目的 為給單胚胎移植的臨床應用提供更可靠的證據(jù)，對國內(nèi)外公開發(fā)表的選擇性單個與兩個卵裂期胚胎移植的臨床研究進行Meta分析。方法 計算機檢索PubMed、Ovid、EMbase、MEDLINE、CENTRAL等中外生物醫(yī)學數(shù)據(jù)庫，收集有關選擇性單個與兩個卵裂期胚胎移植的隨機對照試驗（RCT）。按Cochrane系統(tǒng)評價方法，由兩位研究者獨立選擇文獻、提取資料并評價納入研究的方法學質(zhì)量后，采用RevMan 5.1軟件進行Meta分析。結果 共納入9個RCT，共計2 784例患者，其中試驗組1 452例，對照組1 332例。Meta分析結果顯示：與兩個卵裂期胚胎移植比較，選擇性單個卵裂期胚胎移植降低了每個移植周期的活產(chǎn)率［RR=0.66，95%CI（0.59，0.73），Plt;0.000 01］，顯著降低了多胎妊娠率［RR=0.05，95%CI（0.02，0.11），Plt;0.000 01］，亦降低了早產(chǎn)兒發(fā)生率［RR=0.39，95%CI（0.26，0.60），Plt;0.000 1］和低體重兒發(fā)生率［RR=0.25，95%CI（0.15，0.44），Plt;0.000 01］，但對異位妊娠率［RR=0.55，95%CI（0.11，2.77），P=0.47］、流產(chǎn)率［RR=1.33，95%CI（0.92，1.91），P=0.13］和圍產(chǎn)兒死亡率［RR=0.31，95%CI（0.03，2.76），P=0.29］無影響。結論 與兩個胚胎移植相比，選擇性單胚胎移植降低了每移植周期臨床妊娠率、多胎妊娠率、早產(chǎn)兒發(fā)生率及低體重兒發(fā)生率，在其他指標方面兩組無顯著差異。
目的 系統(tǒng)評價來曲唑+促性腺激素釋放激素拮抗劑方案對體外受精-胚胎移植（IVF-ET）中低反應患者促排卵的有效性。方法 計算機檢索VIP、CNKI、PubMed、EMbase和FMJS，收集有關來曲唑+拮抗劑方案對體外受精-胚胎移植低反應患者促排卵有效性的隨機對照試驗或臨床對照試驗。由2位評價員根據(jù)納入與排除標準獨立進行文獻篩選、資料提取和質(zhì)量評價后，采用RevMan 5.0軟件進行Meta分析。結果 最終納入6個研究，共977例患者。Meta分析結果顯示：對體外受精-胚胎移植中低反應患者，來曲唑+拮抗劑方案與對照組相比，Gn用量［MD= –8.05，95%CI（–13.67，–2.43），P=0.005］、HCG日E2值［MD= –1 026.41，95%CI（–1 949.61，–103.20），P=0.03］均小于對照組；而兩組獲卵數(shù)［MD= –0.61，95%CI（–2.41，–1.19），P=0.51］和臨床妊娠率［OR=1.03，95%CI（0.53，2.02），P=0.92］無明顯差異。結論 對IVF-ET低反應患者促排卵治療的有效性而言，來曲唑+拮抗劑方案較對照組臨床結局無明顯改善，但能減少Gn用量，降低IVF治療費用。來曲唑+拮抗劑方案為卵巢低反應患者提供了另一種臨床選擇。由于納入文獻存在質(zhì)量和數(shù)量不足以及方法學差異，建議本研究結論僅作為臨床分析的參考，尚需后效評價和不斷更新。
目的 系統(tǒng)性評價促性腺激素釋放激素（GnRH）拮抗劑在體外受精-胚胎移植治療中的有效性。方法 計算機檢索中國生物醫(yī)學文獻數(shù)據(jù)庫（1979～2010）、萬方數(shù)據(jù)庫（1994～2010）、中國學術期刊網(wǎng)專題全文數(shù)據(jù)庫（1994～2010）、中國生物醫(yī)學期刊數(shù)據(jù)庫（1989～2010）和PubMed（1997～2010）、ProQust Medical Library（1997～2010）、外文生物醫(yī)學期刊文獻數(shù)據(jù)庫（2000～2010），并手檢相關雜志，查找GnRH拮抗劑與GnRH激動劑比較在體外受精-胚胎移植治療中有效性的隨機對照試驗。