目的 探討在香煙誘導(dǎo)氣道上皮細(xì)胞黏蛋白MUC5AC 表達(dá)過(guò)程中Src / JNK 信號(hào)通路的作用。方法 香煙抽提物預(yù)處理的人氣道上皮A549 細(xì)胞, 分別以活性氧( ROS) 清除劑DMTU、JNK 特異性抑制劑SP600125 及Src 激酶抑制劑PP2 干預(yù)。測(cè)定各組細(xì)胞中ROS 的含量, 采用RT-PCR、ELISA 法觀察細(xì)胞黏蛋白( MUC) 5AC轉(zhuǎn)錄水平及培養(yǎng)上清液中MUC5AC 蛋白水平的改變,以Western blot 法檢測(cè)細(xì)胞表皮生長(zhǎng)因子受體( EGFR) 的蛋白表達(dá)。結(jié)果 細(xì)胞暴露于不同濃度的香煙抽提物中, ROS的量呈濃度遞增; ROS清除劑DMTU 顯著降低香煙所致的Src 磷酸化; Src 特異性抑制劑PP2 處理組中的JNK 磷酸化水平與對(duì)照組比較有明顯下降, MUC5AC 的表達(dá)水平也明顯降低; JNK特異性抑制劑SP600125 組中MUC5AC 的蛋白表達(dá)和基因轉(zhuǎn)錄水平較對(duì)照組均明顯降低。結(jié)論 ROS-Src-JNK信號(hào)通路可能參與A549 上皮細(xì)胞中MUC5AC 的表達(dá)調(diào)控。
目的 探討自由基清除劑依達(dá)拉奉( ED) 對(duì)膿毒癥致ALI 的保護(hù)作用。方法 24 只雄性Wistar 大鼠隨機(jī)分成3 組: 對(duì)照組( NS組) 、模型組( LPS 組) 及依達(dá)拉奉治療組( ED 組) 。LPS 組和ED 組采用尾靜脈注射LPS( 10 mg/ kg) 建立ALI 模型, ED 組隨后立即尾靜脈注射依達(dá)拉奉( 3 mg/kg) 。LPS 注射6 h后留取肺標(biāo)本, 分別測(cè)定肺組織濕/干重比值( W/D) 和肺組織勻漿中髓過(guò)氧化物酶( MPO) 、丙二醛( MDA) 和超氧化物歧化酶( SOD) 含量, 觀察肺組織病理改變及肺組織核因子κB( NF-κB) 表達(dá)情況。結(jié)果 LPS 組肺組織MPO、MDA 含量、W/D、肺損傷評(píng)分及肺組織NF-κB 表達(dá)均高于NS組( P 均lt;0. 01) , 肺組織SOD 含量低于NS 組( P lt;0. 01) 。ED 組肺組織MPO、MDA 含量、W/D、肺損傷評(píng)分及肺組織NF-κB 表達(dá)均低于LPS組( P 均lt;0. 01) , 仍高于NS 組( P 均lt;0. 01) ;ED 組肺組織SOD 含量高于LPS 組( P lt;0. 01) , 仍低于NS 組( P lt;0. 01) 。結(jié)論 依達(dá)拉奉可以減輕LPS 誘導(dǎo)的大鼠ALI, 其機(jī)制可能與清除ROS, 降低了NF-кB 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的活化, 進(jìn)而減輕炎癥級(jí)聯(lián)放大效應(yīng)有關(guān)。
目的? 糖皮質(zhì)激素的應(yīng)用是引起非創(chuàng)傷性股骨頭缺血性壞死的主要原因之一。通過(guò)研究經(jīng)糖皮質(zhì)激素處理后的骨髓微血管內(nèi)皮細(xì)胞活性氧（reactive?oxygen?species， ROS）的代謝變化，進(jìn)一步探討激素性股骨頭缺血性壞死的發(fā)病機(jī)制。? 方法? 取行人工全髖關(guān)節(jié)置換術(shù)患者自愿捐獻(xiàn)的股骨頭內(nèi)松質(zhì)骨，利用酶消化法分離培養(yǎng)骨髓微血管內(nèi)皮細(xì)胞，倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)。取第 3 代細(xì)胞，分別與不同濃度（0、 0.03、 0.10、 0.30、 1.00?mg/mL）氫化可的松培養(yǎng)后，采用 MTT 法測(cè)定細(xì)胞增殖抑制率；流式細(xì)胞儀觀測(cè)細(xì)胞凋亡率；采用熒光探針檢測(cè)細(xì)胞中 ROS 含量變化，以及與 ROS 代謝相關(guān)的黃嘌呤氧化酶（xanthine?oxidase，XOD）含量變化。? 結(jié)果? 原代培養(yǎng) 2 ～ 3?d 后，鏡下見(jiàn)單個(gè)細(xì)胞為梭形，呈鋪路石樣排列； 1周后細(xì)胞趨于融合狀態(tài)。 0.03、 0.10、 0.30、 1.00?mg/mL組細(xì)胞增殖抑制率分別為20.22%?±?2.97%、22.94%?±?4.52%、 43.98%?±?3.35%、 78.29%?±?3.85%， 0.30、 1.00?mg/mL 組的細(xì)胞增殖抑制率明顯高于 0.03、 0.10?mg/?mL 組（P?lt;?0.05）。