目的 觀察脂多糖（LPS）及前炎癥細(xì)胞因子IL-1β、TNF-α誘導(dǎo)人原代氣道上皮細(xì)胞人β防御素-2（hBD-2）的表達(dá)，探討呼吸道先天性病原體防御機(jī)制。方法 LPS、IL-1β及TNF-α刺激培養(yǎng)的人原代氣道上皮細(xì)胞后，RT-PCR法檢測(cè)hBD-2 mRNA的表達(dá)，Western blot和免疫組化法檢測(cè)hBD-2蛋白的表達(dá)。結(jié)果 正常人原代上皮細(xì)胞有微量hBD-2 mRNA表達(dá)，不同質(zhì)量濃度的LPS、IL-1β、TNF-α刺激細(xì)胞后，hBD-2 mRNA表達(dá)呈劑量依賴(lài)性增加，與對(duì)照組差異顯著。0.1 μg/mL的LPS、1 ng/mL的IL-1β和10 ng/mL的TNF-α刺激上皮細(xì)胞4 h后，細(xì)胞均可見(jiàn)hBD-2蛋白表達(dá)。結(jié)論 一定劑量的LPS及前炎性細(xì)胞因子可誘導(dǎo)人氣道上皮細(xì)胞hBD-2表達(dá)，且hBD-2可較快表達(dá)，hBD-2的表達(dá)可能是氣道最初的防御反應(yīng)。
目的 觀察小鼠肺組織中β-防御素-4（mBD-4）和mBD-6的基因表達(dá)水平，以及急性肺損傷（ALI）對(duì)其表達(dá)的影響。方法 將60只成年昆明小鼠隨機(jī)分為ALI組和對(duì)照組（每組30只），用脂多糖腹腔注射復(fù)制ALI模型，于不同時(shí)間點(diǎn)處死小鼠獲取肺組織，實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)肺組織mBD-4、mBD-6的基因表達(dá)水平，測(cè)序鑒定PCR產(chǎn)物的特異性。結(jié)果 對(duì)照組肺組織中各時(shí)間點(diǎn)及ALI組6 h點(diǎn)均無(wú)mBD-4、mBD-6基因表達(dá)，而ALI組12 h，1 d，3 d時(shí)點(diǎn)表達(dá)顯著升高（依次為mBD-4：0.0326±0.0104，0.0487±0.0126，0.0468±0.0092；mBD-6：0.0397±0.0083，0.0444±0.0072，0.0425±0.0113）。ALI組小鼠mBD-4表達(dá)在12 h時(shí)點(diǎn)顯著低于1 d，3 d時(shí)點(diǎn)（P均lt;0.05），在1 d與3 d時(shí)無(wú)顯著差異（Pgt;0.05）；ALI組mBD-6表達(dá)在12 h，1 d，3 d時(shí)間點(diǎn)無(wú)顯著差異（Pgt;0.05）。結(jié)論 mBD-4和mBD-6基因在昆明小鼠肺組織中沒(méi)有組成型表達(dá)，而ALI可以誘導(dǎo)其表達(dá)。
目的 研究CD14過(guò)表達(dá)對(duì)胃癌細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子-κB（NF-κB）活性以及人β防御素-2（hBD-2）表達(dá)的影響，探討CD14在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用。 方法 體外培養(yǎng)CD14穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的胃癌SGC-7901細(xì)胞系及空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的對(duì)照細(xì)胞，CD14蛋白受體胞壁酰二肽刺激細(xì)胞，凝膠遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)NF-κB的活性，蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)NF-κB蛋白的表達(dá)，同時(shí)分別用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)以及蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)hBD-2 mRNA及蛋白的表達(dá)。 結(jié)果 與對(duì)照組相比，CD14過(guò)表達(dá)的細(xì)胞中NF-κB的活性明顯增強(qiáng)，蛋白表達(dá)量也大幅度增加，同時(shí)hBD-2的mRNA及蛋白的表達(dá)都有所提高。 結(jié)論 胃癌細(xì)胞中CD14在介導(dǎo)NF-κB的激活以及hBD-2的表達(dá)中發(fā)揮重要作用。
目的構(gòu)建負(fù)載BMP-2和人β防御素3（human β-defensin 3，HBD3）的聚羥基脂肪酸酯（polyhydroxyalkanoate，PHA）微球，并評(píng)估其抗菌性、生物相容性以及促成骨分化效果，旨在為骨組織工程提供一種新的支架材料。方法 采用大豆磷脂（soybean lecithin，SL）介導(dǎo)的生長(zhǎng)因子修飾技術(shù)制備SL-BMP-2和SL-HBD3，再利用微流控技術(shù)制備含有BMP-2及HBD3的功能化PHA微球（functional microsphere，f-PMS），同法制備單純PHA微球（pure microsphere，p-PMS）作為對(duì)照。然后，通過(guò)掃描電鏡觀察兩種微球形貌、檢測(cè)吸水率，并利用ELISA試劑盒檢測(cè)f-PMS 中BMP-2和HBD3釋放規(guī)律；采用活/死細(xì)菌染色觀測(cè)兩種微球在金黃色葡萄球菌以及大腸桿菌懸液中的抗菌效果；采用與人BMSCs共培養(yǎng)，通過(guò)Transwell和細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒8檢測(cè)微球生物相容性，以及Ⅰ型膠原（collagen type Ⅰ，COL-1）免疫熒光染色和ALP濃度測(cè)定來(lái)判定微球促成骨分化作用。結(jié)果 實(shí)驗(yàn)成功構(gòu)建f-PMS及p-PMS兩種微球。掃描電鏡觀察示p-PMS表面粗糙，分布直徑 1～3 μm的孔隙；而f-PMS表明光滑，且存在白色顆粒狀物質(zhì)；兩組吸水率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；f-PMS中BMP-2和HBD3釋放曲線基本一致，均呈現(xiàn)早期突釋、后期緩釋規(guī)律。f-PMS能抑制金黃色葡萄球菌及大腸桿菌生長(zhǎng)，且抗菌性高于p-PMS，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；但兩種微球生物相容性差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。免疫熒光染色示f-PMS成骨特異性蛋白COL-1熒光強(qiáng)度高于p-PMS，ALP濃度高于p-PMS，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 p-PHA具有良好的抗菌能力和生物相容性，并且能促進(jìn)hBMSCs成骨分化，有望作為骨組織工程支架材料。