按照納入與排除標準選擇試驗、評價質(zhì)量后進行Meta分析。結果 共納入6個RCT，合計1 208例患者，其方法學質(zhì)量均為B級。Meta分析結果顯示：與GnRH激動劑組相比，GnRH拮抗組刺激天數(shù)［WMD= –1.07，95%CI（–1.38，–0.76）］和獲卵數(shù)［WMD= –1.80，95%CI（–2.48，–1.12）］均更低，差異有統(tǒng)計學意義；而在Gn量［WMD= –0.49，95%CI（–1.63，0.66）］、HCG日子宮內(nèi)膜厚度［WMD= –0.09，95%CI（–0.42，0.24）］、妊娠率［Peto OR=0.83，95%CI（0.65，1.05）］、OHSS率［Peto OR=0.77，95%CI（0.35，1.72）］和流產(chǎn)率［Peto OR=1.49，95%CI（0.79，2.82）］上，兩組差異均無統(tǒng)計學意義。結論 GnRH拮抗劑較之GnRH激動劑刺激天數(shù)短，所需Gn量少，不明顯影響妊娠率，同時可減少OHSS的發(fā)生，臨床上使用相對靈活，具有較好的接受性，為體外受精-胚胎移植超促排卵治療提供了另一種選擇。受納入研究質(zhì)量和例數(shù)限制，上述結論尚需開展更多設計嚴謹?shù)亩嘀行?、大樣本隨機對照試驗予以證實和更新。
目的 探討3種不同助孕方案在≥40歲婦女體外受精-胚胎移植（IVF-ET）周期中的臨床效果。 方法 回顧性分析2010年8月－2012年2月期間，于四川大學華西第二醫(yī)院生殖中心行IVF-ET助孕、年齡≥40歲婦女共245個周期的臨床資料，排除一側卵巢缺如患者3例，余242個周期根據(jù)助孕方案不同分為3組：拮抗劑組（GnRH-A方案組）44個周期、長方案組109個周期及短方案組89個周期，比較3種方式助孕的臨床效果。 結果 3組均無早發(fā)黃體生成素峰；長方案組應用促性腺激素（Gn）的時間最長，應用Gn數(shù)量最多，獲得最高的獲卵數(shù)及獲胚數(shù)（P＜0.05）；3組的受精率、優(yōu)胚率、冷凍胚胎數(shù)、周期取消率、卵巢過度刺激綜合征發(fā)生率、早期流產(chǎn)率均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），短方案組的種植率及臨床妊娠率最低（P＜0.05）。 結論 GnRH-a長方案在≥40歲婦女的IVF-ET周期中具有較好的臨床結局，在≥40歲婦女IVF-ET周期中具有與長方案相似的結局，并且可以減少Gn使用量，提高卵泡及胚胎質(zhì)量，短方案組對≥40歲婦女臨床效果較差。
介紹胚胎先灌后切多臟器聯(lián)合切取供帶血管胰及甲狀腺——甲狀旁腺移植的1例經(jīng)驗。作者認為此法可避免熱缺血損害，并能同時提供多個臟器，優(yōu)于常規(guī)的先切后灌法，從而為解決大齡胎尸供著缺乏的矛盾提供了一條新途徑。
目的 利用直接貼壁法體外誘導人胚胎干細胞分化為心肌細胞，并檢測其分化效率。 方法 人胚胎干細胞以1×105個/cm2的細胞密度傳代到鋪備有基質(zhì)膠的培養(yǎng)皿中培養(yǎng)，用帶8 ng/ml堿性成纖維細胞生長因子（bFGF）的條件培養(yǎng)基培養(yǎng)6 d后，更換為RPMI 1640-B27培養(yǎng)基，同時加入100 ng/ml的人重組activin A處理24 h，接著再加入10 ng/ml的人重組骨形態(tài)發(fā)生蛋白4 （BMP4） 處理4 d，之后更換為不帶誘導因子的RPMI 1640-B27培養(yǎng)基，每隔2～3 d換1次培養(yǎng)基，持續(xù)2～3周。在光學顯微鏡下觀察記錄出現(xiàn)跳動心肌細胞的時間和跳動頻率，并計算跳動克隆百分比，24孔板一組，共記錄4組96孔；用免疫熒光染色法檢測心肌細胞特異標志物心肌肌鈣蛋白T （cTnT）；膜片鉗實驗檢測心肌細胞自發(fā)性動作電位；跳動心肌細胞經(jīng)過24 h缺氧刺激后，用凋亡試劑盒檢測心肌細胞凋亡比例。