目的 觀察膿毒癥患者外周血白細(xì)胞中微小RNA-150( miR-150) 的表達(dá)變化, 探討其與膿毒癥免疫細(xì)胞因子水平及嚴(yán)重程度的關(guān)系。方法 采用實時定量PCR( qRT-PCR) 檢測40 例膿毒癥患者、20 例全身性炎癥反應(yīng)綜合征( SIRS) 患者和20 例正常對照外周血白細(xì)胞中miR-150 表達(dá)量, 并評價miRNA 檢測的穩(wěn)定性和線性。酶聯(lián)免疫吸附法測定TNF-α和IL-10濃度, 序貫器官衰竭估計(SOFA) 評分系統(tǒng)評價膿毒癥患者的嚴(yán)重程度。對miR-150與白細(xì)胞總數(shù)、TNF-α、IL-10 和SOFA評分之間進(jìn)行相關(guān)分析。結(jié)果 外周血標(biāo)本在4 ℃保存5 d, 白細(xì)胞中miR-150 表達(dá)量無明顯變化; 最低檢出限為6. 97 pg/ μL RNA, 在6. 97～6. 97 ×104 pg/ μL RNA 之間有良好的線性關(guān)系( r = 0. 999) 。膿毒癥組miR-150 表達(dá)量較正常對照組顯著降低( P lt; 0. 01) , 白細(xì)胞總數(shù)、IL-10水平和IL-10/TNF-α比值顯著升高( Plt;0. 05) ; 而膿毒癥組與SIRS 組間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義( Pgt;0. 05) 。血清TNF-α水平在三組間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義( Pgt;0. 05) 。膿毒癥患者中, 死亡組miR-150 表達(dá)量較存活組顯著降低( Plt;0. 05) , 而IL-10 水平和IL-10 /TNF-α比值顯著升高( Plt;0. 01) , TNF-α水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義( Pgt;0. 05) 。膿毒癥患者miR-150 表達(dá)量與SOFA 評分、血清TNF-α和IL-10呈顯著負(fù)相關(guān)( r 值分別為-0. 619、-0. 457 和-0. 431, Plt;0.05) ; 與WBC無顯著相關(guān)性( Pgt;0.05) 。血清TNF-α、IL-10 和IL-10/TNF-α比值與SOFA 評分無顯著相關(guān)性( Pgt;0.05) 。結(jié)論 膿毒癥患者外周血miR-150表達(dá)量顯著降低, 其水平不但能反映機體炎癥反應(yīng)狀態(tài), 而且在一定程度上能作為判斷疾病嚴(yán)重程度及預(yù)后的指標(biāo)。
目的 通過離體缺血-再灌注心臟模型，觀察缺血預(yù)處理（IPC）、缺血后處理（IPO）和肢體遠(yuǎn)端預(yù)處理（RIPC）后心臟microRNA1 （miRNA-1）和microRNA21 （miRNA-21）的表達(dá)變化，以及它們所調(diào)控靶蛋白熱休克蛋白70 （HSP70）和程序性細(xì)胞死亡4 （PDCD4）表達(dá)變化，期望從miRNA調(diào)控水平揭示心臟的內(nèi)源性保護機制?！》椒ā∪prague-Dawley （SD）大鼠心臟，建立離體Langendorff心肌缺血-再灌注模型，隨機分為4組（每組12只），對照組、IPC組、IPO組和RIPC組。檢測各組血流動力學(xué)指標(biāo)，蛋白印跡法（Western blotting）檢測PDCD4、HSP70、B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2 （Bcl-2） 和Bcl-2相關(guān)X蛋白（Bax）含量，taqman探針法檢測miRNA-1和miRNA-21含量，末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的原位缺口標(biāo)記法（TUNEL） 檢測心肌細(xì)胞凋亡，2，3，5-氯化三苯基四氮唑（TTC） 法檢測心肌梗死面積。 結(jié)果 IPC組心肌的 miRNA-1和miRNA-21表達(dá)明顯高于對照組，但RIPC組和IPO組心肌的miRNA-1表達(dá)較對照組明顯降低 （P＜0.05）。IPC組、RIPC組和IPO組心肌中HSP70、PDCD4和Bax蛋白含量較對照組明顯減少（P＜0.05），Bcl-2蛋白含量各組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。IPC組、RIPC組和IPO組左室心肌梗死面積/左室總面積以及心肌細(xì)胞凋亡率明顯低于對照組（P＜0.05）?！〗Y(jié)論 miRNA-1和miRNA-21在缺血預(yù)處理、缺血后處理和遠(yuǎn)端預(yù)處理后，表達(dá)變化是不同的，同時各處理組中miRNA與其靶蛋白并不都是負(fù)性調(diào)節(jié)關(guān)系。