0、0.03、0.10、0.30、1.00?mg/mL?組細(xì)胞凋亡率分別為 0.10%?±?0.01%、 0.23%?±?0.02%、 1.83%?±?0.04%、 6.34%?±?0.11%、15.33%?±?0.53%，0.30、1.00?mg/mL 組細(xì)胞凋亡率明顯高于 0?mg/mL 組（P?lt;?0.05）。0、0.30、1.00?mg/?mL 組 ROS含量分別為 57.35?±?7.11、120.47?±?15.68、166.15?±?11.57，XOD 含量分別為 0.017?9?±?0.000?9、0.028?3?±?0.001?7、0.067?7?±?0.004?1；以上兩指標(biāo) 3 組間兩兩比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P?lt;?0.05）。? 結(jié)論? 糖皮質(zhì)激素通過(guò)使血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi) ROS生成增加，引起氧化應(yīng)激反應(yīng)，進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞功能受損。
目的 觀察黃芪三七合劑（Aamp;R）對(duì)腎缺血再灌注損傷（IRI）大鼠血液活性氧（ROS）變化的影響，探討其抗IRI損傷的機(jī)制。 方法 雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠30只，隨機(jī)分為正常組（n=5）、假手術(shù)組（SG）（n=5）和IRI 24 h組（n=10），Aamp;R組（n=10）。造模：采用微血管夾夾閉雙側(cè)腎蒂，22 min后松開(kāi)動(dòng)脈夾，用5/0尼龍縫合線縫合腹部。再灌注24 h后將小鼠行麻醉處死。Aamp;R組給予Aamp;R（3 mL/d），假手術(shù)組及IRI 24 h組給予同等體積的生理鹽水。采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)各組大鼠的腎功能，蘇木精-伊紅染色了解腎臟病理?yè)p害，流式細(xì)胞儀檢測(cè)紅細(xì)胞ROS。 結(jié)果 IRI 24 h組和Aamp;R組腎小管出現(xiàn)不同程度的管腔擴(kuò)張、變性與壞死，間質(zhì)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、充血水腫等變化。IRI后24 h時(shí)，IRI 24 h組、Aamp;R組血清尿素氮（BUN）和肌酐（Cr）均高于假手術(shù)組、正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；Aamp;R組ROS熒光強(qiáng)度陽(yáng)性率顯著低于IRI 24 h組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。Aamp;R組腎小管損傷評(píng)分明顯低IRI 24 h組（P＜0.05）。相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，紅細(xì)胞ROS熒光強(qiáng)度陽(yáng)性率與腎小管損傷評(píng)分、肌酐、尿素氮水平成正相關(guān)（r=0.917，P＜0.01；r=0.897，P＜0.01；r=0.896，P＜0.01）。 結(jié)論 Aamp;R對(duì)腎臟缺血再灌注損傷具有明顯的保護(hù)作用，其機(jī)制可能為抑制血液中ROS的活性，從而抑制氧化應(yīng)激對(duì)腎臟的損傷。
活性氧族是一類(lèi)氧衍生的代謝物，被廣泛地認(rèn)為是多種生理過(guò)程以及病理狀態(tài)下關(guān)鍵的調(diào)節(jié)劑，在血管系統(tǒng)中主要由還原型輔酶Ⅱ氧化酶生成。慢性創(chuàng)口的愈合涉及2種不同形式的血管新生：血管發(fā)生（骨髓來(lái)源分化而成的循環(huán)內(nèi)皮祖細(xì)胞形成）和血管生成（已存在血管局部?jī)?nèi)皮細(xì)胞的芽生而形成）?；钚匝踝逋ㄟ^(guò)對(duì)血管新生過(guò)程中所涉及的內(nèi)皮祖細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)，影響創(chuàng)口愈合。
