目的 為早期診斷和有效預(yù)防心臟移植排斥反應(yīng)，研究在細(xì)胞水平用心肌NAD(P)H熒光成分分析監(jiān)測排斥反應(yīng)的可行性。 方法 用NAD(P)H熒光標(biāo)記監(jiān)測線粒體功能，從14例兒童心臟移植患者心內(nèi)膜活檢組織中分離活體心肌細(xì)胞和大鼠(n=5, 13~14周齡)心肌細(xì)胞，光譜分辨的時間相關(guān)單光子計數(shù)(TCSPC)記錄375 nm紫外激光激發(fā)的心肌自發(fā)熒光(AF)光譜和熒光壽命。將鼠心肌細(xì)胞分為4組，無缺氧對照組，無缺氧魚藤酮組，缺血對照組和缺血魚藤酮組； 對比無排斥反應(yīng)（R0）人心肌細(xì)胞，無缺氧鼠細(xì)胞和缺血鼠細(xì)胞間， R0人心肌細(xì)胞和輕度排斥反應(yīng)（R1）間的AF動力學(xué)變化。 結(jié)果 成功分離并測定了人心肌細(xì)胞AF光譜，在420~560 nm光譜區(qū)域，至少存在0.5~0.7 ns，1.9~2.4 ns和9.0~15.0 ns 3個AF壽命池。與無缺氧對照組比較，缺血對照組鼠心肌細(xì)胞熒光強度明顯增強（Plt;0.05）；無缺氧魚藤酮組和缺血魚藤酮組心肌AF強度均顯著增強，兩組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（Pgt;0.05）。R0組人心肌細(xì)胞AF強度顯著弱于無缺氧對照組鼠心肌細(xì)胞(Plt;0.05)；人心肌AF強度與排斥反應(yīng)相關(guān)， R1的熒光強度顯著增強(Plt;0.05)，但光譜形態(tài)無改變，與缺血對照組鼠心肌細(xì)胞光譜改變一致。 結(jié)論 光譜分辨的熒光光譜結(jié)合熒光壽命分析是監(jiān)測心肌線粒體氧化代謝的敏感方法，有良好的重復(fù)性。人心肌AF表現(xiàn)出較高的代謝活性，排斥反應(yīng)時活性降低。該技術(shù)結(jié)合多光子共聚焦顯微鏡，可直接在體評估線粒體功能，是監(jiān)測早期排斥反應(yīng)的新方法。