目的研究胰頭癌患者外周血中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞(Treg)比例及其在手術(shù)前、后的變化趨勢。方法采用流式細胞儀檢測胰頭癌患者及正常對照組外周血中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞的數(shù)量,同時監(jiān)測CD4+/CD8+比值,并進行手術(shù)前、后的比較。結(jié)果胰頭癌患者術(shù)前外周血中CD4+CD25+和CD4+CD25high Treg所占比例較正常對照組高(Plt;0.05),術(shù)后則出現(xiàn)不同程度下降,以術(shù)后第3天下降最明顯(Plt;0.01,Plt;0.05); 胰頭癌患者術(shù)后CA199水平低于術(shù)前,以術(shù)后第14天下降明顯(Plt;0.05)。 CD4+CD25highTreg與CA199的變化趨勢大致相同。 胰頭癌患者術(shù)前CD4+/CD8+比值比正常對照組低(Plt;0.05),手術(shù)后進一步降低,于手術(shù)后第7天達最低(Plt;0.05)。結(jié)論胰十二指腸切除術(shù)可能有助于機體抗腫瘤免疫的恢復(fù),胰頭癌患者圍手術(shù)期可作為免疫干預(yù)的重要窗口期,CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞可作為免疫干預(yù)的靶點。
目的 探討細胞毒性T淋巴細胞相關(guān)抗原4(CTLA4Ig)融合蛋白對同種異體肝臟移植免疫耐受的誘導(dǎo)作用及機理。方法 利用大型哺乳動物獼猴作為研究對象,建立同種異體原位肝臟移植模型。同種異體原位肝臟移植對照組及CTLA4-Ig組各5只。觀察術(shù)后生存時間,檢測肝功能、IL-2、IL-10、排斥反應(yīng)的病理學分級和術(shù)后肝臟細胞凋亡指數(shù)。結(jié)果 對照組平均存活時間為6.57 d,CTLA4-Ig組平均存活時間為14.92 d (Plt;0.05)。肝功能變化: 對照組術(shù)后ALT明顯升高,Alb則明顯降低; CTLA4-Ig組ALT及Alb均維持于正常穩(wěn)定水平。細胞因子變化: 術(shù)后3 d起,對照組循環(huán)血中IL-2表達水平相對較高,而CTLA4-Ig組IL-10的表達水平較對照組高。移植物病理排斥反應(yīng)分級: 在移植術(shù)后CTLA4-Ig組排斥反應(yīng)程度明顯比對照組輕。對照組術(shù)后3 d起肝臟細胞凋亡指數(shù)較CTLA4-Ig組明顯升高。結(jié)論 CTLA4-Ig融合蛋白可誘導(dǎo)移植后免疫耐受,延長受體生存時間。細胞因子IL-2或者IL-10可作為監(jiān)測移植排斥反應(yīng)或者免疫耐受的實驗室指標之一。
目的 總結(jié)胰腺移植免疫耐受的研究進展。方法 分析近年來有關(guān)胰腺移植免疫耐受研究進展的文獻報道。 結(jié)果 外周性耐受及中樞性耐受是誘導(dǎo)免疫耐受的主要方法,其中通過供體特異性骨髓細胞輸注誘導(dǎo)嵌合體形成是目前的研究熱點。結(jié)論 供體特異性骨髓細胞輸注聯(lián)合一種或多種外周性耐受方法有望誘導(dǎo)胰腺移植免疫耐受,但需進行深入研究。
【摘要】目的 建立大鼠原位肝移植(ROLT)急性排斥反應(yīng)模型,探討細胞毒淋巴細胞抗原4免疫球蛋白(CTLA4Ig)抗排斥反應(yīng)和誘導(dǎo)免疫耐受的作用。 方法 采用“二袖套管”法建立Wistar→SD大鼠配對組合的肝移植后排斥反應(yīng)模型,并于術(shù)后第2天腹腔內(nèi)一次性注射CTLA4Ig(75 μg/只大鼠),與未給藥的相同組合的排斥反應(yīng)模型鼠對照研究,觀察移植術(shù)后7 d 2組動物的一般情況、肝功能變化、移植肝病理改變及血清TNFα水平的變化,同時觀察CTLA4Ig組動物術(shù)后4個月時的上述情況,以了解CTLA4Ig抗排斥及誘導(dǎo)免疫耐受的作用。 結(jié)果 ①對照組動物于肝移植術(shù)后6~14 d內(nèi)相繼死亡; 移植肝出現(xiàn)明顯的排斥反應(yīng)的病理改變征象。 ②CTLA4Ig組動物于術(shù)后7 d及4個月均未見明顯的排斥反應(yīng)表現(xiàn),移植肝無明顯的排斥反應(yīng)的病理改變征象,血清TNFα、ALT、AST、TBIL及DBIL水平均明顯低于對照組(P<0.05),TP及Alb水平則明顯高于對照組(P<0.05)。 結(jié)論 CTLA4Ig有抗排斥反應(yīng)及誘導(dǎo)免疫耐受功能的作用; 血清TNFα水平作為觀察ROLT后排斥反應(yīng)的指標,可能有一定的參考價值。
