目的 探討周期性力學刺激對體外培養(yǎng)的成肌細胞自身抗原表達的影響。 方法 取C2C12細胞根據(jù)處理方法不同分為實驗組及對照組，其中實驗組分為4個亞組，即2、4、6 d周期性拉伸組（2、4、6 d拉伸組）及1 d拉伸組。2、4、6 d拉伸組：細胞置于Flexercell 5000柔性基底加載系統(tǒng)，以0.25 Hz拉伸頻率、10%拉伸幅度進行每天2 h應力加載，連續(xù)加載2、4、6 d；1 d拉伸組：細胞置于Flexercell 5000柔性基底加載系統(tǒng)，以1 Hz拉伸頻率、15%拉伸幅度拉伸1 h，23 h后收集細胞；對照組：細胞常規(guī)培養(yǎng)1、2、4、6 d。培養(yǎng)期間于倒置相差顯微鏡下觀察細胞生長情況。采用流式細胞儀檢測細胞增殖情況，Western blot檢測自身抗原DNA依賴蛋白激酶催化亞基（Ku/the catalytic subunit of DNA-dependent protein kinase，DNA-PKcs）、Mi-2（reconfigurable components deacetylase complexes of NuRD）、U1-70（A part of ATP-dependent DNA helicaseⅡ）、組氨酰-tRNA合成酶（histidyl tRNA synthetase，HRS）表達情況。 結果 經培養(yǎng)后，1 d拉伸組可見脫落細胞，對照組1 d時無細胞脫落；2 d拉伸組細胞增殖較對照組2 d時明顯；4 d拉伸組細胞出現(xiàn)分化，6 d拉伸組細胞部分融合，與對照組4、6 d時情況一致。1 d拉伸組細胞經單次拉伸后出現(xiàn)凋亡，相對DNA增殖指數(shù)（relative DNA proliferation index，DPI）與對照組1 d時比較，差異無統(tǒng)計學意義（t=0.346，P=0.747）。經周期性拉伸后，2、4 d拉伸組DPI較對照組2、4 d時顯著提高（P lt; 0.05），6 d拉伸組與對照組6 d時比較差異無統(tǒng)計學意義（t=1.191，P=0.303）。2 d拉伸組DNA-PKcs、Mi-2、HRS和U1-70蛋白相對表達量均較對照組2 d時明顯降低（P lt; 0.05）； 4 d拉伸組與對照組4 d時比較差異均無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。4 d拉伸組各抗原蛋白相對表達量均較2 d拉伸組顯著增加（P lt; 0.05），而對照組4 d 時均較2 d時顯著降低（P lt; 0.05）。 結論 短期力學刺激可以抑制成肌細胞自身抗原表達，但隨時間延長，細胞分化融合以及對力學刺激的適應使其對自身抗原表達抑制作用減弱。
目的 探討不同頻率的周期性應力加載對體外培養(yǎng)多層肌管極性與分化的影響，篩選優(yōu)化的肌組織體外應力加載培養(yǎng)條件。 方法 體外培養(yǎng)C2C12 成肌細胞于Sylgard 184 鑄型凹槽誘導分化形成多層肌管組織，采用自制體外細胞拉伸 儀，對培養(yǎng)并分化的肌管進行間歇性應力加載：加載幅度10%，加載頻率分別為0（A 組）、0.25（B 組）、0.50（C 組）、1.00 Hz（D 組），加載時間3 次/d，每次1 h。連續(xù)加載5、7、10 d 時，觀察各組肌管形態(tài)； RT-PCR 和實時熒光定量PCR（real-time fl uorescent quantitative PCR，QRT-PCR）分析檢測成肌相關基因成肌分化抗原（myogenic differentiation antigen，MyoD）、肌細胞生成素（Myogenin）、結蛋白（Desmin）、肌球重鏈蛋白（myosin heavy chain，MyHC） mRNA 的表達差異。 結果 倒置相差顯微鏡觀察示，應力加載促進各組肌管的極性融合及數(shù)量增加，其中B 組加載培養(yǎng)7 d 時，多層肌管排列緊密，極性顯著。加載條件能促進成肌相關基因mRNA 的表達：組內隨加載時間延長，各組MyoD 的mRNA 表達逐漸下降，7、10 d 與5 d 比較差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）；Myogenin、Desmin、MyHC 的mRNA 表達呈先升高后降低趨勢，以7 d 表達量最高；B 組除7 d 與10 d Desmin 的mRNA 表達比較差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）外，其余各時間點比較差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）。同時間點隨加載頻率增加，MyoD、Myogenin、Desmin、MyHC 的mRNA 表達呈先升高后降低趨勢，以B 組表達量最高；除5 d B、C 組Desmin 和10 d A、B 組MyHC 的mRNA 表達比較差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05） 外，其余各組與B組各相關基因mRNA表達比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）。 結論 低頻（0.25 Hz）、適時（7 d）的周期性應力加載有利于生長于Sylgard 184 彈性材料表面的多層肌管極性分化，但隨著應力加載時間延長，肌管的老化加速。