目的觀察抗血管內(nèi)皮生長因子單克隆抗體Bevacizumab眼內(nèi)注射對非肥胖糖尿病小鼠視網(wǎng)膜微血管增生的預(yù)防作用。方法選取30只非肥胖糖尿病小鼠，左眼為實驗眼，右眼為對照眼。實驗眼眼內(nèi)注入1 mu;l Bevacizumab(25 mg/1 ml)溶液， 對照眼眼內(nèi)注入等量生理鹽水。分別在注射后1周，1、2個月時隨機各選取10只鼠，取出雙側(cè)眼球，行視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細胞超微結(jié)構(gòu)觀察以及視網(wǎng)膜CD34和血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）免疫組織化學(xué)測定，計算機圖像分析對比兩組間陽性染色密度的差異。結(jié)果 VEGF和CD34陽性表達均為棕黃色著色，CD34的染色定位在血管內(nèi)皮細胞上。在注射后1周、1個月時，兩組間VEGF表達比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=21.6, t=13.5; P＜0.01 ）；注射后2個月時，兩組間VEGF表達比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（t=0.9, P＞0.05）。注射后1周時，兩組間CD34表達比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（t=1.3, P＞0.05）；注射后1、2個月時，兩組間CD34表達比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t= 3.2, P＜0.01; t=2.7, P＜0.05）。注射后各時間段，視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細胞的微觀結(jié)構(gòu)都未發(fā)生明顯改變。結(jié)論 Bevacizumab眼內(nèi)注射可預(yù)防非肥胖糖尿病小鼠視網(wǎng)膜微血管的異常增生。 （中華眼底病雜志，2008，24：180-183）
在心血管疾病的發(fā)生過程中，常出現(xiàn)內(nèi)皮功能紊亂等初期癥狀，而此過程與一氧化氮（NO）介導(dǎo)的血管舒張密切相關(guān)，NO的釋放是由內(nèi)皮一氧化氮合酶NOS3所調(diào)控。近期研究表明，心血管疾病常常伴隨著NOS3基因多態(tài)性變化及表觀遺傳學(xué)修飾，而現(xiàn)有研究對于NOS3表觀遺傳學(xué)及基因多態(tài)性對于心血管疾病調(diào)控機制及靶向治療研究關(guān)注較少。本文綜述了近年來關(guān)于NOS3在心血管系統(tǒng)相關(guān)疾病中的研究現(xiàn)狀，總結(jié)了其在各類疾病發(fā)病過程中的分子機制，重點闡述了NOS3蛋白解離、NOS3表觀遺傳修飾及多態(tài)性在心血管疾病發(fā)生發(fā)展中的作用，并為相關(guān)疾病藥物開發(fā)的治療靶點設(shè)計提供參考。
目的系統(tǒng)評價內(nèi)皮型一氧化氮合酶（eNOS）基因a/b多態(tài)性與糖尿病視網(wǎng)膜病易感性的相關(guān)性。 方法計算機檢索PubMed、EMbase、The Cochrane Library（2015年第5期）、CBM、CNKI、VIP及WanFang Data數(shù)據(jù)庫，搜集eNOS基因a/b多態(tài)性與糖尿病視網(wǎng)膜病易感性的病例-對照研究，檢索時限均為建庫至2015年5月。由2位評價者獨立篩選文獻、提取資料，并評價納入研究的偏倚風(fēng)險后，采用RevMan 5.2軟件進行Meta分析。 結(jié)果共納入16個病例-對照研究，合計3 232例糖尿病視網(wǎng)膜病患者和3 555例對照人群。Meta分析結(jié)果顯示：在總體分析中，eNOS基因a/b多態(tài)性與糖尿病視網(wǎng)膜病易感性無相關(guān)性［顯性模型：OR=0.94，95% CI（0.78，1.15），P=0.57；隱性模型：OR=0.97，95% CI（0.78，1.22），P=0.82；aa vs. bb：OR=0.89，95% CI（0.71，1.12），P=0.32；ab vs. bb：OR=0.94，95% CI（0.77，1.14），P=0.52；a vs. b：OR=0.97，95% CI（0.82，1.14），P=0.70］。在按照種族進行的亞組分析中，eNOS基因a/b多態(tài)性與非洲人糖尿病視網(wǎng)膜病有相關(guān)性，但與亞洲人和白種人無相關(guān)性。 結(jié)論eNOS基因a/b多態(tài)性可能是非洲人糖尿病視網(wǎng)膜病的危險因子。
