目的探討細(xì)胞骨架重塑對(duì)體外大鼠跟腱來源肌腱干細(xì)胞（tendon stem cells,TSCs）成脂分化的影響。 方法取3周齡雄性SD大鼠跟腱組織，采用酶消化法分離、培養(yǎng)TSCs，取第3代細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。將細(xì)胞分別以細(xì)胞松弛素D（cytochalasin D,CYD）終濃度為0、50、100、500、1 000 ng/mL的含15%FBS的DMEM培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞存活及形態(tài)變化，纖維肌動(dòng)蛋白（fibros actin,F-actin）染色觀察細(xì)胞骨架，Western blot檢測(cè)F-actin/球狀肌動(dòng)蛋白（globular actin,G-actin）比值，根據(jù)結(jié)果選擇CYD有效使用濃度進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。取TSCs分別采用成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)基（誘導(dǎo)組）、含CYD的成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)基（CYD+誘導(dǎo)組）以及普通培養(yǎng)基（普通組）、含CYD的普通培養(yǎng)基（CYD+普通組）培養(yǎng)3、7 d，收集各組細(xì)胞行實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)成脂分化相關(guān)特異標(biāo)志性基因表達(dá)，包括過氧化物酶體增殖物激活受體γ（peroxisome proliferator-activated receptor γ, PPARγ）、脂蛋白酯酶（1ipoprotein lipase,LPL）、脂肪酸結(jié)合蛋白(aP2)，Western blot檢測(cè)PPARγ、aP2蛋白表達(dá)。 結(jié)果CYD濃度為100 ng/mL時(shí)既能有效干擾TSCs細(xì)胞骨架F-actin的聚合，又不影響TSCs的存活，選擇該濃度進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。實(shí)時(shí)熒光定量PCR及Western blot檢測(cè)示，3、7 d時(shí)CYD+誘導(dǎo)組PPARγ、LPL和aP2基因及PPARγ、aP2蛋白表達(dá)均顯著高于誘導(dǎo)組，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。3、7 d時(shí)CYD+普通組PPARγ、LPL和aP2基因表達(dá)也顯著高于普通組，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。 結(jié)論細(xì)胞骨架重塑是TSCs成脂分化的一個(gè)先決條件，抑制F-actin聚合可促進(jìn)TSCs的成脂分化，對(duì)肌腱病的發(fā)病機(jī)制研究具有重要意義。
目的 種子細(xì)胞是組織工程研究熱點(diǎn)，研究具有高成脂分化能力、可應(yīng)用于脂肪組織工程的種子細(xì)胞，以提高組織工程脂肪的構(gòu)建效率。 方法 取自愿捐贈(zèng)的吸脂術(shù)脂肪組織采用膠原酶消化后，提取成熟脂肪細(xì)胞（mature adipocytes，MA）及脂肪來源干細(xì)胞（adipose-derived stromal cells，ADSCs）；天花板貼壁培養(yǎng)法誘導(dǎo)MA 去分化，獲得去分化脂肪細(xì)胞（dedifferentiated adipocytes，DA）。取第4 代DA 和ADSCs 行成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)，采用倒置相差顯微鏡觀察、油紅O 染色分光光度計(jì)法及細(xì)胞計(jì)數(shù)法比較DA、ADSCs 成脂分化能力。 結(jié)果 MA 在體外培養(yǎng)環(huán)境下能去分化為成纖維細(xì)胞狀DA。成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)14 d 內(nèi)，倒置相差顯微鏡下觀察顯示DA 脂滴聚集能力顯著大于ADSCs。油紅O 染色分光光度計(jì)法顯示DA 在誘導(dǎo)培養(yǎng)4 d 后出現(xiàn)顯著性脂滴聚集，ADSCs 10 d 時(shí)才出現(xiàn)顯著性脂滴聚集；誘導(dǎo)12 d 后DA 的吸光度值大于ADSCs，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。油紅O 染色細(xì)胞計(jì)數(shù)法顯示，DA 的成脂分化率為65% ± 6%，ADSCs為35% ± 5%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。 結(jié)論 DA 成脂分化能力高于ADSCs，有望成為脂肪組織工程種子細(xì)胞。