結果 大量的自發(fā)跳動心肌細胞在誘導分化13 d左右開始出現(xiàn)。分化出現(xiàn)自發(fā)跳動心肌細胞的時間為（13.0±1.1） d，百分比為66.7%，跳動頻率為（63.0±7.0）次/分；跳動心肌細胞cTnT染色陽性；跳動心肌細胞檢測到自發(fā)性動作電位；跳動心肌細胞缺氧24 h后檢測到凋亡比率為8.0%±0.5%。 結論 國內(nèi)首次利用直接貼壁法在體外誘導人胚胎干細胞分化為心肌細胞，分化效率達到66.7%，分化時間13 d左右。
目的建立一種安全、有效、經(jīng)濟且適于人孤雌胚胎干細胞（human parthenogenetic embryonic stem cells，hPESCs）體外培養(yǎng)的無飼養(yǎng)層培養(yǎng)體系。 方法將常規(guī)體外培養(yǎng)的hPESCs分別以mTeSRTMl培養(yǎng)基（對照組）和人包皮成纖維細胞的條件培養(yǎng)基（human foreskin fibroblasts-conditional medium，hFFs-CM）（實驗組）擴增培養(yǎng)，倒置顯微鏡下觀察兩組無飼養(yǎng)層培養(yǎng)體系下hPESCs的生長狀態(tài)；采用ALP檢測和核型分析研究hPESCs生物學特性；采用RT-PCR檢測hPESCs全能性標記物Oct-4的表達情況；通過體外和體內(nèi)分化實驗觀察hPESCs向3個胚層分化的潛能。 結果兩組hPESCs形態(tài)規(guī)則、不易分化，在形態(tài)、擴增速度等方面無明顯差異；已成功在體外培養(yǎng)15代，兩組均能保持正常女性的二倍體核型46，XX和全能性；RT-PCR檢測示兩組Oct-4 mRNA均呈陽性表達；體外分化均可形成擬胚體；在裸鼠體內(nèi)均可形成含有3個胚層組織成分的畸胎瘤。 結論hFFs-CM無飼養(yǎng)層培養(yǎng)體系可長期支持hPESCs的生長并維持其未分化狀態(tài)，成功建立了一種不僅能維持hPESCs的有效擴增、減少動物源性污染、降低培養(yǎng)成本，還可滿足臨床大規(guī)模應用的hPESCs無飼養(yǎng)層培養(yǎng)體系。
目的 采用單層分步法誘導人胚胎干細胞（human embryonic stem cells，hESCs）分化為肝樣細胞，建立hESCs 分化為肝細胞的誘導體系。 方法 將hESC 株H1 細胞接種到Matrigel 包被的培養(yǎng)板上，早期（細胞貼壁4 d 后）加入含有細胞因子活化素A（Activin A）的分化液誘導5 d；中期將誘導液換為含F(xiàn)GF-1 和BMP-4 的肝分化液誘導6 d；最后添加肝細胞生長因子（hepatocyte growth factor，HGF）和制癌蛋白M（Oncostatin M，OSM）繼續(xù)誘導分化5 ～ 7 d。采用免疫細胞化學染色、RT-PCR、過碘酸- 雪夫（Periodicacid-Schiff，PAS）反應鑒定分化細胞的性質(zhì)。 結果 經(jīng)ActivinA、FGF-1、BMP-4、HGF 和OSM 連續(xù)誘導的hESCs 呈多角形、卵圓形或圓形，排列緊密；部分細胞出現(xiàn)二核或三核，呈現(xiàn)肝細胞所特有的形態(tài)。分化細胞在誘導早期表達SOX17、叉頭框（Forkhead box，F(xiàn)OX）A2、GATA-4，中期表達甲胎蛋白（αfetoprotein，AFP）、白蛋白、角蛋白18，晚期表達成熟肝細胞特異性基因乙醇脫氫酶1C、細胞色素P4501B1。免疫細胞化學染色示，Activin A 誘導后，細胞呈SOX17 和FOXA2 陽性；經(jīng)FGF-1 和BMP-4 誘導后，呈AFP 和α1 抗胰蛋白酶陽性。HGF 和OSM 誘導后，PAS 糖原染色檢測陽性。 結論 采用單層分步法逐步添加細胞因子，可誘導hESCs 分化為肝樣細胞。該分化體系可為肝細胞移植、肝組織工程等臨床治療提供一個有效的細胞來源。
