目的 研究COPD 大鼠骨骼肌蛋白酶體C2 亞基的表達, 以及TNF-α對其表達的影響, 探討COPD 大鼠骨骼肌蛋白高分解代謝的機制。方法 SD 大鼠隨機分為對照組、COPD 組及COPD + TNF-α組, 每組15 只。COPD 組和COPD + TNF-α組大鼠用單純熏香煙法制成COPD 大鼠動物模型, 分離其伸趾長肌, 分別給予不含和含TNF-α( 10 μg/L) 的孵育液進行離體有氧孵育。利用實時定量 PCR 和Western blot 技術檢測C2 亞基在轉(zhuǎn)錄和蛋白水平的變化。結(jié)果 COPD 組和COPD + TNF-α 組C2 亞基mRNA 表達為對照組的1. 74 倍和1. 95 倍( P 均lt; 0. 01) , 其中COPD + TNF-α組顯著高于 COPD 組( P lt;0. 01) 。COPD 組和COPD + TNF-α組C2 亞基蛋白表達也顯著高于對照組( 1. 04 ±0. 15 和1. 23 ±0. 16 比0. 71 ±0. 12, P lt;0. 05 和P lt; 0. 01) , COPD組和COPD + TNF-α組表達無顯著差異 ( P gt;0. 05) 。結(jié)論 COPD 時骨骼肌蛋白降解增加可能是經(jīng)由TNF-α激活泛素-蛋白酶體途徑所致。
目的 觀察骨骼肌衛(wèi)星細胞梗死心肌移植后心肌細胞結(jié)蛋白的變化。方法 自犬臀部取骨骼肌體外提取、培養(yǎng)、擴增骨骼肌衛(wèi)星細胞，４’，６－二脒基－２－苯吲哚（ＤＡＰＩ）熒光標記，經(jīng)結(jié)扎的左冠狀動脈前降支遠端灌注移植入自體急性心肌梗死區(qū)域，２周、４周和８周后將犬處死，取病理標本行免疫組織化學檢測心肌細胞結(jié)蛋白表達、組織切片染色觀察組織結(jié)構。結(jié)果 在梗死區(qū)部位觀察到帶熒光的細胞核及纖維，部分已分化成橫紋肌并以閏盤相連。正常區(qū)域心肌細胞結(jié)蛋白排列位于心肌細胞Ｚ線處，可見清晰顯示的肌小節(jié)；梗死區(qū)心肌細胞結(jié)蛋白表達明顯高于正常區(qū)域心肌細胞，但排列紊亂，整個心肌細胞均見陽性表達的結(jié)蛋白，未見肌小節(jié)；４周、８周時治療部分梗死心肌細胞已恢復排列并重見肌小節(jié)，但梗死區(qū)心肌細胞結(jié)蛋白表達仍明顯高于正常區(qū)域心肌細胞（Ｐ〈０．０１）。結(jié)論 骨賂肌衛(wèi)星細胞梗死心肌移植后對梗死心肌的組織結(jié)構起到了保護作用，使心肌細胞結(jié)蛋白分布恢復正常。
目的 細胞外基質(zhì)是脂肪組織工程材料的研究熱點之一。通過探討骨骼肌無細胞基質(zhì)的制作方法及生物相容性，為其在脂肪組織工程中的應用奠定基礎。 方法 取健康成年小香豬新鮮骨骼肌組織，橫切成厚2 ～ 3 mm 的組織塊，采用低滲- 去垢劑法脫細胞處理。處理后采用HE 染色、Masson 三色染色、免疫組織化學染色及掃描電鏡檢測骨骼肌無細胞基質(zhì)是否有細胞成分殘留，并觀察其基本結(jié)構；應用MTT 法檢測骨骼肌無細胞基質(zhì)細胞毒性。取乳腺癌患者自愿捐贈脂肪組織，分離培養(yǎng)人脂肪干細胞（human adipose-derived stem cells，hADSCs），從形態(tài)學、流式細胞學和成脂、成骨分化能力方面進行鑒定。將骨骼肌無細胞基質(zhì)與第3 代hADSCs 共培養(yǎng)，于培養(yǎng)后第1、3、5、7 天通過細胞活性檢測材料上細胞黏附、擴散和增殖情況，了解其與細胞之間的相互作用。 結(jié)果 HE、Masson、免疫組織化學染色及掃描電鏡觀察顯示骨骼肌無細胞基質(zhì)肌纖維去除完全，無細胞核殘留，基質(zhì)結(jié)構保留完整；大量連接成網(wǎng)狀的膠原纖維呈多孔隙樣結(jié)構，規(guī)則排列。MTT 檢測示骨骼肌無細胞基質(zhì)細胞毒性為1 級，細胞相容性好。細胞活性檢測示hADSCs 在骨骼肌無細胞基質(zhì)上能很好地伸展，且能與周圍基質(zhì)黏附，進入基質(zhì)內(nèi)部并相互交織。 結(jié)論 經(jīng)脫細胞處理的骨骼肌無細胞基質(zhì)具有良好生物相容性，可能作為脂肪組織工程的支架材料。
