目的 構(gòu)建受甲胎蛋白（AFP）增強(qiáng)子和白蛋白（Alb）啟動(dòng)子調(diào)控的含有血管抑制素（angiostatin）K5序列的真核表達(dá)載體，通過基因轉(zhuǎn)染，將angiostatin K5基因?qū)敫伟┘?xì)胞，觀察angiostatin K5的表達(dá)。方法 用RTPCR法從正常人真核細(xì)胞擴(kuò)增出angiostatin K5基因，將AFP增強(qiáng)子和Alb啟動(dòng)子調(diào)控序列定向克隆入真核表達(dá)載體pcDNA3.1，并將angiostatin K5 cDNA置于上述調(diào)控序列之下，從而構(gòu)建得到重組真核表達(dá)載體pcDNA3.1AFABangiostatin K5His。利用細(xì)胞培養(yǎng)、脂質(zhì)體介導(dǎo)的細(xì)胞轉(zhuǎn)染，將angiostatin K5基因?qū)敫伟┘?xì)胞。利用SDSPAGE和Western blot法檢測(cè)肝癌細(xì)胞中angiostatin K5的表達(dá)。結(jié)果 通過酶切鑒定及DNA測(cè)序證實(shí)目的真核表達(dá)載體pcDNA3.1AFABangiostatin K5His與預(yù)期的結(jié)果相同。SDSPAGE及Western blot分析證明，angiostatin K5在肝癌細(xì)胞中得以表達(dá)。結(jié)論 構(gòu)建的肝癌特異性重組真核表達(dá)載體可增加對(duì)AFP陽性肝癌細(xì)胞的治療的特異性，并用于實(shí)現(xiàn)對(duì)肝癌的特異性血管抑制作用。
目的觀察子宮內(nèi)膜異位癥不孕患者腹腔鏡術(shù)后聯(lián)合促性腺激素釋放激素激動(dòng)劑（GnRH-a）的療效及子宮內(nèi)膜異位癥癥生育指數(shù)（EFI）對(duì)妊娠結(jié)局的預(yù)測(cè)價(jià)值。 方法2005年1月-2011年7月對(duì)接受腹腔鏡手術(shù)治療的125例子宮內(nèi)膜異位癥不孕患者的資料進(jìn)行回顧性分析，并計(jì)算EFI。依據(jù)術(shù)后輔助治療情況，將治療結(jié)束后的患者分為2組：對(duì)照組為單純腹腔鏡手術(shù)治療組；GnRH-a組為腹腔鏡術(shù)后聯(lián)合GnRH-a治療組。觀察兩組患者治療后的自然妊娠率，以及不同EFI分值的患者治療后的自然妊娠率。 結(jié)果103例完成隨訪，其中對(duì)照組48例，GnRH-a組55例。治療后半年、1年和3年的累計(jì)妊娠率在對(duì)照組分別為12.5%、31.2%和41.7%，GnRH-a組分別為0%、16.3%和40.0%，兩組間1年和3年累計(jì)妊娠率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。GnRH-a組55例，幾乎均發(fā)生了不同程度的藥物不良反應(yīng)，但無嚴(yán)重不良反應(yīng)發(fā)生，停藥后不良反應(yīng)均消失。EFI 8～10分的患者1年和3年累計(jì)妊娠率分別為31.3%和62.5%；EFI 5～7分的患者1年和3年累計(jì)妊娠率分別為15.2%和26.0%；EFI 0～4分的患者9例，術(shù)后1例未用藥，其余8例均使用GnRH-a治療，均未妊娠。EFI分值同患者1年和3年累計(jì)妊娠率呈正相關(guān)（rs=0.204，P=0.039；rs=0.437，P＜0.001）。 結(jié)論與單純腹腔鏡手術(shù)相比，術(shù)后輔助GnRH-a治療不能提高自然妊娠率，并使妊娠時(shí)機(jī)延后，增加藥物不良反應(yīng)；EFI 可以有效預(yù)測(cè)治療后的自然妊娠率，EFI 評(píng)分8分以上患者治療后可以短期期待，EFI 評(píng)分7分以下治療后自然妊娠率較低，建議盡快輔助生殖。