目的探討微小RNA-451（micro RNA-451，miRNA-451）靶向調(diào)節(jié)鈣結(jié)合蛋白39（calcium binding protein 39，CAB39）表達(dá)，促進(jìn)MSCs向成骨細(xì)胞分化的效應(yīng)。 方法選擇pMIR-report質(zhì)粒及pRL-TK質(zhì)粒，通過雙熒光素酶基因報告系統(tǒng)，鑒定CAB39是否為miRNA-451的靶基因。將pre-miRNA-451（A組）及anti-miRNA-451（C組）分別轉(zhuǎn)染到C3H10T1/2細(xì)胞中，同時設(shè)置相應(yīng)的pre-miRNA陰性對照組（B組）和anti-miRNA陰性對照組（D組）；成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)7、14 d，采用實時熒光定量PCR檢測成骨標(biāo)志物Runx2、ALP mRNA相對表達(dá)量；誘導(dǎo)培養(yǎng)14 d，采用Western blot檢測細(xì)胞中CAB39蛋白表達(dá)，茜素紅染色觀察細(xì)胞外鈣基質(zhì)沉積情況。 結(jié)果經(jīng)鑒定，CAB39是miRNA-451的靶基因。實時熒光定量PCR檢測示，成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)7、14 d，A組Runx2、ALP mRNA相對表達(dá)量顯著高于B組，C組顯著低于D組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）。成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)14 d，Western blot檢測示A組CAB39蛋白表達(dá)量為0.55 ± 0.05，較B組1.00 ± 0.07明顯降低；而C組為1.21 ± 0.05，較D組1.00 ± 0.04明顯增高；差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）。茜素紅染色示A組細(xì)胞外鈣基質(zhì)沉積較B組明顯增多，而C組細(xì)胞外鈣基質(zhì)沉積較D組明顯減少。 結(jié)論miRNA-451可通過抑制CAB39表達(dá)，促進(jìn)MSCs成骨分化。
目的 總結(jié)微小RNA（microRNA，miRNA）在成骨細(xì)胞分化成熟過程中的調(diào)控作用及作用機制，為相關(guān)的基礎(chǔ)和臨床研究提供參考。 方法 廣泛查閱近年miRNA 對成骨分化調(diào)節(jié)相關(guān)研究文獻(xiàn)，對成骨細(xì)胞分化成熟過程中的功能性miRNA 進(jìn)行分類和總結(jié)。 結(jié)果 miRNA 分子參與了成骨細(xì)胞分化成熟過程中的各個階段，通過調(diào)節(jié)BMP、TGF-β、Wnt/β-catenin 等一系列信號通路調(diào)控成骨細(xì)胞的分化成熟。在病理狀況下，尤其是一些成骨細(xì)胞分化紊亂引起的疾病中能觀察到相關(guān)miRNA 分子的異常表達(dá)。 結(jié)論 miRNA 在成骨細(xì)胞分化成熟過程中的生理病理作用將為骨代謝相關(guān)疾病的早期診斷和靶向治療提供新的思路和手段。
目的 明確萎縮性骨不連組織中表達(dá)上調(diào)的數(shù)種微小RNA（micro RNA，miRNA）與其相應(yīng)靶基因mRNA、蛋白在hBMSCs 成骨分化過程中的表達(dá)變化趨勢和生物學(xué)功能。 方法 取自體髂骨植骨手術(shù)患者的髂骨骨髓血，采用密度梯度離心法分離培養(yǎng)hBMSCs。取第4 代hBMSCs 以成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)液誘導(dǎo)成骨分化，分別提取0、12 h，1、2、4、7、14 d 時的細(xì)胞總RNA 和蛋白，進(jìn)行miRNA 的實時定量PCR（quantitative real-time PCR，qRT-PCR）、相應(yīng)靶基因mRNA 的qRT-PCR 和蛋白Western blot 檢測。 結(jié)果 誘導(dǎo)hBMSCs 成骨分化時，成骨性靶基因堿性磷酸酶（alkaline phosphatase liver/bone/kidney，ALPL）、PDGF-α 多肽（PDGF-α polypeptide，PDGF-A）和BMP-2 的mRNA 和蛋白表達(dá)在多數(shù)時間點同對照（0 h）相比增加（BMP-2 在12 h 和1 d 時下降），1 ～ 7 d 變化最為顯著。不同時間點的miRNA、靶基因mRNA 和蛋白表達(dá)水平存在差異，其中hsa-miRNA-149 和hsa-miRNA-654-5p miRNA 含量的變化趨勢與各自靶基因ALPL 和BMP-2 的mRNA 及蛋白表達(dá)水平總體上成負(fù)相關(guān)（P lt; 0.05），hsa-miRNA-221 與其靶基因PDGF-A 的變化趨勢無明顯負(fù)相關(guān)關(guān)系（P gt; 0.05）。 結(jié)論 誘導(dǎo)hBMSCs 成骨分化過程中，hsa-miRNA-149 和hsa-miRNA-654-5p 對其相應(yīng)靶基因ALPL 和BMP-2 的mRNA 及蛋白存在密切調(diào)控關(guān)系。