肺癌死亡率居世界腫瘤首位, 5年生存率不足15%, 順鉑耐藥是死亡率居高不下的重要原因, 本文將探討光敏劑MPPa介導(dǎo)的光動(dòng)力療法誘導(dǎo)人非小細(xì)胞肺癌順鉑耐藥株A549/DDP發(fā)生凋亡的現(xiàn)象及其機(jī)制。課題組分別給予不同濃度光敏劑MPPa(0、1、2、4、8、16 μmol/L)、不同能量光照(0、0.6、1.2、2.4、3.6、4.8 J/cm2)處理細(xì)胞, CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞活性。將細(xì)胞分為對(duì)照組、MPPa組(2 μmol/L MPPa)、光照組(2.4 J/cm2光能量密度)和MPPa介導(dǎo)光動(dòng)力組(PDT組)(2 μmol/L MPPa、2.4 J/cm2光能量密度)。應(yīng)用Anne-V/PI雙染流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡; DCFH-DA染色觀察細(xì)胞內(nèi)活性氧產(chǎn)生; 蛋白質(zhì)印跡法(Western blot)檢測(cè)B淋巴細(xì)胞瘤-2(Bcl-2)蛋白和Bcl-2相關(guān)X蛋白(Bax)的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示, 單純光照及MPPa對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)無(wú)抑制作用; MPPa介導(dǎo)光動(dòng)力卻對(duì)人肺癌耐順鉑細(xì)胞A549/DDP有顯著殺傷作用, 其殺傷作用呈明顯的劑量效應(yīng)關(guān)系(P＜0.05);PDT組發(fā)生凋亡率均高于各對(duì)照組(P＜0.05);DCFH-DA染色發(fā)現(xiàn)PDT組細(xì)胞內(nèi)活性氧明顯高于各對(duì)照組; Western blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)PDT組Bax蛋白表達(dá)升高, Bcl-2蛋白表達(dá)降低。實(shí)驗(yàn)證實(shí)MPPa介導(dǎo)的光動(dòng)力療法可抑制肺癌順鉑耐藥細(xì)胞A549/DDP活性, 并誘導(dǎo)其凋亡。
目的總結(jié)活性氧在肝臟缺血再灌注損傷中的發(fā)病機(jī)理及活性氧防治的最新研究進(jìn)展。 方法通過(guò)對(duì)CNKI、PubMed等數(shù)據(jù)庫(kù)文獻(xiàn)進(jìn)行檢索，就活性氧在肝臟缺血再灌注損傷中的產(chǎn)生、損傷機(jī)理以及對(duì)近年來(lái)在活性氧防治方面的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述。 結(jié)果在肝臟缺血再灌注損傷中，多形核白細(xì)胞、Kupffer細(xì)胞、線粒體以及肝組織中的酶產(chǎn)生大量的活性氧。活性氧主要通過(guò)破壞細(xì)胞膜上寡糖鏈中的糖分子、體內(nèi)的不飽和脂肪酸、蛋白質(zhì)分子、遺傳物質(zhì)、線粒體等導(dǎo)致細(xì)胞損傷甚至死亡。目前主要的防治方法為利用酶、維生素、中草藥等清除活性氧，減輕肝臟缺血再灌注損傷。 結(jié)論目前關(guān)于活性氧在肝臟缺血再灌注損傷中的研究取得了重要進(jìn)展，針對(duì)活性氧對(duì)肝臟造成的損傷也提出了多種可行的防治方法，但要應(yīng)用于臨床還有待進(jìn)一步深入研究。
目的觀察瘦素對(duì)胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)下人視網(wǎng)膜色素上皮(RPE)細(xì)胞氧化損傷的影響。 方法體外培養(yǎng)的人RPE細(xì)胞隨機(jī)分為正常對(duì)照組和胰島素抵抗組。分別加入0、10、100 ng/ml瘦素干預(yù)24、48、72 h。2', 7'-二氯熒光素二乙酸酯(DCFH-DA)法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)的產(chǎn)生情況; 免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)8-羥基-2'-脫氧鳥(niǎo)嘌呤(8-OHdG)的表達(dá)量; 蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測(cè)細(xì)胞漿中8-羥基鳥(niǎo)嘌呤DNA糖苷酶1(hOGGl)的表達(dá)量。 結(jié)果干預(yù)后24、48、72 h, 正常對(duì)照組、胰島素抵抗組RPE細(xì)胞ROS (正常對(duì)照組:F=37.136、37.178、49.634;胰島素抵抗組:F=9.822、28.881、71.150)、8-OHdG表達(dá)量(正常對(duì)照組:F=88.643、390.920、1039.276;胰島素抵抗組:F=273.311、299.155、82.237)均隨瘦素濃度增加而增加, hOGGl的表達(dá)量(正常對(duì)照組:F=470.062、1073.113、295.456;胰島素抵抗組:F=240.032、592.389、527.760)隨瘦素濃度的增加而遞增, 差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。