的 探討硫酸軟骨素酶ABC（chondroitinase ABC，ChABC）對大鼠脊髓損傷（spinal cord injury，SCI）后生長相關蛋白43（growth associated protein 43，GAP-43）和神經膠質纖維酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein，GFAP）表達的影響。 方法 取成年雌性SD 大鼠150 只，體重250 ～ 300 g，隨機分為ChABC 治療組（A 組）、生理鹽水治療組（B 組）和假手術組（C 組），每組50 只。A、B 組制作大鼠脊髓橫斷損傷模型，分別于SCI 區(qū)通過蛛網(wǎng)膜下腔注射6 μL ChABC（1 U/mL）和等量生理鹽水治療；C 組不切斷脊髓及不治療作為空白對照。于術后1、3、7、14、21 d 采用BBB 評分法觀察大鼠后肢運動功能情況，用免疫熒光染色法檢測各組GAP-43 和GFAP 陽性表達并計數(shù)陽性表達神經元數(shù)量。 結果 術后各時間點A、B 組BBB 評分均明顯小于C 組（P lt; 0.05）。術后1、3、7 d，A、B 組間BBB 評分差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）；術后14、21 d，A 組BBB 評分明顯高于B 組（P lt; 0.01）。免疫熒光染色示，術后各時間點A、B組GAP-43 和GAFP 陽性神經元數(shù)均明顯多于C 組（P lt; 0.05）。術后14、21 d，A 組GAP-43 陽性神經元數(shù)明顯多于B 組（P lt; 0.01）；1、3、7 d 時兩組比較差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。術后7、14、21 d，A 組GFAP 陽性神經元數(shù)明顯少于B 組（P lt; 0.01）；術后1、3 d 時兩組比較差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。 結論 ChABC 能夠降解膠質瘢痕，改善大鼠SCI 區(qū)域的微環(huán)境，使GAP-43 表達增強，促進神經軸突的生長與延伸。
目的 探討硫酸軟骨素酶ABC（chondroitinase ABC，ChABC）對大鼠脊髓損傷（spinal cord injury，SCI）后生長相關蛋白43（growth associated protein 43，GAP-43）和神經膠質纖維酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein，GFAP）表達的影響。 方法 取成年雌性SD 大鼠150 只，體重250 ～ 300 g，隨機分為ChABC 治療組（A 組）、生理鹽水治療組（B 組）和假手術組（C 組），每組50 只。A、B 組制作大鼠脊髓橫斷損傷模型，分別于SCI 區(qū)通過蛛網(wǎng)膜下腔注射6 μL ChABC（1 U/mL）和等量生理鹽水治療；C 組不切斷脊髓及不治療作為空白對照。于術后1、3、7、14、21 d 采用BBB 評分法觀察大鼠后肢運動功能情況，用免疫熒光染色法檢測各組GAP-43 和GFAP 陽性表達并計數(shù)陽性表達神經元數(shù)量。 結果 術后各時間點A、B 組BBB 評分均明顯小于C 組（P lt; 0.05）。術后1、3、7 d，A、B 組間BBB 評分差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）；術后14、21 d，A 組BBB 評分明顯高于B 組（P lt; 0.01）。免疫熒光染色示，術后各時間點A、B組GAP-43 和GAFP 陽性神經元數(shù)均明顯多于C 組（P lt; 0.05）。術后14、21 d，A 組GAP-43 陽性神經元數(shù)明顯多于B 組（P lt; 0.01）；1、3、7 d 時兩組比較差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。術后7、14、21 d，A 組GFAP 陽性神經元數(shù)明顯少于B 組（P lt; 0.01）；術后1、3 d 時兩組比較差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。 結論 ChABC 能夠降解膠質瘢痕，改善大鼠SCI 區(qū)域的微環(huán)境，使GAP-43 表達增強，促進神經軸突的生長與延伸。
