目的研究恒河猴BMSCs在缺氧再給氧環(huán)境下對(duì)新生豬胰島活性和功能的保護(hù)作用。 方法取健康成年恒河猴5只，體重6～10 kg，取骨髓采用骨髓單核細(xì)胞貼壁培養(yǎng)法篩選獲得BMSCs；取3～5日齡新生長(zhǎng)白豬5 只，取胰腺以Ⅴ型膠原酶消化制備新生豬胰島。將實(shí)驗(yàn)分為胰島正常組（A組）、胰島加BMSCs正常組（B組）、胰島缺氧再給氧組（C組）、胰島加BMSCs缺氧再給氧組（D組），觀察比較常規(guī)培養(yǎng)和缺氧（1%O2）12 h再給氧24 h或48 h條件下，胰島的功能活性變化：二乙酸熒光素/碘化丙啶（propidium iodide，PI）染色計(jì)算胰島成活率；細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒8法檢測(cè)新生豬胰島的代謝活性；膜聯(lián)蛋白V-FITC/PI標(biāo)記后流式細(xì)胞儀檢測(cè)胰島凋亡率；葡萄糖刺激法分析胰島功能糖刺激指數(shù)（stimulation index，SI）。 結(jié)果C組較A、B組胰島團(tuán)更為分散，死亡細(xì)胞增多；D組較C組胰島團(tuán)完整，成活率更高。A、B、C、D組胰島成活率分別為90.2% ± 9.1%、88.3% ± 5.9%、52.3% ± 12.1%、71.4% ± 11.5%，C、D組顯著低于A、B組（P lt; 0.05），D組顯著高于C組（P lt; 0.05）。D組BMSCs以1∶10和1∶20比例與胰島缺氧再給氧共培養(yǎng)后，代謝活性顯著高于C組（P lt; 0.05）。A、B、C、D組胰島凋亡率分別為27.1% ± 3.2%、24.0% ± 1.0%、64.3% ± 1.8%、46.2% ± 1.4%，C、D組顯著高于A、B組（P lt; 0.05），但D組顯著低于C組（P lt; 0.05）。各時(shí)間點(diǎn)A、B組SI比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05），C組顯著低于A、B組（P lt; 0.05），在24 h和72 h時(shí)D組顯著高于C組（P lt; 0.05）。 結(jié)論BMSCs對(duì)缺氧再給氧誘導(dǎo)的新生豬胰島活性和功能損傷具有保護(hù)作用。
目的 建立恒河猴外周血CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞（regulatory T cells，Tregs）快速有效的分離純化方法。 方法4～5歲健康恒河猴10只，雌性4只，雄性6只，體重5～8 kg；于大隱靜脈抽取外周血，每只抽取8 mL。密度梯度離心法分離外周血單個(gè)核細(xì)胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC），分別采用非人靈長(zhǎng)類Tregs分離試劑盒的生物素標(biāo)記的混合抗體和磁珠標(biāo)記的抗生物素抗體陰性分選，以及大鼠抗人CD4-活化蛋白C（activated protein C，APC）和抗APC多選試劑盒中的磁珠標(biāo)記的抗APC抗體陽(yáng)性分選出 CD4+ T淋巴細(xì)胞，比較兩種方法獲得細(xì)胞的得率、活性及純度；選擇得率、活性和純度較高的分選方法獲得的CD4+ T淋巴細(xì)胞，用磁珠標(biāo)記的抗人CD25抗體進(jìn)行陽(yáng)性分選，獲得 CD4+CD25+ Tregs，流式細(xì)胞儀檢測(cè)純度、活性及FoxP3表達(dá)水平，以及Tregs對(duì)刀豆蛋白（concanavalin A，ConA）刺激的自體CD4+CD25-效應(yīng)性T淋巴細(xì)胞（effective T cells，Teffs）增殖的抑制功能。 結(jié)果CD4+ T淋巴細(xì)胞陽(yáng)性分選和陰性分選后，細(xì)胞活性均達(dá)95%左右，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05），但陽(yáng)性分選后CD4+ T淋巴細(xì)胞得率和純度均顯著高于陰性分選（P lt; 0.05）。后續(xù)CD4+CD25+ Tregs分選采用陽(yáng)性分選法獲得的CD4+ T淋巴細(xì)胞。經(jīng)雙陽(yáng)性分選收集的目的細(xì)胞中CD4+CD25+ Tregs占76.2% ± 8.6%，活細(xì)胞比例為93.3% ± 4.7%，F(xiàn)oxP3陽(yáng)性細(xì)胞比例為74.2% ± 6.9%?；旌吓囵B(yǎng)后Tregs均對(duì)ConA刺激的Teffs的增殖有抑制作用。 結(jié)論免疫磁珠雙陽(yáng)性分選法能有效分選出恒河猴外周血中有功能的CD4+CD25+ Tregs。