目的 觀察脂多糖（LPS）及前炎癥細(xì)胞因子IL-1β、TNF-α誘導(dǎo)人原代氣道上皮細(xì)胞人β防御素-2（hBD-2）的表達(dá)，探討呼吸道先天性病原體防御機(jī)制。方法 LPS、IL-1β及TNF-α刺激培養(yǎng)的人原代氣道上皮細(xì)胞后，RT-PCR法檢測hBD-2 mRNA的表達(dá)，Western blot和免疫組化法檢測hBD-2蛋白的表達(dá)。結(jié)果 正常人原代上皮細(xì)胞有微量hBD-2 mRNA表達(dá)，不同質(zhì)量濃度的LPS、IL-1β、TNF-α刺激細(xì)胞后，hBD-2 mRNA表達(dá)呈劑量依賴性增加，與對照組差異顯著。0.1 μg/mL的LPS、1 ng/mL的IL-1β和10 ng/mL的TNF-α刺激上皮細(xì)胞4 h后，細(xì)胞均可見hBD-2蛋白表達(dá)。結(jié)論 一定劑量的LPS及前炎性細(xì)胞因子可誘導(dǎo)人氣道上皮細(xì)胞hBD-2表達(dá)，且hBD-2可較快表達(dá)，hBD-2的表達(dá)可能是氣道最初的防御反應(yīng)。
目的 觀察小鼠肺組織中β-防御素-4（mBD-4）和mBD-6的基因表達(dá)水平，以及急性肺損傷（ALI）對其表達(dá)的影響。方法 將60只成年昆明小鼠隨機(jī)分為ALI組和對照組（每組30只），用脂多糖腹腔注射復(fù)制ALI模型，于不同時間點處死小鼠獲取肺組織，實時熒光定量PCR檢測肺組織mBD-4、mBD-6的基因表達(dá)水平，測序鑒定PCR產(chǎn)物的特異性。結(jié)果 對照組肺組織中各時間點及ALI組6 h點均無mBD-4、mBD-6基因表達(dá)，而ALI組12 h，1 d，3 d時點表達(dá)顯著升高（依次為mBD-4：0.0326±0.0104，0.0487±0.0126，0.0468±0.0092；mBD-6：0.0397±0.0083，0.0444±0.0072，0.0425±0.0113）。ALI組小鼠mBD-4表達(dá)在12 h時點顯著低于1 d，3 d時點（P均lt;0.05），在1 d與3 d時無顯著差異（Pgt;0.05）；ALI組mBD-6表達(dá)在12 h，1 d，3 d時間點無顯著差異（Pgt;0.05）。結(jié)論 mBD-4和mBD-6基因在昆明小鼠肺組織中沒有組成型表達(dá)，而ALI可以誘導(dǎo)其表達(dá)。
目的 研究CD14過表達(dá)對胃癌細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子-κB（NF-κB）活性以及人β防御素-2（hBD-2）表達(dá)的影響，探討CD14在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用。 方法 體外培養(yǎng)CD14穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的胃癌SGC-7901細(xì)胞系及空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的對照細(xì)胞，CD14蛋白受體胞壁酰二肽刺激細(xì)胞，凝膠遷移實驗檢測NF-κB的活性，蛋白質(zhì)印跡法檢測NF-κB蛋白的表達(dá)，同時分別用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)以及蛋白質(zhì)印跡法檢測hBD-2 mRNA及蛋白的表達(dá)。 結(jié)果 與對照組相比，CD14過表達(dá)的細(xì)胞中NF-κB的活性明顯增強(qiáng)，蛋白表達(dá)量也大幅度增加，同時hBD-2的mRNA及蛋白的表達(dá)都有所提高。 結(jié)論 胃癌細(xì)胞中CD14在介導(dǎo)NF-κB的激活以及hBD-2的表達(dá)中發(fā)揮重要作用。
目的構(gòu)建負(fù)載BMP-2和人β防御素3（human β-defensin 3，HBD3）的聚羥基脂肪酸酯（polyhydroxyalkanoate，PHA）微球，并評估其抗菌性、生物相容性以及促成骨分化效果，旨在為骨組織工程提供一種新的支架材料。方法 采用大豆磷脂（soybean lecithin，SL）介導(dǎo)的生長因子修飾技術(shù)制備SL-BMP-2和SL-HBD3，再利用微流控技術(shù)制備含有BMP-2及HBD3的功能化PHA微球（functional microsphere，f-PMS），同法制備單純PHA微球（pure microsphere，p-PMS）作為對照。然后，通過掃描電鏡觀察兩種微球形貌、檢測吸水率，并利用ELISA試劑盒檢測f-PMS 中BMP-2和HBD3釋放規(guī)律；采用活/死細(xì)菌染色觀測兩種微球在金黃色葡萄球菌以及大腸桿菌懸液中的抗菌效果；采用與人BMSCs共培養(yǎng)，通過Transwell和細(xì)胞計數(shù)試劑盒8檢測微球生物相容性，以及Ⅰ型膠原（collagen type Ⅰ，COL-1）免疫熒光染色和ALP濃度測定來判定微球促成骨分化作用。結(jié)果 實驗成功構(gòu)建f-PMS及p-PMS兩種微球。掃描電鏡觀察示p-PMS表面粗糙，分布直徑 1～3 μm的孔隙；而f-PMS表明光滑，且存在白色顆粒狀物質(zhì)；兩組吸水率差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；f-PMS中BMP-2和HBD3釋放曲線基本一致，均呈現(xiàn)早期突釋、后期緩釋規(guī)律。f-PMS能抑制金黃色葡萄球菌及大腸桿菌生長，且抗菌性高于p-PMS，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；但兩種微球生物相容性差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。免疫熒光染色示f-PMS成骨特異性蛋白COL-1熒光強(qiáng)度高于p-PMS，ALP濃度高于p-PMS，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 p-PHA具有良好的抗菌能力和生物相容性，并且能促進(jìn)hBMSCs成骨分化，有望作為骨組織工程支架材料。