目的 分析大鼠亞急性脊髓損傷（spinal cord injury，SCI）后聯(lián)合應用嗅鞘細胞（olfactory ensheathing cells，OECs）和硫酸軟骨素酶ABC（chondroitinase ABC，ChABC）移植的可行性，并探討其相互作用。 方法 取健康成年SD 大鼠3 只，分離嗅球培養(yǎng)OECs，原代培養(yǎng)8 ～ 9 d 后調整細胞濃度為1 × 105 個/μL 備用。另取健康成年SD大鼠54 只制備SCI 動物模型，并隨機分為4 組；A 組（n=36）為對照組，不作處理，B、C、D 組（n=6）分別于損傷區(qū)注射OECs、ChABC 和ChABC/OECs。采用BBB 評分法評價傷后1、2、3、7、14 d 各組大鼠雙后肢運動功能。A 組分別于傷后即刻，1、2、3、7、14 d 取材（n=6），B、C、D 組于傷后14 d 取材行HE 染色并計算損傷區(qū)最大橫徑和壞死總面積；行膠質細胞酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein，GFAP）/CS56、GFAP/ 生長相關蛋白43（growth associated protein 43，GAP-43）和GFAP/ 神經絲蛋白160（neurofilament 160，NF160）免疫熒光染色，評價神經纖維束再生情況。 結果 各組各時間點BBB 評分結果示，A 組與B、C、D 組比較差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05），B、C 組與D 組比較差異有統(tǒng)計學意義（P lt;0.05）。HE 染色示，傷后14 d 時各組均有空洞形成，傷后B、C、D 組損傷區(qū)最大橫徑和壞死總面積與A 組比較差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.01），B、C 組與D 組比較差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.01）。免疫組織化學染色示，A 組GFAP 反應最強，損傷區(qū)空洞明顯可見，范圍大于其他3 組；D 組介于B、C 組之間；B、C、D 組的GAP-43 表達增多，且以D 組為著；D 組損傷區(qū)內的NF 通過明顯多于其他3 組。 結論 ChABC 聯(lián)合OECs 移植對亞急性SCI 有較好的療效。
目的 綜述降鈣素（calcitonin，CT）對骨性關節(jié)炎關節(jié)軟骨、軟骨下骨的作用。 方法 廣泛查閱近年來有關CT 對骨性關節(jié)炎作用的國內外文獻，并進行總結與分析。 結果 CT 能促進軟骨蛋白多糖、Ⅱ型膠原等重要軟骨基質的合成，并能促進軟骨及軟骨下骨再生。 結論 CT 通過促進軟骨合成及抑制軟骨降解發(fā)揮保護關節(jié)軟骨的作用。
目的通過慢病毒介導環(huán)氧合酶2（cyclooxygenase 2, COX-2）-siRNA、聚蛋白多糖酶1（Aggrecanase-1）-siRNA、IGF-1基因聯(lián)合轉染BMSCs，將其注射至食蟹猴骨關節(jié)炎（osteoarthritis, OA）模型關節(jié)腔，探討對OA相關炎性因子及關節(jié)軟骨的影響。 方法取髖關節(jié)OA患者自愿捐贈骨髓組織，分離培養(yǎng)BMSCs。