目的 探討p38絲裂素活化蛋白激酶（p38 mitogen activated protein kinase，p38MAPK）抑制劑是否通過調節(jié)Th17/Treg平衡減輕脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）所致急性肺損傷（acute lung injury，ALI）。方法 將Balb/c小鼠隨機分組為對照組、ALI組和干預組。對照組腹腔注射磷酸鹽緩沖液，ALI組腹腔注射40 mg/kg體重的LPS，干預組腹腔注射不同藥物濃度（0.5、1、2、5 mg/kg）的p38MAPK抑制劑SB203580藥物。1 h后通過腹腔注射LPS造模，12 h后處死小鼠并取材。肺組織送蘇木精–伊紅（hematoxylin-eosin，HE）染色觀察肺組織病理變化，檢測支氣管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid，BALF）中細胞分類計數(shù)和總蛋白水平。采用實時聚合酶鏈反應檢測叉頭框蛋白P3（forkhead box p3，F(xiàn)oxp3）和視黃酸受體相關孤兒受體γt（retinoic acid receptor-related orphan receptor-γt，RORγt）mRNA的表達量。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測肺組織勻漿中白細胞介素（interleukin，IL）-6、IL-10、IL-17、IL-23和轉化生長因子β（transforming growth factor-β，TGF-β）及血清中IL-6、腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）的蛋白含量。流式細胞計數(shù)法檢測脾臟組織勻漿中Th17細胞和調節(jié)性T細胞（regulatory cells，Treg）亞群。結果 在LPS誘導建立的ALI小鼠模型中，LPS可引起肺組織內炎性細胞浸潤，BALF中細胞總數(shù)及蛋白水平升高（P<0.05），中性粒細胞和單核細胞比例升高。SB203580干預后肺組織病理損傷程度減輕，相應的BALF中炎性細胞浸潤減少。ALI組血清中IL-6和TNF-α蛋白濃度較對照組明顯升高，SB203580干預后炎性細胞因子下降。與ALI組比較，干預組Th17細胞及Th17分化相關細胞因子IL-17和IL-23表達下降，轉錄因子RORγt分泌受抑制，而Treg及IL-10和Foxp3相關分化因子表達有所升高，且與SB203580呈濃度依賴性。SB203580干預后Th17/Treg比值較LPS組明顯降低（P<0.05）。結論 p38MAPK抑制劑可通過調節(jié)Treg細胞和Th17細胞失衡狀態(tài)減輕LPS導致的ALI。
目的 探討小鼠感染肺炎衣原體后肺組織TOLL 樣受體( TLR) 2 的基因表達變化及其信號傳導機制。方法 TLR4 基因缺失小鼠( C3H/HeJ) 96 只, 隨機分為對照組、模型組、SB203580 組和PDTC 組, 每組24 只。每組分別按1、4、7、14 d 各分4 個小組, 每小組6 只。對照組鼻內接種二磷酸蔗糖( 2sp) 緩沖液, 模型組和干預組均給予約4. 0 ×106 IFU/mL( 0. 04 mL) 的肺炎衣原體鼻內接種,SB203580 組和PDTC 組在接種完肺炎衣原體后分別立即腹腔注射相應的p38 蛋白激酶( p38MAPK)抑制劑SB203580 ( 100 mg/ kg ) 或核因子κB ( NF-κB) 抑制劑吡咯烷二硫氨基甲酸( PDTC)( 50 mg/kg) 。分別于接種后第1、4、7 及14 d 處死小鼠, RT-PCR 法檢測肺組織TLR2 mRNA 的表達,ELISA 法測定肺組織勻漿腫瘤壞死因子α( TNF-α) 的含量, 同時觀察肺組織病理變化。結果 小鼠感染肺炎衣原體后肺組織TLR2 mRNA 表達迅速升高, 以第4 d 和第7 d 明顯, 14 d 以后開始下降。PDTC 早期干預可在一定程度上抑制肺臟組織TLR2 mRNA 表達, 并在感染高峰期抑制明顯。SB203580 對小鼠肺組織TLR2 mRNA 表達也有明顯抑制。感染肺炎衣原體后, 肺組織TNF-α表達水平顯著高于正常組, SB203580 和PDTC 對小鼠肺組織TNF-α表達均有抑制作用, SB203580 對TNF-α的抑制作用強于PDTC。結果 小鼠感染肺炎衣原體后, 可引起TLR2 表達的增加。對p38MAPK 和 NF-κB 的干預均影響TLR2 的表達以及炎癥介質的釋放, 提示肺炎衣原體可能是通過TLR2 /MAPK 和TLR2 /NF-κB 通路導致肺部炎癥反應。
