目的 研究過(guò)氧化氫對(duì) A549 細(xì)胞表達(dá)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子 β1 （ TGF-β1 ）和 Smad3 磷酸化的影響。方法 用過(guò)氧化氫建立體外A549細(xì)胞損傷模型，MTT法檢測(cè)過(guò)氧化氫對(duì)A549細(xì)胞增殖活性的影響，免疫印跡法（Western Blotting）觀察過(guò)氧化氫作用不同時(shí)間后A549細(xì)胞TGF-β1和Smad 3磷酸化的表達(dá)。結(jié)果 過(guò)氧化氫明顯抑制A549細(xì)胞的增殖，濃度為1.0 mmol/L時(shí)，其對(duì)A549細(xì)胞增殖的抑制率為46.34%；A549細(xì)胞在過(guò)氧化氫（1.0 mmol/L）的刺激下，TGF-β1和Smad3磷酸化的表達(dá)量逐漸升高，24 h時(shí)達(dá)到高峰, 48 h下降。結(jié)論 氧化損傷早期，A549細(xì)胞表達(dá)TGF-β1和Smad3磷酸化增加,這可能與肺損傷后依賴(lài)Smad3的組織修復(fù)有關(guān)。
【摘 要】 目的 對(duì)近年TGF-β1/Smad3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路與創(chuàng)傷后瘢痕形成的相關(guān)研究作一綜述。 方法 廣泛查閱國(guó)內(nèi)外近年有關(guān)TGF-β1/Smad3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路及與創(chuàng)傷后瘢痕形成的文獻(xiàn)，并進(jìn)行綜述。 結(jié)果 TGF-β1是纖維化疾病的重要影響因子，通過(guò)TGF-β1/Smad3信號(hào)通路轉(zhuǎn)導(dǎo)產(chǎn)生其生物學(xué)效應(yīng)。該途徑受多種因子調(diào)控并在細(xì)胞及分子水平與其他信號(hào)通路串話。該途徑參與創(chuàng)傷后早期炎性反應(yīng)、創(chuàng)面愈合及后期病理性瘢痕的形成。在分子水平干預(yù)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的各個(gè)環(huán)節(jié)，可以影響纖維化及細(xì)胞外基質(zhì)沉著的進(jìn)程。 結(jié)論 TGF-β1/Smad3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑是影響創(chuàng)傷后瘢痕形成及細(xì)胞外基質(zhì)沉著的重要途徑。對(duì)該途徑進(jìn)行深入研究，可為臨床促進(jìn)創(chuàng)面的愈合及病理性瘢痕的防治奠定理論基礎(chǔ)。
轉(zhuǎn)移生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β1)/Smad3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路與人類(lèi)的多種生理病理發(fā)生機(jī)制相關(guān),但是該信號(hào)通路中Smad3被磷酸化的時(shí)空信息仍然不完全清楚。為了動(dòng)態(tài)觀察活細(xì)胞生理狀態(tài)下Smad3被磷酸化的過(guò)程,首先進(jìn)行ECFP-Smad3-Citrine(Smad3 biosensor)融合蛋白表達(dá)載體的構(gòu)建及鑒定;然后轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞并觀察轉(zhuǎn)染效率和融合蛋白表達(dá)情況。在熒光顯微鏡下,應(yīng)用MetaFlour FRET 4.6軟件測(cè)量TGF-β1刺激293T細(xì)胞前后Smad3 biosensor的熒光能量共振轉(zhuǎn)移(FRET)的變化情況。結(jié)果顯示,Smad3 biosensor轉(zhuǎn)染效率達(dá)40%,融合蛋白表達(dá)成功。TGF-β1刺激293T細(xì)胞10 min后,監(jiān)測(cè)到胞質(zhì)內(nèi)FRET值逐漸減小,青色熒光蛋白(CFP)減弱,黃色熒光蛋白變體(Citrine)增強(qiáng),歷時(shí)約300 s后逐漸恢復(fù)。應(yīng)用FRET技術(shù)能使我們?cè)诨罴?xì)胞生理狀態(tài)下,實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)TGF-β1/Smad3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的過(guò)程。
目的探討柚皮素對(duì)人肺成纖維細(xì)胞生成血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)的影響,并研究其可能的機(jī)制。 方法培養(yǎng)人胚肺成纖維細(xì)胞,分為對(duì)照組、香煙提取物(CSE)組和柚皮素干預(yù)組。柚皮素干預(yù)組分別與低、中、高劑量的柚皮素共孵育2 h后,與CSE組一起加入CSE,調(diào)整終濃度柚皮素5 μmol/L、10 μmol/L和20 μmol/L,CSE終濃度5%。培養(yǎng)24、48及72 h后,ELISA法測(cè)定各組VEGF含量,采用Western blot法觀察各組Smad3及磷酸化Smad3(p-Smad3)的表達(dá)情況。 結(jié)果在人胚肺成纖維細(xì)胞中,柚皮素能抑制CSE誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子生成。CSE能顯著提高p-Smad3水平,而添加了柚皮素后p-Smad3明顯減少,并隨柚皮素劑量的增加而p-Smad3水平愈低。 結(jié)論柚皮素能夠抑制Smad3的磷酸化,從而抑制CSE誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的分泌。