目的 研究體外擴(kuò)增過程中,CD34+細(xì)胞內(nèi)B細(xì)胞特異單克隆鼠白血病毒整合位點(diǎn)基因1(B-cell-specific monoclonal leukemia virus insert site 1,Bmi1)和人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)基因的表達(dá)水平與其擴(kuò)增特性的相關(guān)性。 方法采用含F(xiàn)BS、干細(xì)胞生長因子、Flt-3配體和促血小板生成素的IMDM培養(yǎng)基體外培養(yǎng)臍血CD34+細(xì)胞,在28 d培養(yǎng)過程中檢測CD34+細(xì)胞擴(kuò)增倍數(shù)、CD34+細(xì)胞比生長速率以及集落形成率的變化趨勢,并采用熒光定量PCR檢測體外擴(kuò)增過程中CD34+細(xì)胞內(nèi)Bmi1和hTERT基因表達(dá)水平變化,分析以上基因表達(dá)水平與CD34+細(xì)胞擴(kuò)增特性之間的關(guān)系。 結(jié)果經(jīng)過28 d的體外培養(yǎng),CD34+細(xì)胞共擴(kuò)增了(20.1 ± 3.5)倍,其占擴(kuò)增后總細(xì)胞的比例由培養(yǎng)前的95.5% ± 2.6%下降至2.1% ± 0.4%;CD34+細(xì)胞的比生長速率和集落形成率均在培養(yǎng)7 d后出現(xiàn)明顯下降,而細(xì)胞內(nèi)Bmi1和hTERT mRNA的表達(dá)水平在培養(yǎng)7 d時(shí)達(dá)最高,此后逐漸下降至培養(yǎng)前水平。 結(jié)論Bmi1和hTERT基因表達(dá)與CD34+細(xì)胞體外增殖能力可能存在一定相關(guān)性。
目的 研究CD34+ 細(xì)胞體外誘導(dǎo)的肝樣細(xì)胞在小鼠體內(nèi)修復(fù)受損肝組織的作用。 方法 采用密度梯度離心法分離臍血中的單個(gè)核細(xì)胞并獲得富集CD34+ 細(xì)胞,調(diào)整細(xì)胞密度為1 × 105 個(gè)/mL,使用含干細(xì)胞生長因子(stem cell factor,SCF)、肝細(xì)胞生長因子(hepatocyte growth factor,HGF)、EGF、抑瘤素M(oncostatin M,OSM)和bFGF的無血清培養(yǎng)基(5 種細(xì)胞因子濃度分別為50、20、20、10、10 ng/mL)體外誘導(dǎo)10 d。取6 周齡雌性ICR 小鼠48 只,以二乙酰氟氨和CCl4 注射制備肝損傷模型。將小鼠隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對照組(n=24),實(shí)驗(yàn)組將誘導(dǎo)后細(xì)胞(1.6 × 105 個(gè) / 只,含CD34+ 細(xì)胞1 × 104 個(gè))通過尾靜脈注射入肝損傷小鼠體內(nèi),對照組注射等量無血清培養(yǎng)基,術(shù)后7、14、21、28 d 兩組分別處死6 只小鼠,行HE 染色、PCR 凝膠電泳、免疫組織化學(xué)染色及肝功能檢測。 結(jié)果 HE 染色顯示,對照組術(shù)后28 d時(shí)肝組織形態(tài)恢復(fù)正常,實(shí)驗(yàn)組術(shù)后14 d 時(shí)即已恢復(fù)正常。PCR 凝膠電泳和免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示,實(shí)驗(yàn)組術(shù)后各個(gè)時(shí)間點(diǎn)在肝組織中均可檢測到表達(dá)人血清白蛋白的細(xì)胞,而對照組術(shù)后28 d 內(nèi)均未檢測到。肝功能檢測結(jié)果顯示,對照組術(shù)后14 d 時(shí)谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性恢復(fù)正常,實(shí)驗(yàn)組小鼠術(shù)后7 d 時(shí)即已恢復(fù)正常;但兩組谷草轉(zhuǎn)氨酶活性在28 d 內(nèi)均未恢復(fù)。 結(jié)論 CD34+ 細(xì)胞經(jīng)體外向肝細(xì)胞方向誘導(dǎo)分化后,能在肝損傷的小鼠體內(nèi)促進(jìn)受損肝組織形態(tài)和功能的恢復(fù),并能在小鼠受損肝臟中轉(zhuǎn)化為人源肝細(xì)胞。
