目的 評價載萬古霉素的注射型硼酸鹽殼聚糖復(fù)合物（vancomycin-loaded borate glass/chitosan composite，VBC）的體內(nèi)、外生物活性及治療骨髓炎效果，探討其生物降解及抗生素緩釋規(guī)律，為臨床應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。 方法 VBC 固相由硼酸鹽玻璃及萬古霉素粉劑組成，液相由殼聚糖、檸檬酸和葡萄糖按照質(zhì)量比 1 ∶ 10 ∶ 20 比例混勻制成，固相及液相按質(zhì)量比2 ∶ 1 比例混合凝固獲得VBC。硫酸鈣粉劑代替硼酸鹽玻璃，無菌生理鹽水代替殼聚糖溶液，同法制備載藥硫酸鈣（vancomycin-loaded calcium sulfate，VCS），作為對照。采用高效液相色譜法檢測VBC 及VCS 抗生素釋放率，抗生素雙重管稀釋法測定釋放抗生素的最低抑菌濃度（minimum inhibitory concentration，MIC）；掃描電鏡觀察浸泡前及D-Hank’s 溶液中浸泡2、4、8、16、40 d 的VBC、VCS 降解情況，X 射線衍射儀分析VBC 浸泡后40 d 物相組成。取33 只成年健康新西蘭大白兔，雌雄不限，體重2.25 ～ 3.10 kg；采用Norden 方法制備右脛骨近端骨髓炎模型。4 周后將28 只骨髓炎模型制備成功的大白兔隨機(jī)分成4 組：A 組（n=8）單純清創(chuàng)，B、C 組（n=8）清創(chuàng)后注入VCS 及VBC 至缺損處，D 組（n=4）不作任何處理。術(shù)后2 個月攝X 線片并行Norden 評分，取缺損處標(biāo)本行組織學(xué)觀察。 結(jié)果 VBC 釋藥過程持續(xù)30 d，藥物緩釋前8 d 釋放率達(dá)75%，最終釋放率達(dá)90% 以上；VCS 釋藥過程僅持續(xù)16 d。VBC、VCS 的MIC 均為2 μg/mL。掃描電鏡觀察，VCS 浸泡前為光滑玻璃晶體表面，4 d 后已大部分降解；VBC 浸泡前具有典型光滑玻璃表面，8 d 后結(jié)合相的玻璃部分溶化，40 d 后材料表面幾乎完全被生成的白色顆粒狀沉淀物覆蓋，材料結(jié)合疏松。VBC 浸泡40 dX 線衍射分析反應(yīng)生成物主要物相為羥基磷灰石。術(shù)后2 個月X 線片及組織學(xué)觀察示C 組骨髓炎癥狀均消失，優(yōu)于其余各組。A、B、C、D 組X 線片評分分別為（3.50 ± 0.63）、（2.29 ± 0.39）、（2.00 ± 0.41）、（4.25 ± 0.64）分，Smeltzer 評分分別為（6.00 ± 0.89）、（4.00 ± 0.82）、（3.57 ± 0.98）、（7.25 ± 0.50）分。其中D 組評分顯著高于A、B、C 組，A 組顯著高于B、C 組，比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）；B 組評分高于C 組，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）。 結(jié)論 VBC 具有藥物緩釋性及成骨性能，有望成為治療骨髓炎的理想材料。
目的 骨組織工程所使用的支架材料能否快速、有效地血管化是骨修復(fù)的關(guān)鍵。研究增強(qiáng)型生物活性玻璃/ 膠原復(fù)合材料對血管化的協(xié)同和促進(jìn)作用，為構(gòu)建血管化組織工程骨修復(fù)骨缺損尋找適宜的支架材料。 方法 體外分離獲取人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVECs），并通過血管性血友病因子（von Willebrand factor，vWF）與CD34 抗原鑒定，取第1 代細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。