采用基因重組技術構建COX-2-siRNA、Aggrecanase-1-siRNA和IGF-1過表達基因的慢病毒載體，以最佳感染復數(shù)40轉染第3代BMSCs（病毒組），以空慢病毒轉染培養(yǎng)作為對照（空病毒組），以正常BMSCs作為正常對照組。倒置相差顯微鏡下觀察細胞生長狀態(tài)，并行細胞計數(shù)；取轉染培養(yǎng)1周細胞，RT-PCR檢測COX-2、Aggrecanase-1及IGF-1 mRNA的表達。取健康3歲食蟹猴9只，按照Hulth造模法于右膝制備OA模型后，隨機分為3組（n=3）。模型制備術后6周，病毒組及空病毒組右膝關節(jié)腔內分別注射對應的1 mL BMSCs（約1×107個），空白對照組注射1 mL生理鹽水。以左膝作為正常對照組。注射后觀察動物一般情況；1、4、6周取雙膝關節(jié)液，ELISA檢測前列腺素E2（prostaglandin E2, PGE2）、IL-1、Aggrecanase-1、IGF-1濃度；6周時MRI及大體觀察檢查膝關節(jié)軟骨改變，并取材行組織學、免疫組織化學染色觀察，以及RT-PCR檢測COX-2、Aggrecanase-1及IGF-1 mRNA表達。 結果轉染后兩組細胞形態(tài)及生長曲線無明顯差異。RT-RCR檢測，與空病毒組、正常對照組比較，病毒組COX-2、Aggrecanase-1表達明顯降低，IGF-1表達明顯增加（P＜0.05）。細胞注射后各組動物均存活至實驗完成。注射后1、4、6周，病毒組PGE2、Aggrecanase-1、IL-1濃度明顯低于空病毒組、空白對照組，但IGF-1濃度明顯增高（P＜0.05）；但3組以上指標濃度均顯著高于正常對照組（P＜0.05）。MRI檢查示，與正常對照組比較，病毒組、空病毒組及空白對照組關節(jié)面均出現(xiàn)異常高密度影，但病毒組區(qū)域最小。大體觀察及組織學觀察見，病毒組、空病毒組及空白對照組關節(jié)軟骨符合早期OA改變，但病毒組修復程度優(yōu)于空病毒組及空白對照組，根據(jù)改良Pineda評分標準的組織學評分亦較低，比較差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。免疫組織化學染色示，病毒組細胞質染色較空病毒組及空白對照組深，偶爾可見棕黃色顆粒，軟骨細胞較多。RT-PCR檢測，與空病毒和空白對照組相比，病毒組COX-2、Aggrecanase-1 mRNA表達明顯降低，IGF-1 mRNA表達明顯增高（P＜0.05）。 結論慢病毒介導的多基因轉染BMSCs可以有效抑制食蟹猴早期OA模型膝關節(jié)腔內COX-2和Aggrecanse-1的表達，增強IGF-1的表達，降低膝關節(jié)內炎性因子濃度，有效保護關節(jié)軟骨。
目的探討磷脂酰肌醇蛋白多糖-3（GPC3）對Hippo信號通路的調控機制及其對人肝癌Huh7細胞生物學行為的影響。 方法分別構建4種靶向GPC3和YAP1基因的shRNA序列，然后轉染入肝癌Huh7細胞，并篩選穩(wěn)定表達的細胞株。采用熒光定量PCR法和蛋白印跡法檢測轉染后的Huh7細胞中GPC3和YAP1的表達，以篩選有效沉默GPC3和YAP1的shRNA。觀察沉默GPC3和YAP1以及人重組YAP1（rhYAP1）對肝癌細胞增殖、侵襲和凋亡的影響。GPC3 shRNA轉染實驗分為6組：未轉染組、空載體組、GPC3-714-shRNA組、GPC3-647-shRNA組、GPC3-1718-shRNA組、GPC3-2134-shRNA組。YAP1 shRNA轉染實驗分為6組：未轉染組、空載體組、YAP1-906-shRNA組、YAP1-1363-shRNA組、YAP1-1666-shRNA組、YAP1-2895-shRNA組。GPC3對YAP1的調控實驗分為5組：未轉染組、空載體組、GPC3-1718-shRNA組、GPC3-1718-shRNA+rhYAP1組、YAP1-1666-shRNA組。 結果①成功構建了可有效沉默GPC3和YAP1表達的GPC3-1718-shRNA和YAP1-1666-shRNA質粒。