目的 采用簡單貼壁培養(yǎng)方法誘導胚胎干細胞（embryonic stem cell，ESC）分化為內(nèi)皮樣細胞，為組織工程血管及細胞替代治療提供新的種子細胞。 方法 小鼠ESC 株SV129 按2 × 104 個/cm2 密度傳代培養(yǎng)，采用ESC培養(yǎng)基添加1 000 U/mL 白血病抑制因子（leukaemia inhibitory factor，LIF）維持其未分化狀態(tài)。撤除LIF，ESC 懸浮培養(yǎng)形成擬胚體（embryoid body，EB），將培養(yǎng)第4 天的EB 置于含VEGF 的培養(yǎng)基中貼壁培養(yǎng)，誘導分化。采用免疫組織化學染色、流式細胞儀分析、DiI 標記的乙?；兔芏戎鞍祝?，1-dioctadecyl-3，3，3，3-tetramethylindocarbocyanine-labeled acetylated low density lipoprotein，DiI-Ac-LDL）攝取實驗以及透射電鏡檢查鑒定分化細胞的性質(zhì)。 結果 分化產(chǎn)生的內(nèi)皮樣細胞具有內(nèi)皮細胞形態(tài)特征，能攝取DiI-Ac-LDL。ESC 誘導分化培養(yǎng)產(chǎn)生的第15 代細胞免疫組織化學染色呈Flk-1 和CD31 陽性；流式細胞儀檢測ESC 傳至9 代后CD31 陽性細胞gt; 90%；透射電鏡可見懷布爾- 帕拉德體及內(nèi)皮細胞間緊密連接。 結論 采用簡單貼壁培養(yǎng)的方法，單獨使用VEGF 即可誘導ESC 分化為內(nèi)皮樣細胞。誘導培養(yǎng)方法操作簡便，經(jīng)濟實用，可為組織工程血管及細胞替代治療提供所需內(nèi)皮樣細胞
目的 探討1，25（OH）2VD3在誘導小鼠胚胎干細胞（embryonic stem cells，ESCs）向成骨細胞分化過程中的重要作用。 方法 取2 d 齡昆明小白鼠顱蓋骨進行成骨細胞分離培養(yǎng)；參照并改進zur Nieden 等的方法制備擬胚體（embryoid bodies，EBs）。將EBs 根據(jù)培養(yǎng)液不同分為4 組：A 組：不含白血病抑制因子EBs 培養(yǎng)液；B 組：EBs 培養(yǎng)液中添加50 μg/mL 維生素C、50 mmol/L β- 磷酸甘油；C 組：培養(yǎng)液同B 組，另每孔接種5 × 104 個第3 代成骨細胞；D組與C 組相同，另添加4 × 10-9 mol/L 1，25（OH）2VD3。檢測ALP 活性，實時定量PCR 檢測骨鈣素mRNA 的表達，茜素紅S 染色進行礦化骨結節(jié)計數(shù)。 結果 EBs 貼壁后前5 d，各組ALP 表達未發(fā)生明顯變化，5 d 后ALP 表達逐漸增加，其中D 組在第20 天表達水平最高。光鏡下可見輪廓清晰大小不等的紅色結節(jié)。茜素紅S 染色測得A、B、C、D 組骨結節(jié)數(shù)分別為（20 ± 8）、（18 ± 5）、（31 ± 1）、（50 ± 1）個；實時定量PCR 測得A、B、C、D 組骨鈣素 mRNA 分別為10.18 ± 1.17、20.29 ± 1.03、18.84 ± 4.07、32.15 ± 5.23；C、D 組與A、B 組比較差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05），A、B 組間比較差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05），C、D 組間比較差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）。 結論 在濃度為4 × 10-9 mol/L 1，25（OH）2VD3和維生素C、β- 磷酸甘油共同作用下，有效促進了ESCs 源性成骨細胞的產(chǎn)生。