將細(xì)胞接種于增強(qiáng)型生物活性玻璃/ 膠原復(fù)合材料上，掃描電鏡觀察細(xì)胞黏附情況。取細(xì)胞接種于增強(qiáng)型生物活性玻璃/ 膠原復(fù)合材料作為實(shí)驗(yàn)組，等量細(xì)胞直接接種于培養(yǎng)板常規(guī)培養(yǎng)作為對照組，采用alarmarBlue 法動態(tài)檢測細(xì)胞增殖率，實(shí)時熒光定量PCR 檢測內(nèi)皮細(xì)胞相關(guān)基因VEGF、血管內(nèi)皮生長因子受體1（fms-related tyrosine kinase 1，F(xiàn)lt-1）、血管內(nèi)皮生長因子受體2（kinase insert domain receptor，Kdr）的mRNA 表達(dá)。取SD 大鼠6 只，將支架材料包埋于大鼠股內(nèi)側(cè)皮下，實(shí)驗(yàn)組采用增強(qiáng)型生物活性玻璃/ 膠原復(fù)合材料、中央軸向植入血管束，對照組采用非增強(qiáng)型生物活性玻璃/ 膠原復(fù)合材料，分別于植入5、10 d 取出，行冰凍切片并HE 染色動態(tài)觀察支架材料內(nèi)部的血管化狀態(tài)。 結(jié)果 分離的細(xì)胞通過形態(tài)學(xué)及vWF、CD34 免疫熒光鑒定為HU VECs。掃描電鏡示HUVECs 在支架材料上黏附較好。HUVECs 在實(shí)驗(yàn)組支架材料上增殖明顯，在第3 天后細(xì)胞增殖率開始高于對照組，11 d 達(dá)到增殖平臺期時細(xì)胞數(shù)仍多于對照組（P lt; 0.05）。實(shí)時熒光定量PCR 檢測示，培養(yǎng)3 d 實(shí)驗(yàn)組VEGF、Flt-1、Kdr 的mRNA 表達(dá)均顯著高于對照組（P lt; 0.05）。包埋大鼠皮下實(shí)驗(yàn)可見，實(shí)驗(yàn)組5、10 d 時植入的血管仍通暢，其周圍新生血管隨時間延長而增多，材料周緣可見宿主血管浸潤生長，但新生血管稀疏；對照組僅有纖維組織生長，10 d 時材料已大部分降解，組織難以長入。 結(jié)論 增強(qiáng)型生物活性玻璃/ 膠原復(fù)合材料在大鼠體內(nèi)外可促進(jìn)血管化，可能適于作為構(gòu)建血管化組織工程骨的支架材料。
（正文）由“組織工程”發(fā)展起來的“再生醫(yī)學(xué)”概念已有10 余年了，經(jīng)過10 余年的發(fā)展歷程，再生醫(yī)學(xué)已經(jīng)取得了很多進(jìn)展，不僅弄清了不少科學(xué)問題，為后續(xù)研究創(chuàng)造了條件，同時也為臨床應(yīng)用提供了依據(jù)。
目的 探討負(fù)載rhBMP-2 的CPC 活性人工骨修復(fù)骨缺損的臨床應(yīng)用，評價其臨床使用效果和安全性。 方法 2006 年6 月－ 2007 年9 月，采用負(fù)載rhBMP-2 的CPC（rhBMP-2/CPC 組）和單純CPC（對照組）修復(fù)骨缺損112 例，骨缺損范圍為1 cm × 1 cm × 1 cm～ 4 cm × 3 cm × 3 cm。其中對照組63 例，男31 例，女32 例；年齡17 ～ 70 歲，平均47.4 歲。骨缺損部位：跟骨19 例，脛骨平臺20 例，肱骨近端8 例，橈骨遠(yuǎn)端9 例，胸腰椎7 例。rhBMP-2/CPC 組49 例，男31 例，女18 例；年齡16 ～ 68 歲，平均45.6 歲。骨缺損部位：跟骨11 例，脛骨平臺16 例，肱骨近端7 例，橈骨遠(yuǎn)端2 例，脛骨遠(yuǎn)端2 例，胸腰椎11 例。術(shù)中采用負(fù)載rhBMP-2/CPC（2 ～ 5 g）或單純CPC（2 ～ 50 g）填充骨缺損。 