目的探討T細胞疫苗誘導(dǎo)特異性免疫耐受與外周血T細胞凋亡的關(guān)系。方法制備針對Wistar大鼠的SD大鼠T細胞疫苗,然后用該疫苗免疫健康SD大鼠,每周1次, 連續(xù)3周,作為實驗組(n=6)。對照組(n=6)用RPMI 1640培養(yǎng)液替代T細胞疫苗。以被免疫的SD大鼠的脾細胞作為反應(yīng)細胞,以Wistar大鼠的脾細胞作為刺激細胞(經(jīng)絲裂霉素處理),于接種前和每次接種后第5天進行單向混合淋巴細胞反應(yīng)(3HTDR摻入法),測定其cpm值; 用流式細胞儀對外周血T細胞凋亡情況進行檢測。結(jié)果混合淋巴細胞反應(yīng)結(jié)果顯示,實驗組SD大鼠脾細胞免疫應(yīng)答能力于接種后受到顯著抑制,其cpm值較接種前顯著降低 (P<0.01); 對照組接種前后各時點比較,其差異無顯著性(Pgt;0.05); 接種后相同時點的cpm值組間比較, 實驗組顯著低于對照組(P<0.01); 與接種前比較,接種后實驗組外周血T細胞凋亡率顯著增高(Plt;0.01),且隨著疫苗接種次數(shù)的增加而升高,而對照組接種后各時點T細胞凋亡率與接種前比較差異無顯著性(Pgt;0.05)。結(jié)論T細胞疫苗可以誘導(dǎo)同種特異性免疫耐受,其機理可能是通過誘導(dǎo)外周血T細胞凋亡,清除抗原特異性反應(yīng)性T細胞克隆來實現(xiàn)的。
目的 探討核因子κB 圈套寡核苷酸( NF-κB decoy ODN) 轉(zhuǎn)染對小鼠成熟樹突狀細胞( DCs) 生物學特性的影響。方法 體外誘導(dǎo)Balb/c 小鼠骨髓細胞生成未成熟DCs( imDCs) , 經(jīng)抗原 OVA 以及LPS孵育后成為OVA 沖擊的骨髓來源成熟DCs( mDCs) , 流式細胞儀檢測DCs 表面分子CD11c 以及MHC-Ⅱ的表達予以鑒定; 將NF-κB decoy ODN 體外轉(zhuǎn)染小鼠骨髓來源成熟DCs, 同時設(shè)立陰性對照組( 轉(zhuǎn)染NF-κB“變異”O(jiān)DN) 以及未轉(zhuǎn)染組, EMSA 檢測轉(zhuǎn)染后NF-κB 的活性變化; 流式細胞儀檢測各組DCs 表面共刺激分子( CD40、CD80、CD86) 的表達; 混合淋巴細胞反應(yīng)觀察各組DCs 對OVA 致敏的T淋巴細胞增殖的影響。結(jié)果 成功培養(yǎng)出骨髓來源成熟DCs; NF-κB decoy ODN 轉(zhuǎn)染DCs 的NF-κB活性明顯降低( P lt;0. 05) , DCs 表面CD40、CD80 共刺激分子的表達與陰性對照組、未轉(zhuǎn)染組比較無明顯改變( P gt; 0. 05) , 而CD86 的表達與其他各組比較明顯降低( P lt;0. 05) ; 在混合淋巴細胞反應(yīng)中,NF-κB decoy ODN轉(zhuǎn)染DCs 對T細胞的增殖有抑制作用( P lt; 0.05) , 而陰性對照組與未轉(zhuǎn)染組的DCs具有強烈的激發(fā)T細胞增殖的能力( P lt; 0. 05) 。結(jié)論 NF-κB decoy ODN 轉(zhuǎn)染DCs 可能通過CD86 的表達降低顯著抑制抗原特異性T細胞活化, 該改良的DCs 有可能用于哮喘的免疫治療。
目的 研究犬臍血間充質(zhì)干細胞(cbMSC)心肌移植對梗死區(qū)CD4+T、CD8+T淋巴細胞分布的影響。 方法 取犬臍帶血,密度梯度離心法分離出單個核細胞,貼壁培養(yǎng)法擴增間質(zhì)干細胞;采用隨機數(shù)字表法將成年雄性雜種犬36只分為實驗組和對照組,采用結(jié)扎冠狀動脈左前降支的方法建立急性心肌梗死動物模型;實驗組取第4代細胞用5-氮雜胞苷誘導(dǎo)72 h,LacZ報告基因標記后經(jīng)冠狀動脈移植入犬心臟的梗死區(qū)域,對照組注射等體積的IMDM培養(yǎng)液;采用免疫組織化學法檢測表達β-gal的移植細胞以及梗死區(qū)域CD4+T、CD8+T的分布,應(yīng)用Image-Proplus 5.1軟件進行圖象分析。 結(jié)果 異體犬cbMSC移植心肌梗死區(qū)后可長期存活;圖象分析顯示,實驗組移植后第2、4、8周時,CD4+T的累積光密度值(IOD)為44.35±7.03,19.29±4.11和20.27±3.51,CD4+T與CD8+T的IOD比值為0.63±0.12,0.51±0.15和0.66±0.08;對照組CD4+T的IOD值為65.78±10.27,28.02±2.59和2979±6.83, CD4+T與CD8+T的IOD比值為1.28±0.20,1.34±0.09和1.50±0.16,兩組比較實驗組明顯低于對照組。檢測表明,實驗組移植后第2、4、8周時CD8+T的IOD為69.88±7.84,37.80±8.83和30.81±7.42,高于對照組的51.28±10.01,20.87±4.50和19.91±2.87。 結(jié)論 初步的實驗結(jié)果表明,犬cbMSC的同種異體移植能產(chǎn)生免疫耐受,其機制可能與其抑制CD4+T,減少局部浸潤的CD4+T數(shù)量,降低局部CD4+T/CD8+T比值有關(guān)。