目的 綜述Hedgehog 信號(hào)通路對(duì)MSCs 的增殖和多向分化的調(diào)控。 方法 查閱并綜合分析近年有關(guān)Hedgehog 信號(hào)通路對(duì)MSCs 生物學(xué)特性調(diào)控的文獻(xiàn)，并進(jìn)行綜述。 結(jié)果 Hedgehog 信號(hào)通路促進(jìn)MSCs 的增殖，并在其成骨、成軟骨分化中發(fā)揮重要作用，抑制其成脂分化。 結(jié)論 Hedgehog 信號(hào)通路對(duì)MSCs 增殖與多向分化調(diào)控的功能可作為組織或器官缺血、骨質(zhì)疏松、軟骨發(fā)育不全和肥胖癥等新的治療靶點(diǎn)。
體外分離培養(yǎng)豬滑膜源性MSCs（synovium-derived MSCs，SMSCs），探討其在體外多向分化潛能。 方法 2 月齡長楓雜交豬3 頭，雌雄不限，體重8 ～ 10 kg。取豬膝關(guān)節(jié)滑膜組織分離SMSCs 并行原代及傳代培養(yǎng)，待第3 代SMSCs 長滿培養(yǎng)皿后，吸去基礎(chǔ)培養(yǎng)液，分別加入特定培養(yǎng)液進(jìn)行成軟骨、成骨、成脂誘導(dǎo)分化，作為實(shí)驗(yàn)組；以基礎(chǔ)培養(yǎng)液培養(yǎng)作為對(duì)照組。成軟骨誘導(dǎo)21 d 后行甲苯胺藍(lán)染色、免疫組織化學(xué)染色和實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 檢測(cè)；成骨誘導(dǎo)10 d 后行ALP 染色檢測(cè)，21 d 后行茜素紅染色檢測(cè)；成脂誘導(dǎo)21 d 后行油紅O 染色檢測(cè)。 結(jié)果 SMSCs 培養(yǎng)24 h后細(xì)胞形態(tài)細(xì)長或呈多角形；48 h 后細(xì)胞數(shù)量增多；72 h 后可見大量紡錘形細(xì)胞，其間散在分布少許小圓形細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)組成軟骨誘導(dǎo)21 d 后甲苯胺藍(lán)染色呈陽性，細(xì)胞外有蛋白多糖（Aggrecan）形成；免疫組織化學(xué)染色示特異軟骨基質(zhì)Col Ⅱ表達(dá)；實(shí)時(shí)熒光定量PCR 檢測(cè)示Col Ⅱ A1、Aggrecan、SOX9 mRNA 表達(dá)量與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。成骨誘導(dǎo)10 d 后ALP 染色陽性，21d 后茜素紅染色陽性，有鈣結(jié)節(jié)形成。成脂誘導(dǎo)21 d 后油紅O 染色示細(xì)胞內(nèi)有脂滴形成。對(duì)照組除ALP 染色觀察呈弱陽性外，余染色均呈陰性。 結(jié)論 豬膝關(guān)節(jié)滑膜組織可分離獲取SMSCs，其在體外具有向成軟骨、成骨、成脂多向分化潛能，有望成為組織工程種子細(xì)胞來源。
目的體外實(shí)驗(yàn)研究腺病毒介導(dǎo)Wnt10b基因表達(dá)與抑制對(duì)人BMSCs（human BMSCs，hBMSCs）成骨成脂分化的調(diào)控。 方法取健康成人髂骨骨髓分離培養(yǎng)hBMSCs，取第4代細(xì)胞并分為4組：A、B、C組分別加入Wnt10b基因表達(dá)腺病毒載體、Wnt10b基因沉默（Wnt10b-shRNA）腺病毒載體和空病毒轉(zhuǎn)染細(xì)胞，D組細(xì)胞不進(jìn)行轉(zhuǎn)染作為空白對(duì)照組。各組進(jìn)行成骨、成脂和無誘導(dǎo)培養(yǎng)，通過ALP染色、茜素紅染色和油紅O染色檢測(cè)Wnt10b對(duì)各組成骨成脂分化的影響，通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)成骨和成脂相關(guān)基因表達(dá)，Western blot檢測(cè)成骨和成脂相關(guān)蛋白表達(dá)，了解Wnt10b對(duì)hBMSCs成骨成脂轉(zhuǎn)錄和蛋白水平的影響。 結(jié)果成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)后ALP染色4組均呈陽性，A組呈強(qiáng)陽性，B組染色最弱；茜素紅染色A組出現(xiàn)大量片狀融合褐色礦化結(jié)節(jié)，B組見少許點(diǎn)狀褐色礦化結(jié)節(jié)，C、D組出現(xiàn)大量點(diǎn)狀褐色礦化結(jié)節(jié)。成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)后油紅O染色B、C、D組呈強(qiáng)陽性表現(xiàn)，其中B組最強(qiáng)；A組散在小團(tuán)狀著色區(qū)，數(shù)量較其他組明顯減少。熒光定量PCR和Western blot結(jié)果示：A組成骨轉(zhuǎn)錄因子和蛋白表達(dá)高于B、C、D組，B組低于C、D組；而成脂轉(zhuǎn)錄因子和蛋白表達(dá)與成骨轉(zhuǎn)錄因子及蛋白表達(dá)情況相反。 結(jié)論Wnt10b基因高表達(dá)促進(jìn)hBMSCs向成骨分化，低表達(dá)則促進(jìn)成脂分化。