結(jié)果 術(shù)后108 例傷口Ⅰ期愈合；術(shù)后2 周對照組1 例及rhBMP-2/CPC 組3 例傷口有淡黃色清亮稀薄分泌物滲出，經(jīng)換藥及激素治療后愈合。所有患者未見毒性反應(yīng)，無皮疹或高熱，肝腎功能、血、尿常規(guī)及C 反應(yīng)蛋白均正常。112 例均獲隨訪，隨訪時間12 ～ 24 個月，平均13.2 個月。隨訪期間未發(fā)生骨髓炎，無再骨折，無明顯骨缺損修復(fù)后再塌陷，無鋼板及螺釘松動、斷裂等并發(fā)癥，脊柱手術(shù)的椎體前緣無高度不足發(fā)生。兩組術(shù)后3 個月骨折均達(dá)骨性愈合，無延遲愈合或骨不連發(fā)生。患肢活動情況良好，屈伸功能達(dá)正?；顒铀?。 結(jié)論 負(fù)載rhBMP-2 的CPC 活性人工骨修復(fù)骨缺損安全、有效，是一種理想的骨缺損修復(fù)材料。
“組織工程”概念提出至今已有20 年了?；仡?0年發(fā)展進(jìn)程，在種子細(xì)胞、三維支架材料、生物活性因子、組織構(gòu)建、體內(nèi)植入等方面已取得很大進(jìn)展，并有一些臨床應(yīng)用的實(shí)例證明組織工程的研究路線是正確的，展現(xiàn)了良好的產(chǎn)業(yè)化前景……
目的 探討新型生物活性玻璃（bioactive glass，BG）復(fù)合自體紅骨髓移植修復(fù)良性骨腫瘤切除及搔刮術(shù)后骨缺損的臨床效果。 方法 2004 年1 月－ 2007 年5 月，收治良性骨腫瘤患者34 例。其中男21 例，女13 例；年齡8 ～ 56 歲，平均25.6 歲。病程2 周～ 4 個月。其中單體骨囊腫14 例，骨纖維結(jié)構(gòu)不良6 例，骨樣骨瘤3 例，非骨化性纖維瘤4 例，內(nèi)生軟骨瘤2 例，骨嗜酸細(xì)胞性肉芽腫2 例，骨巨細(xì)胞瘤3 例。腫瘤范圍為2.0 cm × 1.5 cm × 1.0 cm ～ 9.0 cm ×3.0 cm × 2.5 cm，骨缺損范圍為3.0 cm × 2.0 cm × 1.5 cm ～ 11.0 cm × 3.5 cm × 3.0 cm。徹底清除病灶，殘腔滅活處理，將5 ～ 20 g 條塊狀BG 復(fù)合20 ～ 60 mL（平均40 mL）自體骨髓填充骨缺損。6 例合并移位的病理性骨折結(jié)合鋼板或髓內(nèi)釘內(nèi)固定。術(shù)后觀察全身及切口局部反應(yīng)，定期復(fù)查X 線片，觀察骨質(zhì)生長情況。 結(jié)果 術(shù)后患者均無傷口滲液、結(jié)晶析出、周緣皮疹搔癢等免疫排斥反應(yīng)發(fā)生，傷口均Ⅰ期愈合。34 例均獲隨訪，隨訪時間1 ～ 4 年，平均24.6 個月。無再次骨折、骨腫瘤復(fù)發(fā)及明顯并發(fā)癥發(fā)生。術(shù)后平均16 周，下肢骨腫瘤患者棄拐行走，上肢骨腫瘤患者能持物和正常學(xué)習(xí)工作，并可行輕體力勞動。X 線片觀察：術(shù)后1 個月可見BG 替代骨和宿主骨接觸界面變模糊；術(shù)后2 個月，替代骨影開始變淡，骨缺損處有部分新骨形成；術(shù)后4 個月骨缺損處密度增高，替代骨與宿主骨融合；術(shù)后6 ～ 10 個月，BG 均被新生骨組織替代，骨皮質(zhì)增厚，骨髓腔改建并再通。 結(jié)論 BG 具有良好的骨傳導(dǎo)性及骨誘導(dǎo)性，BG 復(fù)合自體紅骨髓移植修復(fù)良性骨腫瘤術(shù)后骨缺損創(chuàng)傷小，并發(fā)癥少，經(jīng)骨替代后可完成骨修復(fù)。