【摘 要】 目的 構建高表達膠質(zhì)源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（glial cell derived neurotrophic factor，GDNF）的成肌細胞（myoblast，Mb）并作為種子細胞，以去細胞膠原海綿為支架，體內(nèi)構建組織工程骨骼肌，觀察構建組織能否與舌下神經(jīng)斷端發(fā)生連接。 方法 取7只2日齡雄性Lewis大鼠四肢肌肉體外分離培養(yǎng)Mb，采用攜帶GDNF基因的重組腺病毒Ad-GDNF轉(zhuǎn)染第3代Mb（MbGDNF）。將Mb及MbGDNF與去細胞膠原海綿支架體外復合培養(yǎng)構建細胞支架復合物，24 h后掃描電鏡觀察細胞黏附情況。取8周齡雌性Lewis大鼠54只，解剖分離舌下神經(jīng)，取1.0～1.5 cm舌下神經(jīng)離斷其遠心端，用Mb支架復合物（Mb組，n=27）和MbGDNF支架復合物（MbGDNF組，n=27）包裹并固定其近心端，術后1、6及12周分別行HE染色，myogenin、slow skeletal myosin及乙酰膽堿受體α1（actylcholine receptor α1，AchRα1）免疫組織化學染色檢測植入物生長情況，并行霍亂毒素B標記的過氧化物酶逆行示蹤染色檢測損傷后舌下神經(jīng)核運動神經(jīng)元存活情況。 結(jié)果 構建的MbGDNF能高表達轉(zhuǎn)染基因。Mb及MbGDNF在支架上黏附和生長狀態(tài)良好。HE染色：術后12周，兩組植入物與周圍組織緊密連接，有新生肌纖維從周圍正常肌組織長入，與正常組織分界漸不明顯。免疫組織化學染色：術后1、6及12周均可檢測到細胞質(zhì)呈myogenin及slow skeletal myosin陽性的肌源性細胞，以及AchRα1呈彌散性陽性細胞。Y染色體染色陽性細胞隨時間延長而減少。術后1、6及12周，MbGDNF組陽性標記的神經(jīng)元數(shù)量分別為261.0 ± 6.6、227.3 ± 8.5及173.3 ± 9.1；Mb組分別為234.7 ± 5.5、196.0 ± 13.5及166.7 ± 11.7；術后1、6周MbGDNF組神經(jīng)元數(shù)量多于Mb組（P lt; 0.05），術后12周兩組差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。 結(jié)論 構建的組織工程骨骼肌與舌下神經(jīng)斷端發(fā)生了直接物質(zhì)聯(lián)系，MbGDNF產(chǎn)生的重組GDNF能通過逆行運輸方式保護損傷后舌下神經(jīng)核團內(nèi)運動神經(jīng)元的存活。
【摘 要】 目的 研究按摩對兔股四頭肌損傷的肌組織病理修復、細胞骨架蛋白結(jié)蛋白（Desmin）和α-肌動蛋白（α-Actin）表達的效應差異，探討按摩促進肌肉損傷修復的作用機制。 方法 健康成年雄性新西蘭大白兔27只，體重（2.0 ± 0.5）kg，隨機分為3組，正常對照組（A組，n=3）、自然恢復組（B組，n=12）和按摩組（C組，n=12）。A組實驗動物不作任何處理，B、C組實驗動物用自制打擊器制備兔右后肢股四頭肌損傷模型。C組于造模后第8天開始按摩，按摩轉(zhuǎn)速3 000～3 100 r/min，按摩時間15 min，每天1次至處死取材為止；B組不予按摩。