正常對(duì)照組、胰島素抵抗組在相同濃度瘦素干預(yù)下, 隨干預(yù)時(shí)間延長(zhǎng), 胰島素抵抗組RPE細(xì)胞8-OHdG表達(dá)量呈現(xiàn)高于正常對(duì)照組的趨勢(shì)。干預(yù)后24 h, 胰島素抵抗組RPE細(xì)胞hOGGl表達(dá)量與正常對(duì)照組比較, 差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=23.392, P＞0.05);干預(yù)后72 h, 胰島素抵抗組PRE細(xì)胞hOGGl表達(dá)量低于正常對(duì)照組, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=129.394, P＜0.05)。在相同濃度瘦素干預(yù)下, 隨干預(yù)時(shí)間延長(zhǎng), RPE細(xì)胞hOGG1表達(dá)量呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)。干預(yù)后48 h, 正常對(duì)照組(F=83.673、268.000、373.492)、胰島素抵抗組(F=49.021、304.293、294.293) RPE細(xì)胞hOGGl表達(dá)量均高于干預(yù)后24、72 h RPE細(xì)胞hOGGl表達(dá)量, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。 結(jié)論正常狀態(tài)及胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)下瘦素能引起人RPE細(xì)胞氧化損傷, 隨著瘦素濃度的增加、作用時(shí)間的延長(zhǎng)氧化損傷的程度呈加重趨勢(shì); 氧化損傷的修復(fù)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)呈先強(qiáng)后弱的趨勢(shì), 隨著瘦素濃度的增加而呈增強(qiáng)的趨勢(shì)。
目的 探討高糖對(duì)肺腺癌 A549 細(xì)胞血紅素加氧酶 -1（HO-1）表達(dá)的影響及機(jī)制。 方法 應(yīng)用 Western blot 技術(shù)和逆轉(zhuǎn)錄 PCR 技術(shù)檢測(cè)高糖對(duì)人肺腺癌上皮細(xì)胞系 A549 細(xì)胞 HO-1 的表達(dá)。應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè) HO-1 酶活性和氧化應(yīng)激產(chǎn)物。 結(jié)果 用 25 mmol/L 高糖處理肺 A549 細(xì)胞 0、24、48、72 h，以及用 5、10、25、40 mmol/L 葡萄糖處理 A549 細(xì)胞 48 h，在蛋白水平和 RNA 水平，高糖誘導(dǎo)肺 A549 細(xì)胞 HO-1 表達(dá)呈濃度和時(shí)間依賴(lài)性。高糖誘導(dǎo) A549 細(xì)胞活性氧（ROS）和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1（TGF-β1）產(chǎn)生增加，并介導(dǎo) HO-1 表達(dá)增加。伴隨 HO-1 表達(dá)增加，HO-1 酶活性也相應(yīng)增加。抗氧化劑 N-乙酰半胱氨酸（NAC）和 PI3K/Akt 抑制劑可抑制高糖誘導(dǎo)的肺上皮細(xì)胞 HO-1 表達(dá)。 結(jié)論 高糖促進(jìn)肺上皮細(xì)胞 ROS 和 TGF-β1 產(chǎn)生，介導(dǎo) HO-1 表達(dá)增加，并伴隨 HO-1 酶活性增加。
癌細(xì)胞快速增殖并轉(zhuǎn)移，會(huì)消耗大量能量和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，因而發(fā)展靶向于癌細(xì)胞獨(dú)特能量代謝方式的治療手段有望實(shí)現(xiàn)癌癥的有效治愈。近年來(lái)多篇文獻(xiàn)報(bào)道了細(xì)胞膜上特化小窩結(jié)構(gòu)的功能蛋白小窩蛋白-1（Cav-1）對(duì)癌細(xì)胞能量代謝具有關(guān)鍵調(diào)節(jié)作用，并指出腫瘤基質(zhì)細(xì)胞中的 Cav-1 低表達(dá)可誘導(dǎo)癌細(xì)胞惡性表型。本文綜述了近期關(guān)于 Cav-1 與線粒體功能、細(xì)胞能量代謝之間相互作用的研究進(jìn)展，并指出 Cav-1 與線粒體之間的相互作用可能是癌癥能量代謝轉(zhuǎn)換所引起的惡性表型的基礎(chǔ)。