目的 觀察生物活性玻璃和透明質(zhì)酸鈉結(jié)合修復(fù)材料(康倍)治療燒傷創(chuàng)面的療效。方法 2006年3月～9月，收治燒傷患者20例，其中男16例，女4例；年齡18~58歲，平均40歲。創(chuàng)面類型：深Ⅱ度燒傷創(chuàng)面7例，Ⅲ度燒傷殘余肉芽創(chuàng)面9例，植皮后皮間隙4例。按隨機(jī)、同體對照原則，試驗(yàn)組與對照組各20個創(chuàng)面，創(chuàng)面范圍2.0 cm×1.5 cm~40.0 cm×20.0 cm。試驗(yàn)組創(chuàng)面以康倍換藥，對照組以空白膏劑換藥。分別于用藥后1、3、6、11、16及21 d觀察各創(chuàng)面的肉芽生長和愈合情況，并檢查用藥前后肝、腎功能及血常規(guī)。結(jié)果 試驗(yàn)組創(chuàng)面用藥后11 d愈合3例，16 d愈合4例，21 d愈合4例；對照組創(chuàng)面觀察期無完全愈合者。觀察期內(nèi)愈合面積達(dá)2/3以上者試驗(yàn)組18例，對照組為1例。按照創(chuàng)面愈合評價標(biāo)準(zhǔn)，試驗(yàn)組顯效18例，有效1例，可疑有效1例，總有效率為95%；對照組顯效1例，有效9例，可疑有效10例，總有效率為50%，試驗(yàn)組療效明顯優(yōu)于對照組(Plt;0.01)?；颊咧委熐昂笱Ｒ?guī)及肝、腎功能等指標(biāo)無明顯異常改變。結(jié)論 康倍具有良好促進(jìn)肉芽生長、加快創(chuàng)面愈合的作用。
目的 探討兩步冷凍法不同冷凍溫度對周圍神經(jīng)雪旺細(xì)胞（Schwann cell， SC）生物活性的影響。方法 雌性SD大鼠80只，切取雙側(cè)坐骨神經(jīng)2 cm，隨機(jī)分為8組，每組10只20條坐骨神經(jīng)。1組為新鮮對照組，不作任何處理；另7組為實(shí)驗(yàn)組，采用兩步冷凍法分別降溫至-20、-30、-40、-50、-60、-70和-80 ℃，保存2 h后轉(zhuǎn)入液氮中(-196℃)保存48 h，取出后在37℃水浴箱中快速復(fù)溫1 min，消化收集各組SC，經(jīng)CalceimAM熒光染色，作流式細(xì)胞儀分析，求出各組細(xì)胞平均熒光強(qiáng)度，再經(jīng)共聚焦顯微鏡直接觀察SC熒光強(qiáng)度，進(jìn)一步判斷SC的生物活性。結(jié)果 經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測各組SC熒光強(qiáng)度為新鮮對照組242.522 0±9.568 4，-20 ℃組168.677 0±10.207 0，-30 ℃組214.992 0±8.329 1，-40 ℃組235.526 0±9.280 5，-50 ℃組222.434 0±8.515 5，-60 ℃組217.409 0±9.515 7，-70 ℃組132.376 0±13.459 7，-80 ℃組108.1320±16.033 1；-40℃組熒光強(qiáng)度較其它實(shí)驗(yàn)組強(qiáng)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。共聚焦顯微鏡觀察各組SC生物活性，并作熒光強(qiáng)度分析：新鮮對照組143.700 0±5.567 8，-20 ℃組119.700 0±5.165 1，-30 ℃組121.300 0±4.347 4，-40 ℃組139.700 0±5.012 2，-50 ℃組121.000 0±4.546 1，-60 ℃組118.400 0±4.926 1，-70 ℃組81.200 0±5.116 4，-80 ℃組79.000 0±5.716 4；新鮮對照組SC生物活性較各實(shí)驗(yàn)組強(qiáng)，-40℃組SC生物活性較其它實(shí)驗(yàn)組強(qiáng)，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。結(jié)論 兩步冷凍法均能較好保存SC生物活性，以-40 ℃組SC生物活性最好。