【摘 要】 目的 探討通過細(xì)胞因子及其組合體外誘導(dǎo)臍血CD34+ 細(xì)胞轉(zhuǎn)分化成肝樣細(xì)胞的效果。 方法 采用密度梯度離心法分離臍血單個(gè)核細(xì)胞(mononuclear cell,MNC),從MNC 中獲得富集CD34+ 細(xì)胞。選用人白血病抑制因子、制瘤素M、bFGF、aFGF、肝細(xì)胞生長因子、EGF 及干細(xì)胞生長因子7 種細(xì)胞因子,濃度分別為10、10、10、10、20、20和50 ng/mL,設(shè)計(jì)了 49 種細(xì)胞因子組合,分別采用這些細(xì)胞因子組合體外培養(yǎng)臍血CD34+ 細(xì)胞,培養(yǎng)周期為28 d。以新鮮臍血CD34+ 細(xì)胞作為對照。每7 天檢測誘導(dǎo)后細(xì)胞中細(xì)胞角蛋白19(cytokeratin19,CK-19)、CK-18、谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS)、人血清白蛋白(albumin,ALB)以及甲胎蛋白(α-fetoprotein,AFP)的mRNA 轉(zhuǎn)錄情況,并應(yīng)用免疫熒光法、過碘酸- 雪夫(periodic acid-schiff,PAS)染色與吲哚菁綠(indocyanine green,ICG)染色法檢測細(xì)胞分泌ALB、合成糖原以及解毒能力,以此判斷是否存在臍血CD34+ 細(xì)胞體外向肝樣細(xì)胞的轉(zhuǎn)分化。 結(jié)果 在經(jīng)細(xì)胞因子誘導(dǎo)后的CD34+ 細(xì)胞中均可檢測到人肝細(xì)胞所能表達(dá)的CK-19 、CK-18 和GS 的mRNA 條帶,未能檢測出肝細(xì)胞特征性的ALB 與AFP 的mRNA 條帶;而新鮮臍血CD34+ 細(xì)胞中以上5 種蛋白的mRNA 均未能檢出。免疫熒光染色觀察示誘導(dǎo)前后的細(xì)胞中均未能檢測到ALB 的表達(dá),且均不能有效吞噬ICG 染料。PAS 反應(yīng)檢測結(jié)果顯示,經(jīng)細(xì)胞因子誘導(dǎo)后的細(xì)胞紫紅色糖原沉積區(qū)域較新鮮臍血CD34+ 細(xì)胞增大,出現(xiàn)紫紅色區(qū)域的細(xì)胞增多。 結(jié)論 臍血CD34+ 細(xì)胞體外經(jīng)細(xì)胞因子組合誘導(dǎo)后,雖有肝細(xì)胞相關(guān)蛋白mRNA 表達(dá),但未能轉(zhuǎn)分化為肝樣細(xì)胞。
目的探討局部晚期食管鱗癌患者經(jīng)過程序性死亡受體-1(programmed cell death-1,PD-1)單抗聯(lián)合化療后是否需要進(jìn)一步手術(shù)治療,及其對生存的影響。 方法選取2020年1月—2022年6月在濟(jì)寧市第一人民醫(yī)院行免疫聯(lián)合化療治療的ⅡA~ⅢB的食管鱗癌患者,根據(jù)免疫聯(lián)合化療后是否進(jìn)行手術(shù)分為手術(shù)組和非手術(shù)組。比較兩組患者的一般臨床資料、毒副反應(yīng)、臨床完全緩解率(CCR),無進(jìn)展生存期(PFS),并分析兩組PFS和總生存期(OS)的差異。結(jié)果 納入58例患者,其中男45例、女13例。手術(shù)組和非手術(shù)組在一般臨床資料及毒副反應(yīng)方面差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。單因素分析結(jié)果顯示客觀緩解率、手術(shù)與PFS明顯相關(guān)(P<0.05)。二元 logistic回歸分析結(jié)果顯示,手術(shù)是唯一影響 PFS的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P=0.003)。K-M生存分析顯示手術(shù)組的PFS和OS均明顯高于非手術(shù)組[HR=0.13,95%CI(0.036,0.52),P<0.01;HR=0.17,95%CI(0.045,0.68),P<0.01]。結(jié)論局部晚期食管鱗癌患者經(jīng)過PD-1聯(lián)合化療治療后,仍需要聯(lián)合手術(shù)治療,這樣才能獲得更好的PFS和OS。
目的探討完全電視胸腔鏡(VATS)肺葉切除術(shù)治療早期肺癌的可行性、安全性及近期療效。 方法回顧性分析2012年1月至2013年5月濟(jì)寧市第一人民醫(yī)院連續(xù)138例早期肺癌施行肺葉切除術(shù)患者的臨床資料,其中完全電視胸腔鏡肺葉切除術(shù)組(VATS組)71例,男39例,女32例;年齡(57.9±10.6)歲;傳統(tǒng)開胸肺葉切除術(shù)組(開胸組)67例,男36例,女31例;年齡(60.3±8.2)歲。比較兩組患者手術(shù)時(shí)間、術(shù)中出血量、清掃淋巴結(jié)組數(shù)及個(gè)數(shù)、帶胸腔引流管時(shí)間、術(shù)后住院時(shí)間、術(shù)后第1 d、3 d、30 d疼痛視覺模擬評分(vision analogue score,VAS)以及術(shù)后并發(fā)癥發(fā)生情況。 結(jié)果兩組患者均順利完成手術(shù)。VATS組患者術(shù)中出血量[(147±113)ml vs.(146±91)ml]、清掃淋巴結(jié)個(gè)數(shù)[(9.9±3.6)枚vs.(10.0±3.6)枚]及組數(shù)[(3.1±1.3)組vs.