目前診斷試驗準(zhǔn)確性的網(wǎng)狀 Meta 分析尚在探索階段，我們先前探索并介紹了可以實現(xiàn)診斷試驗準(zhǔn)確性網(wǎng)狀 Meta 分析的不同方法。本文結(jié)合具體實例，介紹 ANOVA 模型實現(xiàn)貝葉斯方法的診斷試驗準(zhǔn)確性網(wǎng)狀 Meta 分析的步驟，以期為擬進行相關(guān)研究的學(xué)者提供參考。
目的探討 N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA） 受體介導(dǎo)的脊髓缺血-再灌注的保護機制。方法將 42 只 SD 大鼠隨機分為 4 組：非阻斷組（n=6）、生理鹽水組（n=12）、NMDA 受體阻斷劑 K-1024（25 mg/kg）組（n=12）和電壓門控 Ca2+通道阻斷劑尼莫地平（0.5 mg/kg）組（n=12），各組藥物缺血前 30 min 腹腔注射。評價神經(jīng)功能，觀察并比較腰段脊髓組織學(xué)變化、神經(jīng)遞質(zhì)氨基酸的釋放、脊髓神經(jīng)元型一氧化氮合成酶（nNOS）蛋白表達情況。結(jié)果再灌注 8 h 時，K-1024 組大鼠行為學(xué)評分為（2.00±0.00）分，與生理鹽水組［（5.83±0.41）分］和尼莫地平組［（5.00±1.00）分］相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。K-1024 組與生理鹽水組和尼莫地平組相比運動神經(jīng)元損傷更小。在缺血 10 min 后，各組谷氨酸濃度差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.731）；K-1024 組與生理鹽水組比較 nNOS 蛋白表達明顯下調(diào)（P<0.01）。再灌注 8 h 后，K-1024 組與生理鹽水組比較 nNOS 蛋白表達明顯上調(diào)（P<0.05）。結(jié)論脊髓缺血期，K-1024 是通過抑制 NMDA 受體，下調(diào) nNOS 蛋白表達發(fā)揮脊髓保護作用；再灌注期，K-1024 對脊髓的功能、結(jié)構(gòu)和神經(jīng)細胞生物活性有較好的保護作用。
目的探討 p22phox 和 NOX5 在缺氧誘導(dǎo)成骨細胞自噬和凋亡中的作用。方法將新生大鼠顱骨組織剪碎，采用組織塊貼壁法及差速貼壁法分離純化成骨細胞。取第 1 代細胞行 HE、茜素紅、ALP 染色以及流式細胞儀鑒定。采用三氣培養(yǎng)箱制備成骨細胞缺氧模型，于缺氧 0、3、6、12、24 h 時，采用 Western blot 檢測 p22phox、NOX5、LC3Ⅱ/Ⅰ表達情況，流式細胞儀檢測活性氧簇（reactive oxygen species，ROS）水平以及細胞凋亡率，選取細胞內(nèi) ROS 水平最高時間點作為后續(xù)實驗的缺氧時間點。將第 1 代成骨細胞分成正常組、si-p22phox 缺氧處理組和 si-NOX5 缺氧處理組，行對應(yīng)轉(zhuǎn)染及缺氧處理后，采用 RT-PCR 檢測 si-p22phox 和 si-NOX5 抑制效率。然后再將第1 代成骨細胞分成正常組、si-NC 缺氧處理組、si-p22phox 缺氧處理組以及 si-NOX5 缺氧處理組，行對應(yīng)轉(zhuǎn)染及缺氧處理后，采用 Western blot 檢測細胞 p22phox、NOX5、自噬相關(guān)蛋白（LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin）、凋亡相關(guān)蛋白（Bcl-2、Bax）表達情況，流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡率和 ROS 水平。最后，將成骨細胞分成缺氧 12 h 組（缺氧組）和同時抑制 si-p22phox 及 si-NOX5 并缺氧 12 h 組（抑制+缺氧組），對應(yīng)處理后免疫熒光染色觀察 Beclin 及 Bax 表達。結(jié)果經(jīng)鑒定，分離獲得的細胞為成骨細胞。缺氧處理后，成骨細胞 p22phox、NOX5、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白相對表達量以及細胞凋亡率均逐漸升高（P<0.05），ROS 水平亦升高（P<0.05）且 12 h 達峰值；選擇缺氧 12 h 模型進行后續(xù)實驗。抑制 p22phox 基因不影響 NOX5 的表達，而抑制 NOX5 基因也不影響 p22phox 的表達；與單純?nèi)毖跆幚硐啾龋种?p22phox 或 NOX5 基因表達后 LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin、Bax 蛋白相對表達量下降（P<0.05），Bcl-2 蛋白相對表達量增高（P<0.05），細胞凋亡率及 ROS 水平亦下降（P<0.05）；同時抑制 p22phox 和 NOX5 基因表達后，免疫熒光染色見 Beclin、Bax 熒光較弱。結(jié)論抑制 p22phox 和 NOX5 基因表達可以降低缺氧條件下成骨細胞內(nèi) ROS 水平，同時降低細胞自噬以及凋亡，尤其減弱了細胞早期向晚期凋亡的過渡，增強了缺氧成骨細胞的增殖能力。