B、C組于傷后14 d及21 d各取6只實驗動物股四頭肌樣本，HE染色觀察組織病理變化，免疫組織化學染色及Western blot檢測Desmin、α-Actin表達，并與A組正常股四頭肌標本進行比較。 結(jié)果 B、C組實驗動物均存活至實驗完成。A組肌纖維形態(tài)規(guī)整，排列整齊，無結(jié)締樣組織；B組股四頭肌標本見明顯組織壞死，多數(shù)肌纖維斷裂、萎縮、排列紊亂；C組骨骼肌組織形態(tài)、肌萎縮較B組改善，受損部位可見新生肌纖維。免疫組織化學染色顯示各時間點B、C組Desmin、α-Actin表達均低于A組（P lt; 0.05）；但C組Desmin、α-Actin表達均較B組增強（P lt; 0.05），且21 d時明顯高于14 d（P lt; 0.05）。Western blot檢測示A組Desmin、α-Actin高于B、C組（P lt; 0.05）， B組兩種蛋白表達最低。 結(jié)論 按摩可促進兔損傷股四頭肌的組織形態(tài)及細胞骨架恢復，可能通過上調(diào)Desmin、α-Actin表達促進骨骼肌組織損傷修復。
目的 研究人羊水來源干細胞（human amniotic fluid colony derived stem cells，hAFCSCs）是否參與小鼠肌肉損傷修復過程，探討應用hAFCSCs 治療肌肉損傷的方法及可行性。 方法 B 超引導下穿刺抽取人孕中期羊水，體外分離、培養(yǎng)得到hAFCSCs，取第6 ～ 8 代細胞備用，同時提取總RNA 行RT-PCR 鑒定干細胞相關基因。取16 只6 ～ 8周齡Nod/Scid 小鼠，體重20 ～ 24 g，利用心肌毒素聯(lián)合X 線照射建立雙側(cè)脛骨前肌肌肉損傷模型，右側(cè)脛骨前肌內(nèi)注射hAFCSCs（3.3 × 107 個/mL）30 μL 作為實驗組，左側(cè)脛骨前肌同法注射等量完全培養(yǎng)液（含15%FBS、18%Chang B2%Chang C、1% 青鏈霉素、1%L- 谷氨酰胺的α-MEM 培養(yǎng)基）作為對照組。細胞移植術后2、4 周各處死小鼠8 只，取材行肝細胞生長因子受體（c-Met）、成肌調(diào)節(jié)因子（Myf-5）、層粘連蛋白（Laminin）、結(jié)蛋白（Desmin）與人特異性細胞核有絲分裂器（NuMa）組織免疫雙重熒光染色觀察。 結(jié)果 原代hAFCSCs 培養(yǎng)5 ～ 7 d 后可見細胞克隆形成；8 ～ 10 d 后可挑取細胞形態(tài)均一的克隆進行穩(wěn)定傳代，6 ～ 8 代后可獲得足量的干細胞。RT-PCR 檢測示所獲得hAFCSCs 體外擴增培養(yǎng)至第6 代仍表達干細胞相關基因。細胞移植術后2 周免疫雙重熒光染色示，實驗組脛骨前肌內(nèi)檢測到NuMa 表達，未檢測到hAFCSCs 表達肌源性細胞相關表型；術后4 周，實驗組脛骨前肌內(nèi)檢測到NuMa 表達，部分細胞同時表達NuMa和c-Met、Myf-5，部分肌纖維同時表達NuMa 和Desmin、Laminin。術后2、4 周，對照組脛骨前肌均未檢測到NuMa 表達。 結(jié)論 hAFCSCs 體外培養(yǎng)后移植到小鼠肌肉損傷部位，可參與損傷肌肉的修復過程。
目的 綜述骨骼肌組織工程支架材料的研究現(xiàn)狀，展望骨骼肌組織工程支架材料的發(fā)展方向。 方法 查閱近年來關于骨骼肌組織工程支架材料的相關文獻，并從骨骼肌組織工程支架材料的種類、特性、制備技術、生物相容性等方面進行回顧及綜合分析。 結(jié)果 骨骼肌組織工程支架材料種類繁多，大致可分為無機生物材料、生物可降解合成高分子材料、天然可降解生物材料和復合材料等4 種，對不同特性的支架材料，制備工藝不同，制備出的支架各有其結(jié)構和功能優(yōu)勢，可根據(jù)不同的研究需求進行選擇。 結(jié)論 復合材料的應用、復合支架的制備以及根據(jù)支架材料所需特定功能對其表面進行改性，是骨骼肌組織工程支架材料應用的發(fā)展方向。