② GPC3 shRNA各轉染組細胞中GPC3 mRNA和蛋白表達均明顯低于未轉染組（P＜0.05）和空載體組（P＜0.05），而GPC3-1718-shRNA組又明顯低于其他轉染組（P＜0.05）。YAP1 shRNA各轉染組細胞中YAP1 mRNA和蛋白表達均明顯低于未轉染組（P＜0.05）和空載體組（P＜0.05），而YAP1-1666-shRNA組又明顯低于其他轉染組（P＜0.05）。③ GPC3-1718-shRNA組和YAP1-1666-shRNA組細胞中YAP1 mRNA和蛋白表達均明顯低于未轉染組（P＜0.05）和空載體組（P＜0.05）；而GPC3-1718-shRNA+rhYAP1組細胞中YAP1 mRNA和蛋白表達明顯高于GPC3-1718-shRNA組（P＜0.05）和YAP1-1666-shRNA組（P＜0.05）。④與未轉染組和空載體組比較，GPC3-1718-shRNA組和YAP1-1666-shRNA組的細胞增殖和侵襲能力明顯降低（P＜0.05），細胞凋亡明顯增加（P＜0.05）；而GPC3-1718-shRNA+rhYAP1組細胞增殖、侵襲和凋亡均得到明顯改善（P＜0.05）。 結論GPC3很有可能通過對Hippo信號通路YAP1的調控，實現(xiàn)其對人肝癌細胞Huh7生物學行為的影響。
目的 探討成軟骨相關 miR-4287 對人軟骨細胞聚蛋白多糖酶-1（a disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motif 4，ADAMTS4）調控作用及其機制。 方法 取自愿捐贈的膝關節(jié)正常及骨關節(jié)炎軟骨組織，采用實時熒光定量 PCR 檢測 miR-4287 和 ADAMTS4 mRNA 表達量；然后分離培養(yǎng)軟骨細胞，取第 1 代骨關節(jié)炎細胞，給予 IL-1β 處理，觀察其對軟骨細胞 miR-4287 和 ADAMTS4 mRNA 表達的影響；分別給予 MAPK 信號通路抑制劑 SP600125 以及 NF-κB 信號通路抑制劑 SN50 預處理后聯(lián)合 IL-1β 刺激，觀察 IL-1β 介導的信號通路對軟骨細胞 miR-4287 和 ADAMTS4 mRNA 表達的影響；分別轉染 miR-4287 模擬物及其陰性對照、miR-4287 抑制物及其陰性對照，觀察 miR-4287 調控軟骨細胞 ADAMTS4 mRNA 及蛋白的表達。熒光素酶報告實驗驗證 miR-4287 與 ADAMTS4 mRNA 3’非翻譯區(qū)（untranslated region，UTR）的直接結合效應。 結果 與正常軟骨組織比較，骨關節(jié)炎軟骨組織 miR-4287 相對表達量下降，ADAMTS4 mRNA 相對表達量上升，比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。IL-1β 下調軟骨細胞 miR-4287 表達、上調 ADAMTS4 mRNA 表達，與未經 IL-1β 處理的軟骨細胞相比差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。經 IL-1β 介導的信號通路抑制劑預處理后，軟骨細胞 miR-4287 相對表達量上升，ADAMTS4 mRNA 相對表達量降低，與未經信號通路抑制劑預處理細胞相比，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。轉染 miR-4287 模擬物后，軟骨細胞內 ADAMTS4 mRNA 及蛋白表達均降低（P<0.05）；而轉染 miR-4287 抑制物后，軟骨細胞內 ADAMTS4 mRNA 及蛋白表達均升高（P<0.05）。無論結合位點為野生型或突變型，過表達 miR-4287 均不能改變報告載體的熒光素酶活性（P>0.05）。 結論 成軟骨相關 miR-4287 可能是一種與軟骨退變相關的 miRNA。miR-4287 能調控人軟骨細胞 ADAMTS4 表達，但不是通過靶向結合 mRNA 3’UTR 的方式發(fā)揮作用，其具體機制有待進一步研究。