目的 研究沉默 NOD 樣受體家族含 pyrin 結(jié)構(gòu)域蛋白 3（NOD-like receptor family, pyrin domain containing protein 3，NLRP3）基因?qū)Υ笫竽X微血管內(nèi)皮細胞（brain microvascular endothelial cell，BMEC）經(jīng)促炎劑脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）和腺苷三磷酸（adenosine triphosphate，ATP）誘導(dǎo)產(chǎn)生炎癥因子的影響，及 NLRP3 炎癥小體信號通路是否在 BMEC 經(jīng)促炎劑作用形成的腦小血管病細胞模型中發(fā)揮作用。方法 體外提取雄性 Wistar 大鼠 BMEC 并鑒定內(nèi)皮細胞的形態(tài)和純度。將正常培養(yǎng)的 BMEC 分為空白對照組和 LPS+ATP 組，利用蛋白質(zhì)印跡法和實時聚合酶鏈反應(yīng)檢測 NLRP3 炎癥小體及下游炎癥因子胱天蛋白酶（Caspase）-1 的表達，采用獨立樣本 t 檢驗進行組間比較；采用小干擾 RNA（small interfering RNA，siRNA）分子對 BMEC 內(nèi)的特定基因 NLRP3 進行沉默，將 siRNA NLRP3 和 siRNA 質(zhì)粒陰性對照分別轉(zhuǎn)染 BMEC 后，再將轉(zhuǎn)染后的細胞分為 4 組，即 siNC 組（未沉默目的基因，不加促炎劑）、siNLRP3 組（沉默目的基因，不加促炎劑）、siNC+LPS+ATP 組（未沉默目的基因，加促炎劑）、siNLRP3+LPS+ATP 組（沉默目的基因，加促炎劑），利用蛋白質(zhì)印跡法和實時聚合酶鏈反應(yīng)檢測各組 NLRP3 和 Caspase-1 的表達，采用析因設(shè)計的方差分析進行組間比較。結(jié)果 大鼠 BMEC 分離培養(yǎng) 24 h 后腦微血管段呈“串珠狀”，48 h 后 “島嶼狀”細胞團形成，72 h 后 “鋪路石”樣單層細胞貼壁生長，后細胞逐漸密集達匯合度 80%。免疫熒光染色檢測 BMEC 陽性率達 96%。在正常培養(yǎng)的細胞中，LPS+ATP 組 NLRP3 和 Caspase-1 的蛋白及 mRNA 表達較空白對照組升高（P<0.05）。在 RNA 干擾培養(yǎng)的細胞中，siNLRP3 組較 siNC 組、siNLRP3+LPS+ATP 組較 siNC+LPS+ATP 組 NLRP3、Caspase-1 的蛋白及 mRNA 表達量均降低（P<0.05），siNC+LPS+ATP 組較 siNC 組、siNLRP3+LPS+ATP 組較 siNLRP3 組 NLRP3、Caspase-1 的蛋白及 mRNA 表達量均升高（P<0.05）；對于 NLRP3、Caspase-1 的 mRNA 相對表達量，給予轉(zhuǎn)染質(zhì)粒和促炎劑干預(yù)的交互效應(yīng)有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 促炎劑 LPS 和 ATP 共同誘導(dǎo)能夠促進大鼠 BMEC 中 NLRP3 和 Caspase-1 的釋放。沉默 NLRP3 基因表達能夠降低促炎劑的誘導(dǎo)作用。NLRP3 炎癥小體信號通路可能在大鼠 BMEC 經(jīng)促炎劑作用形成的腦小血管病細胞模型中發(fā)揮作用。
為探討脫氧核糖核酸核蛋白體(rDNA)轉(zhuǎn)錄活性在大腸癌的診斷和鑒別診斷、治療效果及預(yù)后判斷的意義，通過細胞培養(yǎng)及銀染方法，應(yīng)用CMIAS-008圖像分析系統(tǒng)，對59例大腸癌、20例大腸炎性疾病患者及9例健康者的外周血T淋巴細胞rDNA轉(zhuǎn)錄活性進行了檢測(以核仁組成區(qū)嗜銀蛋白銀染強度來表達)。結(jié)果：大腸癌患者rDNA轉(zhuǎn)錄活性明顯降低，而在大腸炎性疾病組明顯升高，分別與正常對照組比較，差異均有顯著性意義(Ｐ＜0.01)； 大腸癌手術(shù)及化療后，T淋巴細胞rDNA轉(zhuǎn)錄活性則逐漸升高并接近正常對照組，術(shù)后3年內(nèi)腫瘤復(fù)發(fā)者該指標(biāo)則又逐漸下降。結(jié)論： T淋巴細胞rDNA轉(zhuǎn)錄活性的檢測可作為大腸癌與大腸炎性疾病的鑒別指標(biāo)，同時可作為療效及監(jiān)測腫瘤復(fù)發(fā)的參考指標(biāo)。