目的 探討利用Toll樣受體關(guān)鍵蛋白轉(zhuǎn)錄水平抑制劑髓細胞樣分化標記物(myeloid differentiation marker 88,MyD88) siRNA,制備半成熟樹突狀細胞(dendritic cell,DC)的表型和致耐受功能。 方法 取BALB/c小鼠骨髓接種、培養(yǎng),加入濃度為10ng/ml 的重組小鼠粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(rmGM-CSF)誘導(dǎo),培養(yǎng)至第8d將DC分為3組,空白對照組:于培養(yǎng)過程中不加其它任何物質(zhì);LPS組:加入終濃度為1μg/ml 的LPS;實驗組:加入MyD88 siRNA 4h后,再加入1μg/ml 的LPS。采用流式細胞術(shù)檢測3組DC 的表型,用酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)檢測培養(yǎng)上清的白細胞介素10(IL-10)、白細胞介素12(IL-12)的含量,初次和再次混合淋巴細胞實驗檢測DC刺激T細胞增殖能力,并觀察術(shù)后鼠移植心存活時間。 結(jié)果 空白對照組DC表型為CD11c+、CD25-、CD40 low、CD80low、CD86low和MHC-Ⅱlow未成熟表型DC,再經(jīng)LPS刺激后成為成熟表型DC;而實驗組DC表型為CD11c+、CD25-、CD40mid、CD80low、CD86low和MHC-Ⅱmid半成熟表型,其IL-10/IL-12比率明顯增高;可誘導(dǎo)同種異型T細胞無反應(yīng)性,并能延長移植心存活時間。 結(jié)論 MyD88siRNA轉(zhuǎn)染結(jié)合LPS刺激可使未成熟DC進一步分化為一種半成熟DC,較未成熟DC擁有更穩(wěn)定有效的致耐受特性。
目的觀察術(shù)前輸注用低劑量粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GM—CSF)培養(yǎng)的小鼠骨髓源性未成熟樹突狀細胞(DC)對小鼠同種異體移植心存活時間的影響。方法分別用常規(guī)劑量和低劑量GM-CSF培養(yǎng)小鼠骨髓源性成熟DC;和未成熟DC,采用流式細胞術(shù)檢測細胞表型,比較其在體外刺激同種異體T細胞增殖的能力,并將培養(yǎng)的未成熟DC約1.0×106個于術(shù)前7d輸注受者體內(nèi),觀察同種異體移植心存活的時間。結(jié)果與常規(guī)劑量GM-CSF下培養(yǎng)出的成熟DC不同,低劑量GM—CSF培養(yǎng)出的DC為較單純的未成熟DC,表型為CD11c+,CD80-,CD86-,MHCⅡlow,在體外不能有效刺激同種異體T細胞活化增殖,將其于術(shù)前輸注受者體內(nèi),移植心的存活時間由6.3±1.2d延長至14.3±1.9d(P〈0.01)。結(jié)論用低劑量GM-CSF可培養(yǎng)出表型和功能均未成熟的小鼠骨髓源性DC,將其在術(shù)前7d輸注受者體內(nèi),可明顯延長移植心的存活時間。
目的 探討嵌合體在同種心臟移植免疫耐受中的作用?!》椒ā〔捎么笫蟾共啃呐K移植模型 ,將 30只L ewis大鼠隨機分成正常對照組 ( 組 )、排斥反應(yīng)組 ( 組 )、免疫耐受組 ( 組 ) ,每組 10只。觀察移植心存活時間 ,供心病理學改變 ,供、受者間的混合淋巴細胞反應(yīng) (ML R)和脾、胸腺嵌合體?!〗Y(jié)果 組供心平均存活時間 (85 .2 8±7.4 8天 )較 組 (7.33± 1.0 3天 )顯著長 (Plt;0 .0 1) ; 組供心見大量炎性細胞浸潤 , 組供心僅見少量炎性細胞浸潤 ; 組供、受者間 ML R較 組顯著低 (Plt;0 .0 1) ; 組受者的脾、胸腺形成了穩(wěn)定的供者細胞嵌合體。 結(jié)論 移植免疫耐受的受者形成了穩(wěn)定的中樞和外周嵌合體 ,嵌合體的形成對移植耐受起重要的作用。