目的 探討雷公藤多甙對異體神經(jīng)移植后靶肌肉萎縮和細胞凋亡的影響。 方法 20 只雄性Wistar大鼠為供體，體重200 ～ 250 g，取雙側(cè)坐骨神經(jīng)實驗。50 只雄性SD 大鼠為受體，體重200 ～ 250 g。將受體大鼠制備右側(cè)坐骨神經(jīng)10 mm 缺損模型后，隨機分為A、B、C、D、E 組（n=10）：A、B 組為新鮮異體神經(jīng)移植組，C、D 組為異體神經(jīng)雷公藤多甙預處理后再移植組，E 組為自體神經(jīng)移植組。神經(jīng)移植術后第2 天A、E 組予生理鹽水，B、D 組予雷公藤多甙5.0 mg/（kg·d），C 組予雷公藤多甙2.5 mg/（kg·d），時間均為5 周。術后3、6 周行大體觀察、骨骼肌HE 染色觀察，采用Image-Pro Plus v5.2 圖像處理系統(tǒng)分析肌纖維直徑，透射電鏡觀察骨骼肌超微結(jié)構，免疫組織化學檢測Bax、Bcl-2 表達，TUNEL 法檢測骨骼肌細胞凋亡。 結(jié)果 術后大鼠全部存活至實驗完成。大體觀察發(fā)現(xiàn)術后3 周各組大鼠脛骨前肌均不同程度萎縮；術后6 周A 組肌肉萎縮嚴重，其余各組肌肉萎縮呈好轉(zhuǎn)趨勢。A 組肌濕重、肌纖維直徑及Bcl-2 表達均顯著低于B、C、D、E 組（P lt; 0.01），B、C、D 組低于E 組（P lt; 0.05），B、C、D 組間比較差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）；A 組細胞凋亡指數(shù)和Bax 表達顯著高于B、C、D、E 組（P lt; 0.01），B、C、D 組高于E 組（P lt; 0.05），B、C、D 組間差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。術后3 周，光鏡下各組肌纖維變細；透射電鏡示肌質(zhì)網(wǎng)不同程度擴張。術后6 周，A 組光鏡示肌纖維間隙增寬、結(jié)締組織明顯增生；透射電鏡示肌小節(jié)結(jié)構消失，肌絲溶解嚴重和殘存“Z”線片段；其余組肌原纖維均排列整齊，明帶、暗帶和肌小節(jié)結(jié)構清晰。 結(jié)論 異體神經(jīng)移植術后予雷公藤多甙能減輕靶肌肉萎縮和細胞凋亡，供體神經(jīng)經(jīng)雷公藤多甙預處理能減少異體神經(jīng)移植術后受體免疫抑制劑用量。
目的 研究前臂骨骼肌亞部的形態(tài)學特征及肌構筑特點，探討肌亞部化移植的可行性，為臨床肌亞部移植手術提供形態(tài)學依據(jù)。 方法 第二軍醫(yī)大學解剖學教研室提供的冰凍上肢標本10 例20 側(cè)，均為男性，年齡26 ～ 39 歲。用改良Sihler 染色法對10 側(cè)橈側(cè)腕屈肌、尺側(cè)腕屈肌、橈側(cè)腕短伸肌、尺側(cè)腕伸肌、掌長肌、拇長屈肌及旋前圓肌進行肌內(nèi)神經(jīng)染色，以觀察肌內(nèi)神經(jīng)的分支分布。另取10 側(cè)標本，前臂上述肌肉沿肌腱長軸分為尺側(cè)半和橈側(cè)半，根據(jù)Wickiewicz 肌構筑研究方法測量其構筑學特征。 結(jié)果 各肌肉神經(jīng)在入肌前或入肌后發(fā)出2 支或以上神經(jīng)分支，分別進入尺側(cè)半和橈側(cè)半。各分支以肌內(nèi)腱板為界，兩側(cè)的肌內(nèi)神經(jīng)各支配一側(cè)肌肉。