摘 要: 目的 應(yīng)用含牛內(nèi)皮型一氧化氮合成酶(eNOS)基因重組腺病毒(Ad5CMVNOSⅢ)轉(zhuǎn)染靜脈移植血管、觀察eNOS基因預(yù)防靜脈移植血管再狹窄的作用。方法 將21只雜種犬分為3組，手術(shù)對照組、Ad5CMVLac—Z(含大腸桿菌β半乳糖苷酶基因重組腺病毒)對照組和Ad5CMVNOSⅢ干預(yù)組。在犬頸靜脈、頸動脈旁路血管移植術(shù)中分別應(yīng)用Ad5CMVNOSⅢ病毒液或Ad5CMVLac—Z病毒液常溫浸泡法感染靜脈移植血管30分鐘，術(shù)后28天病理切片觀測移植血管新內(nèi)膜增生狀況。結(jié)果 與正常犬頸外靜脈相比，手術(shù)對照組、Ad5CMVLac—Z對照組和Ad5CMVNOSⅢ干預(yù)組頸外靜脈移植血管內(nèi)膜／中膜比較均有不同程度增加(P＜0．05)，但Ad5CMVNOSⅢ組內(nèi)膜／中膜比顯著低于另外2個對照組(P＜0．05)，新內(nèi)膜增生明顯減輕。結(jié)論 Ad5CMVNOSⅢ感染靜脈旁路移植血管對預(yù)防再狹窄有一定作用。
目的 研究不同劑量雌激素對皮瓣組織損傷、血供及成活面積的影響，并探討其作用機制。 方法 取3 ～ 4 月齡新西蘭白兔30 只，雌雄不限，體重1.5 ～ 2.2 kg，制備以兔背中線為軸、蒂在頭側(cè)、大小為12 cm × 3 cm 的隨意皮瓣，7 d 皮瓣斷蒂。隨機分為3 組，每組10 只。A、B 組造模后2、4、6 d 于皮瓣近側(cè)分別注射100、50 μg/kg 苯甲酸雌二醇注射液，深達皮下；C 組不作處理，作為對照組。觀察動物一般情況，并于注射完畢后3、7 d 行大體觀察，7 d 測量皮瓣成活面積，5 d 測量血清丙二醛（malondialdehyde，MDA）及NO 含量，4、7 d 切取皮瓣行組織學(xué)及免疫組織化學(xué)觀察，行中性粒細胞（neutrophil，NEU）計數(shù)及VEGF 評分。 結(jié)果 術(shù)中3 組各1 只動物因麻醉過量死亡，余存活至實驗完成。造膜后3 組動物皮瓣遠端均出現(xiàn)不同程度發(fā)黑、變硬，其中C 組較明顯，無滲出，注射完畢后3 d 皮瓣皮溫接近正常皮膚。注射完畢后7 d，A、B、C 組皮瓣成活面積分別為（13.71 ± 2.91）、（12.80 ± 1.99）及（10.12 ± 1.43） cm2；術(shù)后5 d，A、B、C 組MDA 含量分別為（4.02 ± 0.85）、（3.99 ± 0.77）及（4.89 ± 0.75） nmol/mL，NO 含量分別為（89.36 ± 14.82）、（88.37 ±24.81）及（65.78 ± 19.04）μmol/L。以上各指標(biāo)A、B 組與C 組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05），A、B 組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）。注射完畢后4 d，A、B、C 組NEU 計數(shù)分別為（18.20 ± 6.24）、（21.27 ± 5.34）及（28.78 ± 7.92）個 /HP；注射完畢后7 d 分別為（15.16 ± 7.02）、（18.12 ± 6.44）及（29.67 ± 9.12）個/HP，各組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）。注射完畢后4 d，A、B、C 組VEGF 評分分別為（4.02 ± 0.48）、（4.19 ± 0.66）及（3.67 ± 0.49）分；注射完畢后7 d 分別為（4.96 ± 0.69）、（5.12 ± 0.77）及（3.81 ± 0.54）分。NEU 計數(shù)及VEGF 評分組內(nèi)不同時間點比較A、B 組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05），C 組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）；各時間點組間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）。 結(jié)論 雌激素注射可使皮瓣VEGF 表達上調(diào)、NO 含量增加、MDA 含量降低、NEU 浸潤減少，增加皮瓣成活面積。