分離培養(yǎng)脂肪來源干細(xì)胞（adipose-derived stem cells，ADSCs），探討胰島素刺激前后其分泌因子的變化及對人角質(zhì)形成細(xì)胞株 HaCaT 細(xì)胞生物學(xué)影響。 方法 從腹部外科手術(shù)患者自愿捐獻(xiàn)皮下脂肪組織中分離、培養(yǎng) ADSCs，取第3 代ADSCs 調(diào)整密度為 5 × 104 個/mL，采用1 × 10-7 mol/L 胰島素刺激作為A 組，以未加胰島素刺激作為B 組，培養(yǎng)3 d 后收集兩組ADSCs 培養(yǎng)上清液（conditioned medium of ADSCs，ADSC-CM），ELISA 法測定其VEGF、肝細(xì)胞生長因子（hepatocyte growth factor，HGF）含量。取人角質(zhì)形成細(xì)胞株 HaCaT 細(xì)胞培養(yǎng)，將第4 代細(xì)胞根據(jù)培養(yǎng)液不同分為4 組。A1 組：含A 組ADSC-CM 和2% FBS 各0.5 mL；B1 組：含B 組ADSC-CM 和2% FBS 各0.5 mL；C1組：1 mL 含終濃度為1 × 10-7 mol/L 胰島素的2%FBS；D1 組：僅含2%FBS 1 mL。培養(yǎng)3 d 采用MTT 法測定HaCaT 細(xì)胞增殖情況；培養(yǎng)12 h Annexin V-FITC 雙染測定細(xì)胞凋亡情況；培養(yǎng)0、12、24、36、48 h 采用體外細(xì)胞劃痕法測定其遷移能力。 結(jié)果 A 組 VEGF、HGF 含量分別為（643.28 ± 63.57）、（929.95 ± 67.52）pg/mL，B 組分別為（286.52 ± 46.68）、（576.61 ± 84.29） pg/mL，組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）。細(xì)胞增殖測定A1、B1 組吸光度值分別為0.881 ± 0.039、0.804 ± 0.041，與C1 組（0.663 ± 0.027）及D1 組（0.652 ± 0.042）比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.01）；A1 組高于B1 組（P lt; 0.05）。A1、B1 組凋亡率分別為5.23% ± 1.98%、8.82% ± 2.59%，均低于C1 組（31.70% ± 8.85%）和D1 組（29.60% ±8.41%），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05），但B1 組凋亡率高于A1 組（P lt; 0.05）。A1 、B1、C1 和D1 組36 h 遷移距離分別為（0.184 6 ± 0.019 2）、（0.159 8 ± 0.029 4）、（0.059 2 ± 0.017 6） 及（0.058 2 ± 0.012 3）mm，48 h 分別為（0.231 8 ± 0.174 0）、（0.205 1 ± 0.012 1）、（0.079 2 ± 0.008 1）及（0.078 4 ± 0.011 7）mm，兩時間點A1 組和B1 組距離明顯大于C1 組和D1 組（Plt; 0.01），A1 組大于B1 組（P lt; 0.05）；其他時間點遷移距離差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）。 結(jié)論 胰島素干預(yù)后ADSCs能更有效促進(jìn) HaCaT 細(xì)胞增殖、遷移和抑制凋亡。
目的 采用人永生化上皮角質(zhì)形成細(xì)胞系 HaCaT 構(gòu)建表皮模型，探討其作為皮膚刺激性替代實驗的可行性。 方法 取 HaCaT 細(xì)胞采用氣-液面培養(yǎng)的方式構(gòu)建表皮模型，同法以采用人原代上皮角質(zhì)形成細(xì)胞構(gòu)建的表皮模型 EpiKutis?作為對照。HE 染色觀察兩種模型的組織形態(tài)；采用快速滲透實驗方法檢測兩種模型屏障功能（ET50 值）；取 20 種化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)品分別于兩種模型表面受試 30 min，孵育 42 h 后 MTT 法測定組織相對活力百分比，判斷化學(xué)品刺激性，并與聯(lián)合國-化學(xué)品分類及標(biāo)記全球協(xié)調(diào)制度（UN GHS）體內(nèi)測試結(jié)果分類和經(jīng)濟(jì)合作與發(fā)展組織（OECD）TG439（2013版） 中采用的體外替代方法（validated reference method，VRM）體外測試結(jié)果分類進(jìn)行比較。 結(jié)果 HE 染色示，構(gòu)建的 HaCaT 模型無完整復(fù)層化結(jié)構(gòu)；屏障功能檢測結(jié)果示，ET50 值為 0.99 h；通過 20 種化學(xué)品檢測，HaCaT 模型的靈敏度為 100%，特異性為 50%，準(zhǔn)確率為 75%；EpiKutis?模型靈敏度為 100%，特異性為 70%，準(zhǔn)確率為 85%。 結(jié)論 HaCaT 細(xì)胞構(gòu)建的表皮模型不具備完整的表皮皮膚生理結(jié)構(gòu)特征，屏障功能較低，化學(xué)品體外皮膚刺激性測試結(jié)果不能完全滿足 OECD 關(guān)于刺激物的正確判定標(biāo)準(zhǔn)，不適宜作為化學(xué)品皮膚刺激性體外替代檢測的工具。
目的 探討 HaCaT 條件培養(yǎng)基能否促進(jìn)全反式維甲酸（all-trans retinoic acid，ATRA）誘導(dǎo)人脂肪干細(xì)胞向表皮細(xì)胞的分化。 方法 體外分離培養(yǎng)脂肪干細(xì)胞，通過流式細(xì)胞術(shù)檢測 CD34、CD45、CD73、CD90、CD105 蛋白的表達(dá)以及成脂成骨誘導(dǎo)分化鑒定脂肪干細(xì)胞。Transwell 小室構(gòu)建氣液界面培養(yǎng)模型，配制含 ATRA、表皮生長因子（epidermal growth factor，EGF）、角質(zhì)細(xì)胞生長因子（keratinocyte growth factor，KGF）的誘導(dǎo)培養(yǎng)基 A 以及含 50%HaCaT 上清液、ATRA、EGF、KGF 的誘導(dǎo)培養(yǎng)基 B。實驗分 3 組，即誘導(dǎo)培養(yǎng)基 A 組、誘導(dǎo)培養(yǎng)基 B 組及常規(guī)培養(yǎng)未誘導(dǎo)組，氣液界面誘導(dǎo)培養(yǎng) 12 d，流式細(xì)胞術(shù)檢測誘導(dǎo)后細(xì)胞 CK14、15、16、19 廣譜細(xì)胞角蛋白（pan cytokeratin，Pan-CK）的表達(dá)。免疫熒光法檢測 CK14 的表達(dá)。 結(jié)果 脂肪干細(xì)胞成表皮誘導(dǎo)培養(yǎng)后，流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果顯示誘導(dǎo)組 B Pan-CK 表達(dá)率大于誘導(dǎo)組 A，兩組均大于未誘導(dǎo)組［分別為（22.0±3.5）%、（11.9±2.7）%、（1.1±0.3）%，P<0.01］，免疫熒光法檢測結(jié)果顯示誘導(dǎo)組均具有 CK14 熒光表達(dá)，誘導(dǎo)組 B CK14 表達(dá)率大于誘導(dǎo)組 A［分別為（19.5±7.0）%、（10.8±5.7）%，P<0.01］，未誘導(dǎo)組未見 CK14 熒光表達(dá)。 結(jié)論 HaCaT 條件培養(yǎng)基可加強(qiáng) ATRA 誘導(dǎo)人脂肪干細(xì)胞向表皮細(xì)胞的分化的能力。