目的 通過建立小鼠肺炎衣原體感染的模型, 探討小鼠感染肺炎衣原體后, 其信號通路Toll 樣受體2( TLR2) -p38 蛋白激酶( p38MAPK) 中TLR2 mRNA 和p38MAPK mRNA 的表達變化及其信號通路抑制劑對其影響以及炎癥介質表達變化的意義。方法 使用TLR4 基因缺失小鼠( C3H/HeJ) 72 只, 隨機分為正常組、肺炎衣原體感染組、肺炎衣原體感染加特異性p38MAPK 抑制劑SB203580 干預組, 分別按接種后1、4、7 及14 d 各分4 組。正常組鼻內接種2SP 緩沖液, 感染組鼻內接種肺炎衣原體; 干預組在感染肺炎衣原體后即在腹腔注射SB203580, 分別在預定的時間處死, 取肺臟組織應用逆轉錄-聚合酶鏈反應( RT-PCR) 半定量方法檢測肺組織TLR2 mRNA 和p38MAPK mRNA的表達變化, 用酶聯(lián)免疫吸附法( ELISA) 測定TNF-α的含量。結果 與正常組比較, 感染肺炎衣原體后小鼠肺組織TLR2 mRNA 和p38MAPK mRNA 表達迅速升高, 以第4 d 和第7 d 最明顯, 其中TLR2mRNA 在第7 d 表達量明顯高于正常組[ ( 7. 24 ±1. 78) mg/L 比( 0. 64 ±0. 14) mg/L] , p38MAPK mRNA 在第4 d 表達量明顯高于正常組[ ( 9. 267 ±1. 813) mg/L 比( 3. 734 ±0. 946) mg/L] , 14 d 以后感染開始減輕。其相應的肺組織TNF-α含量表達也升高, 并明顯高于正常組, 以第4 d 為高峰( 77. 29 ±9. 66) pg/mg。給予SB203580 抑制劑后TLR2 mRNA 和p38MAPK mRNA 表達明顯減弱, 以第4 d 和第7 d 明顯, 其中TLR2 mRNA 在第7 d 為( 0. 269 ±0. 09) mg/L, p38 MAPK mRNA 在第4 d為( 0. 002 ±0. 001) mg/L, 其相應的肺組織TNF-α含量表達與感染組比較也明顯降低, 以第4 d( 25. 76 ±3. 49) pg/mg 明顯。結論 小鼠感染肺炎衣原體后, 可引起TLR2-p38 MAPK 信號通路的活化, 引起細胞因子的釋放。SB203580 對TLR2-p38 MAPK 信號通路有明顯的抑制作用, 并能抑制炎癥介質的釋放, 表明肺炎衣原體感染與TLR2-p38MAPK 的信號通路密切相關。
目的 探討17b-雌二醇（17b-E2）對兔在體缺血/再灌注（I/R）心肌的急性保護作用及其相關機制。方法 通過結扎冠狀動脈左前降支建立兔在體心肌I/R模型（心肌缺血40 min，再灌注3 h）；采用抽簽法將24只健康雄性新西蘭白兔隨機分為兩組（每組12只），對照組：心肌缺血前靜脈注入1ml乙醇；實驗組：心肌缺血前靜脈注入10 μg/kg 17b-E2。用酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）法分別于心肌缺血前、缺血40 min、再灌注1 h、2 h和3 h不同時間點檢測血清中腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細胞介素-6(IL-6)的含量；蛋白印跡法（Western blotting）測定心肌p38絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）的表達；脫氧核苷酸轉移酶介導的生物素脫氧尿嘧啶核苷酸缺口末端標記(TUNEL)法檢測心肌細胞凋亡。 結果 缺血過程中，實驗組TNF-α較對照組降低（F=0.007,P=0.001），而IL-6變化不明顯（F=0.616,P=0.095）; 再灌注過程中，實驗組TNF-α和IL6的含量明顯低于對照組（Plt;0.01）；同時實驗組p38MAPK的活性和心肌凋亡指數(shù)均明顯低于對照組(45.07%±2.73% vs. 61.25%±2.41%，t＝-15.398，P=0000；11.21%±3.85% vs. 22.02%±4.49%, t＝-6.332，P=0.000)。 結論 17bE2通過抑制炎癥反應及抗凋亡途徑減輕心肌I/R損傷，其作用可能是通過對p38MAPK的抑制而實現(xiàn)的。
目的:探討表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)對乳腺癌細胞MCF7生長的影響及對乳腺癌細胞MDAMB231遷移的影響。方法:MCF7細胞培養(yǎng)貼壁之后,加入EGCG處理,2d后收集蛋白,采用Western Blot檢測磷酸化p38絲裂原活化蛋白激酶(phosphop38MAPK)的表達;同樣處理后收集活細胞,用細胞計數(shù)法檢測細胞的存活;取對數(shù)生長期的MDAMB231細胞,分至6孔板培養(yǎng),使用EGCG處理后,采用細胞劃線法探測乳腺癌細胞的遷移。結果:使用EGCG處理乳腺癌細胞后,phosphop38MAPK的表達降低,EGCG處理乳腺癌細胞4d后其增殖率降低50%,遷移活性降低。結論:EGCG處理乳腺癌細胞能抑制腫瘤細胞的生長以及遷移,這與p38MAPK信號通路相關。