(3.4±1.3)組]、術(shù)后第1 d、第3 d VAS評分與開胸組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);VATS組手術(shù)時(shí)間[(119±27)min vs.(135±29)min]、術(shù)后帶胸腔引流管時(shí)間[(3.0±0.9)d vs.(3.8±1.2)d]、術(shù)后住院時(shí)間[(8.0±2.1)d vs.(10.2±5.4)d]、術(shù)后第30 d VAS評分[(2.6±0.7)分vs.(3.2±1.1)分]及術(shù)后并發(fā)癥發(fā)生率均短于或少于開胸組(P<0.05)。VATS組術(shù)后隨訪59例,開胸組術(shù)后隨訪58例,隨訪時(shí)間2~18個(gè)月,兩組均無死亡,其中腦轉(zhuǎn)移1例,肝轉(zhuǎn)移1例,骨轉(zhuǎn)移2例。 結(jié)論對于早期肺癌的治療,采用完全胸腔鏡肺葉切除術(shù)安全可行,它具有創(chuàng)傷小、并發(fā)癥少,術(shù)后恢復(fù)快、慢性胸痛輕微等優(yōu)勢。同時(shí)能夠達(dá)到與常規(guī)開胸手術(shù)相同的規(guī)范化淋巴結(jié)清掃。
手術(shù)是治療可切除食管癌的首選方案,但是在局部晚期食管癌中,單純手術(shù)治療效果并不理想,因此以手術(shù)為主的綜合治療是最佳方案。其中局部晚期可切除食管癌新輔助治療已成為一種標(biāo)準(zhǔn)治療手段,新輔助治療包括新輔助化療、放化療、免疫治療、靶向治療等。隨著免疫治療在晚期食管癌的一線、二線治療中都取得顯著的療效以及可接受的毒性,新輔助免疫治療成為當(dāng)下局部晚期可切除食管癌的研究熱點(diǎn)。本文就新輔助免疫治療在局部晚期可切除食管癌的最新研究進(jìn)展以及存在的一些局限性進(jìn)行闡述。
目的 觀察新輔助信迪利單抗聯(lián)合化療治療局部晚期可切除食管鱗癌(esophageal squamous carcinoma,ESCC)患者的近期療效及安全性。方法 回顧性分析2020年4月—2022年4月于濟(jì)寧市第一人民醫(yī)院胸外科就診的經(jīng)新輔助免疫聯(lián)合化療后手術(shù)治療的局部晚期可切除ESCC患者的臨床資料。觀察主要病理緩解(Major pathological response,MPR)、病理完全緩解(pathological complete response,pCR)、R0切除率、安全性及術(shù)后生存情況等。結(jié)果 共納入43例術(shù)前接受至少1周期新輔助免疫治療的ESCC患者,其中男31例、女12例,年齡范圍為46~77歲,中位年齡為65歲。所有患者均順利完成手術(shù),無手術(shù)延遲。pCR率為14.0%(6/43),MPR率為58.1%(25/43),R0切除率為97.7% (42/43)?;颊咴谛螺o助治療期間及術(shù)后展現(xiàn)出可靠的安全性。2年總生存(overall survival,OS)率和無疾病生存(disease-free survival,DFS)率分別為90.7%,81.4%,Kaplan-Meier 生存分析及l(fā)og-rank檢驗(yàn)顯示MPR組相比于非MPR組有著更低的復(fù)發(fā)率和更好的生存。結(jié)論 新輔助信迪利單抗聯(lián)合化療治療局部晚期可切除ESCC患者具有較為顯著的臨床療效,并且安全可靠。
目的 探討新輔助免疫治療聯(lián)合化療在局部晚期可切除非小細(xì)胞肺癌患者的療效和安全性。方法 回顧性分析2021年4月—2024年1月在濟(jì)寧市第一人民醫(yī)院接受新輔助免疫治療聯(lián)合化療或單獨(dú)化療后行手術(shù)治療的非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者的臨床資料。根據(jù)術(shù)前新輔助方案,將患者分為聯(lián)合組和化療組,比較兩組患者的臨床資料。結(jié)果 共納入66例患者,其中男61例、女5例。聯(lián)合組53例,平均年齡(63.40±6.80)歲;化療組13例,平均年齡(58.62±8.30)歲。兩組患者年齡差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.02),其他基線資料差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。聯(lián)合組和化療組的主要病理緩解率(MPR)分別為54.7% 及 23.1%(P=0.042),病理完全緩解率(pCR)分別為39.6%及0.0%(P=0.006)。聯(lián)合組手術(shù)時(shí)間更短(P=0.039)。兩組術(shù)中出血、術(shù)后帶管時(shí)間、術(shù)后并發(fā)癥及總生存期(OS)、無事件生存期(EFS)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論 新輔助免疫聯(lián)合化療后行手術(shù)治療安全可行,長期療效需進(jìn)一步隨訪證實(shí)。