各肌肉所分成的兩亞部之間，生理橫切面積相比差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）；其中以尺側(cè)腕屈肌尺側(cè)半最大，掌長肌兩亞部及旋前圓肌尺側(cè)半較小。各肌肉兩亞部之間生理橫切面積與肌濕重比值，差異均無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。生理橫切面積與肌纖維長度比值，旋前圓肌尺側(cè)半、掌長肌兩亞部較高，尺側(cè)腕屈肌尺側(cè)半最小，與其余各亞部比較差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）；其余各亞部間差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。 結(jié) 論 前臂各肌可分為尺側(cè)半和橈側(cè)半兩亞部；各亞部的生理功能特征存在差異；對選擇和切取理想的部分肌肉移植，重建運動功能提供了理論依據(jù)。
目的 探討SD 大鼠骨骼肌脫細胞的優(yōu)化處理方法。 方法 SD 大鼠16 只，雌雄不限，體重180 ～ 200 g。取其中10 只大鼠36 條骨骼肌肌束，隨機分為3 組，正常組（A 組，n=4）：不作脫細胞處理；時間組（T 組）及濃度組（C 組）按照低滲- 去垢劑方法進行脫細胞處理（n=16），其中T 組十二烷基磺酸鈉（sodium dodecyl sulfate，SDS）濃度均為1.0%，根據(jù)處理時間不同（24、48、72、96 h），分為T1、T2、T3、T4 組（n=4）；C 組處理時間均為48 h，根據(jù)SDS濃度不同（0.5%、1.0%、1.5%、2.0%）分為C1、C2、C3、C4 組（n=4）。取各組材料行HE 染色觀察及羥脯氨酸含量檢測，并根據(jù)結(jié)果篩選最優(yōu)脫細胞處理條件。另取6 只SD 大鼠14 條完整肌束，隨機取7 條按照最優(yōu)條件進行脫細胞處理（實驗組），余7 條作為正常對照（對照組），對肌束行大體觀察、Masson 染色及生物力學檢測。 結(jié)果 HE 染色顯示T1、T2、C1、C2、C3 組肌纖維與A 組無差異；C4 組肌纖維部分脫除；T3 組肌纖維完全脫除且基膜結(jié)構保留完整；T4 組肌纖維完全脫除但基膜結(jié)構部分被破壞。羥脯氨酸含量檢測：A 組與C1、C2、C3、T1 及T2 組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）；A 組與C4、T3 和T4 組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）；C4 組與T3、T4 組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）；T3 組和T4 組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。根據(jù)HE 染色及羥脯氨酸含量檢測實驗結(jié)果篩選出最優(yōu)脫細胞處理條件為4℃、1.0% SDS、72 h。大體觀察：實驗組與對照組比較肌束顏色變淺，呈半透明狀，且結(jié)構相對較松散。Masson 染色觀察：實驗組膠原纖維連續(xù)性良好，較對照組結(jié)構疏松。生物力學測試：實驗組及對照組最大破壞載荷分別為（1.38 ± 0.35） N及（1.98 ± 0.77）N，最大拉伸位移分別為（3.19 ± 3.23）mm 及（3.56 ± 2.17）mm，兩組以上指標差異均無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。 結(jié)論 應用1.0% SDS，于4℃條件下對大鼠骨骼肌經(jīng)震蕩處理72 h 可得到完全去除肌纖維且ECM 保留完好的脫細胞基質(zhì)。