目的 對微小RNAs（microRNAs，miRNAs）在骨與軟骨組織中的調(diào)控作用和作用機制作一綜述。 方 法 廣泛查閱近年來有關(guān)miRNAs 在骨與軟骨組織的調(diào)控作用及作用機制的文獻(xiàn)，進(jìn)行總結(jié)與分析。 結(jié) 果 miRNAs 是近年來骨關(guān)節(jié)疾病研究的熱點，越來越多研究顯示其在骨與軟骨組織形成和代謝過程中，對于細(xì)胞分化、細(xì)胞基質(zhì)分泌等方面發(fā)揮重要的調(diào)控作用，但確切機制尚不清楚。 結(jié)論 通過對miRNAs 在骨與軟骨組織中的調(diào)控作用及作用機制的研究，可能為了解退行性骨關(guān)節(jié)疾病開辟新的領(lǐng)域。
目的?總結(jié)異位骨化（heterotopic ossification，HO）發(fā)病機制的研究進(jìn)展。?方法?查閱近年有關(guān)HO危險因素及發(fā)病機制的文獻(xiàn)，并綜合分析。?結(jié)果?HO發(fā)病機制尚未明確，但對HO相關(guān)的細(xì)胞外因子、信號通路、轉(zhuǎn)錄因子等有了更深入了解，如BMP、Smad信號通路、核心結(jié)合因子α1/成骨特異性轉(zhuǎn)錄因子2等可能參與了HO的形成，而一些相關(guān)的微小RNA也有可能參與HO形成。?結(jié)論?通過對HO發(fā)病機制進(jìn)一步研究，為有效防治HO奠定基礎(chǔ)。
目的 對微小RNAs（microRNAs，miRNAs）在成骨過程中的調(diào)控作用及作用機制的研究現(xiàn)狀、存在的爭議以及研究方向作一綜述。 方法 廣泛查閱近年來有關(guān)成骨過程中miRNAs 的調(diào)控作用及作用機制的文獻(xiàn)，進(jìn)行總結(jié)與分析。 結(jié)果 miRNAs 是近來成骨研究的熱點，越來越多資料顯示其在骨化過程中發(fā)揮重要作用，但確切機制尚未清楚。 結(jié)論 通過應(yīng)用miRNAs 技術(shù)促進(jìn)成骨細(xì)胞分化，具有巨大的應(yīng)用前景，同時將可能獲取成骨細(xì)胞分化中的miRNAs 調(diào)控機制，也有利于建立成骨效果比較的研究模型。
目的 探討異位骨化（HO）發(fā)病機制以及其研究策略。 方法 查閱近年有關(guān)HO危險因素及發(fā)病機制的文獻(xiàn)，結(jié)合相關(guān)領(lǐng)域的方法學(xué)及新技術(shù)和新觀點進(jìn)展綜合分析。結(jié)果 HO發(fā)病機制尚未完全明確，但其本質(zhì)是一種體內(nèi)互轉(zhuǎn)化現(xiàn)象。BMP-Smad、Wnt-beta-catenin和LIF -STAT3信號通路被認(rèn)為是胚胎干細(xì)胞保持自我更新和向特定細(xì)胞定向分化過程中的中樞調(diào)控因子。TGFβ/BMP-Smad信號通路是干細(xì)胞定向分化成肌腱（韌帶）細(xì)胞的前提，是必要條件，但不是充分條件。微小RNA（miRNA）和TGFβ/BMP-Smad信號通路可以聯(lián)合作用，組合成不同的密碼來裁定細(xì)胞的命運和表型。 結(jié)論 miRNAs和TGFβ/BMP-Smad信號通路可能是決定干細(xì)胞向肌腱細(xì)胞，或軟骨細(xì)胞，或肌腱和軟骨細(xì)胞混合成分哪一個方向分化的關(guān)鍵調(diào)控因素。通過對比分析干細(xì)胞在上述3種分化途徑中基因表達(dá)調(diào)控、蛋白結(jié)構(gòu)和功能的差異，可能幫助我們尋找到?jīng)Q定肌腱細(xì)胞與軟骨細(xì)胞互相轉(zhuǎn)化分化的關(guān)鍵miRNAs，肌腱細(xì)胞定向分化的關(guān)鍵調(diào)控基因，以及揭開精確調(diào)控細(xì)胞分化方向的關(guān)鍵機制和調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。
【摘要】 微小RNA（microRNA，miRNA）是近年來發(fā)現(xiàn)的一類長度為18~26個核苷酸的非編碼小分子RNA。它主要通過與靶標(biāo)基因3’-UTR的完全或不完全配對，降解靶標(biāo)基因mRNA或抑制其翻譯，從而參與調(diào)控生命活動，影響腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。目前研究發(fā)現(xiàn)，大量miRNA的表達(dá)變化與前列腺癌的發(fā)生發(fā)展相關(guān)，了解這些miRNA的表達(dá)規(guī)律和作用機制對深入探討前列腺癌的發(fā)病機制、研究新的診斷和治療手段意義重大。綜述主要介紹近年來miRNA與前列腺癌發(fā)生的關(guān)系及對其診治的研究進(jìn)展。