目的 探討新型生物活性陶瓷復(fù)合材料成骨效應(yīng)，為人工骨替代材料臨床應(yīng)用提供依據(jù)。方法 小鼠96只，隨機(jī)分為4組，每組24只。采用具有誘導(dǎo)活性的骨形成蛋白（bone morphogenetic protein，BMP）分別與羥基磷灰石（hydroxyapatite，HA）、磷酸三鈣（tricalcium phosphate，TCP）、膠原復(fù)合羥基磷灰石（collagen HA，CHA）及氟化羥基磷灰石（fluoridated HA，F(xiàn)HA）復(fù)合，將4種復(fù)合材料（HA/BMP，TCP/BMP，CHA/BMP及FHA/BMP）分別植入4組小鼠左側(cè)股部肌肉內(nèi)為實(shí)驗(yàn)側(cè)，右側(cè)分別植入HA、TCP、CHA及脫鈣牙基質(zhì)（decalcified dentin matrix，DDM）作為對照，在1、3、5及7周取材作大體觀察、組織形態(tài)學(xué)、掃描電鏡觀察及生化測定。結(jié)果 各組實(shí)驗(yàn)側(cè)及第4組對照側(cè)植入后1周軟骨形成，第1～3組對照側(cè)為纖維結(jié)締組織；3周時各組實(shí)驗(yàn)側(cè)均有較多的成熟骨組織，組織堿性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）染色均為陽性。各組對照側(cè)材料被結(jié)締組織包囊，ALP染色陰性，未見骨組織形成。各組實(shí)驗(yàn)側(cè)材料ALP活性及磷（phosphrus，P）檢測水平明顯高于相應(yīng)的對照側(cè)材料，實(shí)驗(yàn)側(cè)與對照側(cè)比較具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），而TCP/BMP復(fù)合材料明顯高于另3種復(fù)合材料，有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。5、7周各實(shí)驗(yàn)側(cè)及對照側(cè)骨形成，組織ALP反應(yīng)、ALP及P檢測水平與3周結(jié)果基本一致。結(jié)論 BMP復(fù)合HA、TCP、CHA及FHA 4種材料都具有誘導(dǎo)成骨活性的作用，其中TCP/BMP復(fù)合材料最明顯，是一種較理想的人體硬組織替代材料。
將成骨細(xì)胞與生物活性陶瓷復(fù)合培養(yǎng)，賦于材料以“生命”活性，可能會產(chǎn)生一種新型人工材料。為研究成骨細(xì)胞與生物活性陶瓷間的關(guān)系，選用新西蘭大白兔，取脛骨外骨膜組織，經(jīng)胰蛋白酶及膠原酶分步消化，分離出成骨細(xì)胞，用ＲＰＭＩ－１６４０培養(yǎng)液傳代培養(yǎng)１３代。通過對培養(yǎng)細(xì)胞堿性磷酸酶活性、體外礦化能力測定以及細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)觀察，證實(shí)其為典型的成骨細(xì)胞。將培養(yǎng)細(xì)胞分別在三種生物活性陶瓷，包括生物活性玻璃陶瓷（ＢＧＣ）、羥基磷灰石（ＨＡ）和雙相羥基磷灰石（ＨＡ／ＴＣＰ）中培養(yǎng)４８小時后，利用掃描電鏡，３Ｈ－ＴｄＲ，ＸＲＤ，ＲＳ和ＥＤＸＡ等進(jìn)行綜合評價。結(jié)果表明：ＨＡ／ＴＣＰ上培養(yǎng)成骨細(xì)胞較另兩種生物材料上顯示出更好的類成骨細(xì)胞形態(tài)和更高的細(xì)胞分化率。對成骨細(xì)胞與生物活性陶瓷反應(yīng)的機(jī)制進(jìn)行了討論，并分析了影響細(xì)胞生長的材料因素，其結(jié)果為深入研究有生命的材料提供了依據(jù)。