目的通過觀察大鼠燒傷血清對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖活性和成脂分化能力的影響，探索燒傷對(duì)脂肪代謝的影響。 方法選擇成年雄性SD大鼠 48 只，隨機(jī)分為假傷組及燒傷1、4、7、14、21 d組，每組8只。各燒傷組大鼠背部制備30% 總體表面積的Ⅲ度燙傷模型，分別于對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)收集血清；假傷組不作處理，取血清作為正常對(duì)照。采用各組血清培養(yǎng)3T3-Ll前脂肪細(xì)胞，MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖活性，選擇增殖能力最低組血清作為后續(xù)刺激血清。取3T3-Ll前脂肪細(xì)胞分別采用假傷血清（A組）、燒傷血清（B組）、假傷血清成脂誘導(dǎo)（C組）、燒傷血清成脂誘導(dǎo)（D組）培養(yǎng)。倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況，誘導(dǎo)培養(yǎng)7 d后行油紅O染色，進(jìn)行脂肪細(xì)胞計(jì)數(shù)并測(cè)量吸光度（A）值，實(shí)時(shí)定量PCR及Western blot檢測(cè)過氧化物酶體增殖物激活受體γ（preoxisome proliferator-activated receptor γ，PPAR-γ）和脂蛋白脂酶（lipoprotein lipase，LPL）基因及蛋白表達(dá)。 結(jié)果MTT檢測(cè)示，與其余各組比較，燒傷4、7 d組細(xì)胞增殖能力顯著降低（P＜0.05），其中7 d組最低（P＜0.05），取燒傷7 d組大鼠血清作為后續(xù)刺激血清。倒置顯微鏡觀察示，培養(yǎng)后A、B組細(xì)胞形態(tài)無明顯變化；誘導(dǎo)培養(yǎng)后C、D組細(xì)胞呈脂肪細(xì)胞樣變，其中C組最顯著。油紅O染色示，C組細(xì)胞染色呈陽性，D組為弱陽性，余均為陰性；脂肪細(xì)胞計(jì)數(shù)以及A值比較示，A組高于B組、C組高于D組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。實(shí)時(shí)定量PCR及Western blot檢測(cè)示，B組PPAR-γ基因相對(duì)表達(dá)量明顯低于A組（P＜0.05），但LPL基因相對(duì)表達(dá)量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；PPAR-γ、LPL蛋白表達(dá)量比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。D組PPAR-γ、LPL基因及蛋白表達(dá)量均顯著優(yōu)于C組（P＜0.05）。 結(jié)論大鼠燒傷7 d 血清可致3T3-Ll前脂肪細(xì)胞成脂分化能力下降。
目的研究人BMSCs在成骨、成軟骨及成脂分化過程中的免疫原性及其對(duì)外周血單個(gè)核細(xì)胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC）增殖的抑制能力。 方法取健康志愿者骨髓分離培養(yǎng)BMSCs，分別進(jìn)行成骨、成軟骨和成脂誘導(dǎo)分化7、14、21 d。通過流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)未分化及分化過程中BMSCs的人類白細(xì)胞抗原（human leukocyte antigen，HLA）Ⅰ類及Ⅱ類分子表達(dá)水平的改變。分離培養(yǎng)健康志愿者PBMC，按10∶1比例將PBMC與BMSCs共培養(yǎng)5 d，通過流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)未分化及分化過程中BMSCs對(duì)PBMC增殖的抑制能力變化。 結(jié)果未分化BMSCs表達(dá)HLA-Ⅰ類分子，基本不表達(dá)HLA-Ⅱ類分子。成骨、成軟骨分化過程中各時(shí)間點(diǎn)HLA-Ⅰ、Ⅱ類分子表達(dá)無明顯改變（P＞0.05），且HLA-Ⅱ類分子表達(dá)水平均較低。