目的 組織工程骨的神經(jīng)化能有效促進(jìn)支架材料內(nèi)血管生成，修復(fù)骨缺損。研究降鈣素基因相關(guān)肽（calcitonin gene-related peptide，CGRP）對(duì)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVECs）增殖與遷移的作用，進(jìn)一步揭示組織工程骨的神經(jīng)化促血管生成機(jī)制。 方法 體外分離獲取HUVECs，并通過(guò)血管性血友病因子（von Willebrand factor，vWF）與CD31 抗原鑒定，取第1 代細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)分為6 組，分別以0（A 組）、1 × 10—12（B 組）、1 × 10—11（C 組）、1 × 10—10（D 組）、1 × 10—9（E 組）、1 × 10—8 mol/L（F 組）濃度CGRP 干預(yù)HUVECs。采用細(xì)胞免疫熒光觀察HUVECs 的CGRP1 受體（CGRP1 receptor，CGRP1R）表達(dá)情況，AlarmarBlue 法動(dòng)態(tài)檢測(cè)各組HUVECs 增殖率，Transwell 小室檢測(cè)各組HUVECs 的遷移能力，ELISA 法檢測(cè)HUVECs 分泌VEGF 的水平，Westernblot 法檢測(cè)其局部黏著斑激酶（focal adhesion kinase，F(xiàn)AK）的表達(dá)。 結(jié)果 分離的細(xì)胞通過(guò)形態(tài)學(xué)及vWF、CD31 免疫熒光鑒定為HUVECs，并可見(jiàn)CGRP1R 在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜表達(dá)。CGRP 呈時(shí)間- 濃度依賴(lài)性刺激HUVECs 增殖；B ～ F組各時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞增殖能力均高于A 組（P lt; 0.05），F(xiàn) 組各時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞增殖能力最高。B ～ F 組遷移細(xì)胞數(shù)均顯著高于A組（P lt; 0.05），最大增幅達(dá)3 倍以上。B ～ F 組VEGF 分泌量均顯著高于A 組（P lt; 0.05）；C、D 組促進(jìn)細(xì)胞分泌VEGF 的能力最強(qiáng)。Western blot 檢測(cè)示，與A組相比，B～F組CGRP刺激HUVECs 3、7、10 d 后，F(xiàn)AK表達(dá)明顯增加（P lt; 0.05）。 結(jié)論 CGRP 對(duì)HUVECs 的增殖和遷移有直接促進(jìn)作用，可能作用機(jī)制為CGRP 能促進(jìn)VEGF 分泌和增加FAK 的表達(dá)。
目的 觀察外源性降鈣素基因相關(guān)肽（calcitonin gene-related peptide，CGRP）在大鼠BMSCs 遷移中的作用及對(duì)VEGF、血管黏附分子1（vascular cell adhesion molecule 1，VCAM-1）表達(dá)的影響，探討CGRP 通過(guò)BMSCs促進(jìn)血管生成的作用機(jī)制。 方法 全骨髓法分離、培養(yǎng)SD 大鼠BMSCs，采用Western blot 法于傳代培養(yǎng)1、2、3 周時(shí)檢測(cè)BMSCs 中CGRP 受體（CGRP receptor，CGRPR）蛋白的表達(dá)。使用濃度為1 × 10-8 mol/L 的CGRP 作用于BMSCs作為實(shí)驗(yàn)組，單純BMSCs 作為對(duì)照組，在培養(yǎng)72 h 時(shí)采用細(xì)胞趨化實(shí)驗(yàn)檢測(cè)CGRP 對(duì)BMSCs 遷移的影響；在培養(yǎng)1、3、5、7 d 采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR 檢測(cè)CGRP 作用后VCAM-1 mRNA 的表達(dá)變化，采用免疫細(xì)胞化學(xué)染色、Western blot 法檢測(cè)CGRP 作用后VEGF 的表達(dá)變化。 結(jié)果 Western blot 檢測(cè)示BMSCs 穩(wěn)定表達(dá)CGRPR，2 周時(shí)表達(dá)最高。細(xì)胞趨化實(shí)驗(yàn)顯示，實(shí)驗(yàn)組CGRP 刺激后穿膜遷移細(xì)胞數(shù)（3.20 ± 1.77）個(gè)/HP，較對(duì)照組（1.11 ± 0.49）個(gè)/HP 明顯增多（t=4.230，P=0.001）。實(shí)時(shí)熒光定量PCR 檢測(cè)示，實(shí)驗(yàn)組VCAM-1 mRNA 表達(dá)隨時(shí)間延長(zhǎng)逐漸增加，7 d 時(shí)最高；實(shí)驗(yàn)組3、5、7 d的VCAM-1 mRNA 表達(dá)量與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。免疫細(xì)胞化學(xué)染色示，培養(yǎng)1、3 d 兩組均無(wú)陽(yáng)性染色；培養(yǎng)5、7 d 實(shí)驗(yàn)組VEGF 染色呈陽(yáng)性，對(duì)照組無(wú)陽(yáng)性染色。Western blot 檢測(cè)示，培養(yǎng)1、3 d 兩組均未檢測(cè)到VEGF蛋白表達(dá)；培養(yǎng)5、7 d 實(shí)驗(yàn)組VEGF 蛋白表達(dá)量均明顯高于對(duì)照組（P lt; 0.05）；實(shí)驗(yàn)組5 d 的VEGF 蛋白表達(dá)量明顯高于7 d（P lt; 0.05）。 結(jié)論 CGRP 能促進(jìn)BMSCs 遷移及VEGF 表達(dá)，這可能是CGRP 調(diào)節(jié)骨內(nèi)部血流變化而影響骨代謝的機(jī)制之一。