成脂分化14、21 d HLA-Ⅰ類分子表達(dá)逐漸升高，與0、7 d比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；成脂分化7、14、21 d HLA-Ⅱ類分子表達(dá)也逐漸出現(xiàn)并升高，均顯著高于0 d（P＜0.05）。PBMC在無抗CD3、CD28微球刺激下無明顯增殖，加入抗CD3、CD28微球后顯著增殖，未分化BMSCs能顯著抑制PBMC的增殖。成骨、成軟骨分化過程中BMSCs抑制PBMC增殖能力無明顯改變（P＞0.05）。成脂分化7、14、21 d，BMSCs抑制PBMC增殖能力逐漸減弱，各時(shí)間點(diǎn)間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。 結(jié)論人BMSCs成骨、成軟骨分化過程中仍具有低免疫原性和較強(qiáng)的免疫抑制能力，可作為同種異體組織工程修復(fù)和生物治療的細(xì)胞；而成脂分化后免疫原性升高、免疫抑制能力降低，不適合作為同種異體組織工程修復(fù)和生物治療的細(xì)胞。
目的 總結(jié)影響脂肪干細(xì)胞成脂分化的供體因素和實(shí)驗(yàn)因素，為脂肪干細(xì)胞成脂分化研究提供參考。 方法 廣泛查閱近年來國內(nèi)外有關(guān)影響脂肪干細(xì)胞成脂分化的供體因素和實(shí)驗(yàn)因素相關(guān)研究報(bào)道，并進(jìn)行總結(jié)。 結(jié)果 影響脂肪干細(xì)胞成脂分化的供體因素和實(shí)驗(yàn)因素很多，其中有很多因素仍存在爭(zhēng)議，如供體年齡、健康狀態(tài)、脂肪組織取材部位等，有待進(jìn)一步研究。 結(jié)論 需進(jìn)一步深入研究影響脂肪干細(xì)胞成脂分化的供體因素和實(shí)驗(yàn)因素，明確存在爭(zhēng)議的事項(xiàng)，為脂肪干細(xì)胞在脂肪組織工程中的應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。
目的 探討抗氧化劑谷胱甘肽（glutathione，GSH）對(duì)激素誘導(dǎo)的人 BMSCs 成脂、成骨關(guān)鍵因子表達(dá)水平的影響。 方法 取 3 例股骨頸骨折患者股骨近端骨髓，采用密度梯度離心聯(lián)合貼壁法進(jìn)行 BMSCs 的分離、培養(yǎng)和純化。取第 3 代 BMSCs 分為 5 組：A 組，單純 BMSCs 組（1×105個(gè)/mL）；B 組，BMSCs（1×105個(gè)/mL）+10 μmol/L 地塞米松；C 組，BMSCs（1×105個(gè)/mL）+10 μmol/L 地塞米松+5 μmol/L GSH；D 組，BMSCs（1×105個(gè)/mL）+10 μmol/L 地塞米松+10 μmol/L GSH；E 組，BMSCs（1×105個(gè)/mL）+10 μmol/L 地塞米松+50 μmol/L GSH。培養(yǎng) 7 d，采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧水平，RT-PCR 檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）和過氧化氫酶（Catalase）mRNA 表達(dá)水平，實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 檢測(cè)成脂轉(zhuǎn)錄因子過氧化物酶體增殖激活受體 γ（peroxisome proliferator-activated receptors γ，PPAR-γ）、CCAAT 增強(qiáng)結(jié)合蛋白（CCAAT/enhancer-binding family of proteins，C/EBP）和成骨轉(zhuǎn)錄因子 Runx2、ALP 基因表達(dá)情況；培養(yǎng) 21 d，采用油紅 O 染色觀察細(xì)胞成脂分化情況，Western blot 檢測(cè)相關(guān)蛋白表達(dá)水平。 結(jié)果 B 組細(xì)胞內(nèi)活性氧水平顯著高于其余各組，C 組高于 A、D、E 組，D、E 組高于 A 組（P<0.05）；D、E 組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。B 組油紅 O 染色陽性細(xì)胞明顯多于其余各組，C、D、E、A 組依次減少，各組吸光度（A）值比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。RT-PCR 檢測(cè)示，B 組 SOD 和 Catalase mRNA 相對(duì)表達(dá)量較其余各組顯著降低，C 組低于 A、D、E 組（P<0.05）；A、D、E 組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 檢測(cè)示，B 組 PPAR-γ、C/EBP mRNA 相對(duì)表達(dá)量顯著高于其余各組（P<0.05）；C 組高于 A、D、E 組，D、E 組高于 A 組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；D、E 組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。B 組 Runx2、ALP mRNA 相對(duì)表達(dá)量顯著低于其余各組，C 組低于 A、D、E 組，D、E 組低于 A 組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；D、E 組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。Western blot 檢測(cè)示，B 組 PPAR-γ、C/EBP 蛋白相對(duì)表達(dá)量較其余各組顯著提高，C、D、E、A 組呈逐漸下降趨勢(shì)，組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；B 組 Runx2、ALP 蛋白相對(duì)表達(dá)量較其余各組顯著下降，C、D、E、A 組呈逐漸上升趨勢(shì)，組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。 結(jié)論 GSH 可通過降低細(xì)胞內(nèi)活性氧水平抑制人 BMSCs 成脂分化，增強(qiáng)成骨分化；在一定范圍內(nèi)，GSH 濃度越高，效果越明顯。
目的探討石膽酸（lithocholic acid，LCA）對(duì)于BMSCs成骨-成脂分化平衡的影響。方法 取10周齡SPF級(jí)C57BL/6J雌性小鼠12只，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組（行雙側(cè)卵巢切除術(shù)）和對(duì)照組（僅移除卵巢周圍相同體積脂肪組織），每組6只。術(shù)后每周測(cè)量體質(zhì)量，4周取小鼠子宮稱重；取股骨標(biāo)本行micro-CT掃描和三維重建，分析骨量變化；取脛骨標(biāo)本行HE染色并計(jì)算骨髓腔區(qū)域中骨髓脂肪空泡數(shù)量和面積百分比；取血清樣本，采用ELISA法檢測(cè)骨轉(zhuǎn)換標(biāo)志物表達(dá)；取肝臟樣本行實(shí)時(shí)熒光定量PCR（real-time fluorescence quantitative PCR，RT-qPCR）檢測(cè)膽汁酸代謝關(guān)鍵酶相關(guān)基因cyp7a1、cyp7b1、cyp8b1及cyp27a1表達(dá)。采用離心法分離2只10周齡C57BL/6J雌性小鼠BMSCs，取第3代細(xì)胞分別給予0、1、10、100 μmol/L LCA干預(yù)并行細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒8法檢測(cè)細(xì)胞毒性，經(jīng)成骨及成脂誘導(dǎo)分化7 d后分別行ALP染色和油紅O染色，并行RT-qPCR檢測(cè)成骨相關(guān)基因ALP、Runt相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子2（Runt-related transcription factor 2，Runx2）、骨鈣素（osteocalcin，OCN）以及成脂細(xì)胞相關(guān)基因脂聯(lián)素（Adiponectin，Adipoq）、脂肪酸結(jié)合蛋白（fatty acid binding protein 4，F(xiàn)ABP4）、過氧化物酶體增殖物激活受體γ（peroxisome proliferator-activated receptor γ，PPARγ）表達(dá)。結(jié)果 與對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)組小鼠體質(zhì)量升高、子宮萎縮、骨量降低、骨髓脂肪擴(kuò)張、骨代謝呈高骨轉(zhuǎn)換狀態(tài)；RT-qPCR檢測(cè)示肝臟膽汁酸代謝關(guān)鍵酶相關(guān)基因cyp7a1、cyp8b1、cyp27a1表達(dá)降低（P<0.05），而cyp7b1表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。LCA干預(yù)濃度為1、10、100 μmol/L時(shí)，對(duì)BMSCs均無明顯毒性作用，且LCA以劑量依賴性抑制BMSCs成骨相關(guān)基因ALP、Runx2、OCN表達(dá)，ALP染色陽性區(qū)域減少；同時(shí)，LCA促進(jìn)成脂相關(guān)基因Adipoq、FABP4、PPARγ表達(dá)，油紅O染色陽性區(qū)域增加。結(jié)論 絕經(jīng)后小鼠骨質(zhì)疏松病理狀態(tài)下膽汁酸代謝發(fā)生改變，次級(jí)膽汁酸LCA以干擾BMSCs成骨-成脂分化平衡方式影響骨重塑。