目的 通過研究局部應(yīng)用不同濃度NGF 對骨折愈合的影響，進一步探討NGF 促進骨折愈合的適宜濃度。 方法 成年雄性SD 大鼠75 只，體重（220.0 ± 2.5）g，隨機分成A、B、C、D、E 5 組（n=15）。實驗動物建立右脛骨中上段骨折模型，A、B、C、D 組分別于骨折斷端局部注射含0.006 48 × 10-2、0.032 40 × 10-2、0.162 00 × 10-2、0.810 00 ×10-2 μg/g NGF 的生理鹽水0.3 mL，每天1 次，連續(xù)注射7 d；E 組注射等量生理鹽水。各組分別于術(shù)后2、4、6 周各處死5只大鼠，并于骨折部位取材行大體、X 線片觀察、生化檢測及組織學(xué)觀察。處死大鼠前取大鼠眼球球后動、靜脈血液行血清ALP 活性測定。 結(jié)果 術(shù)后各時間點，大體觀察表明A、B、C、D 組局部新生硬組織大小、硬度、骨折斷端骨痂生長逐漸遞增，D 組明顯優(yōu)于A、B、C、E 組。X 線片示A、B、C、D 組骨折線逐漸模糊，鈣化面積逐漸增大，D 組骨痂鈣化明顯快于A、B、C 組和E 組。組織學(xué)觀察示D 組骨小梁質(zhì)量及成熟度明顯優(yōu)于A、B、C 組和E 組。D 組術(shù)后4、6 周成骨區(qū)灰度值、骨痂鈣含量，2、4 周骨痂組織濕重及2 周血清ALP 含量均顯著高于A、B、C 組和E 組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）。術(shù)后2、4 周，骨組織形態(tài)計量分析顯示各組新生骨骨小梁表面成骨細胞指數(shù)、骨小梁面積百分比和骨小梁寬度隨時間延長而減小；同一時間點A、B、C、D 組依次增大，均大于E 組，且差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）。 結(jié)論 局部應(yīng)用NGF 對大鼠骨折愈合有促進作用，高濃度的NGF（0.810 00 × 10-2 μg/g）對骨折愈合有顯著促進作用。
目的 骨再生過程包含一系列復(fù)雜的分子信號途徑，通過探討NF-κB 作為骨折愈合過程中“關(guān)鍵性激活點”的可能性，為基因治療骨折延遲愈合和骨不連提供實驗依據(jù)。 方法 取6 ～ 7 周齡Wistar 雄性大鼠33 只，體重180 ～ 220 g，隨機分為4 組。對照組（A 組，n=3）、單純NF-κB 抑制劑Bay 11-7082 處理組（B 組，n=6）：分別在大鼠右前肢橈骨中下段經(jīng)皮注射0.3 mL 生理鹽水或含50 μmol/L Bay 11-7082 的生理鹽水，每天1 次，持續(xù)至處死。單純骨折組（C 組，n=12）、Bay 11-7082 干預(yù)骨折組（D 組，n=12）：制備右側(cè)橈骨中下段骨折模型后，C 組不作任何處理，D 組處理方法同B 組。觀察大鼠一般情況，A 組于注射后7 d，B、C、D 組于注射后3、7 d 取標(biāo)本行ALP 活性、前列腺素E2（prostaglandins E2，PGE2）含量檢測以及Western blot 檢測NF-κB p65、BMP-7 和DNA 結(jié)合抑制因子2（inhibitor of DNA binding 2，Id2），并取C、D 組14、28 d 標(biāo)本行HE 染色觀察。 結(jié)果 各組大鼠均存活至實驗完成。注射后3、7 d B組ALP 活性及PGE2 含量與A 組比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）；C 組較A 組增高，D 組較A 組降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.01）。注射后3、7 d，各組骨折端組織中均見NF-κB p65、BMP-7、Id2 表達，B 組各因子表達水平與A 組比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）；C 組NF-κB p65 和BMP-7 蛋白表達水平較A 組增高，Id2 蛋白表達水平較A 組降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.01）；D 組NF-κB p65、BMP-7 蛋白表達水平較A 組降低，Id2 蛋白表達較A 組增高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.01）。組織學(xué)觀察示，注射后14、28 d C 組骨折端組織見大量骨性骨痂，而D 組28 d 時才見骨性骨痂。 結(jié) 論 NF- κB p65 可通過調(diào)控PGE2 分泌以及BMP-7 和Id2 蛋白表達促進大鼠橈骨骨折的早期愈合。
研究仙靈骨葆對卵巢切除大鼠股骨骨折愈合的作用。 方法 健康12 周齡雌性SD 大鼠40 只，體重（258 ± 14）g，隨機分為4 組，每組10 只。A 組僅作切口暴露腹腔；B 組僅切除卵巢；C、D 組切除卵巢同時制備右側(cè)股骨中段橫型骨折，髓內(nèi)針固定，術(shù)后分別采用生理鹽水及250 mg/（kg·d）仙靈骨葆灌胃。于術(shù)后即刻、1、2、3、4 及5 周測量A、B 組大鼠體重。術(shù)后5 周取各組右側(cè)股骨標(biāo)本，雙能 X 線骨密度儀測量股骨全長骨密度（total femur bone mineral density，tBMD）、遠1/3 段骨密度（distal femur bone mineral density，dBMD）和中1/3 段骨密度（middle femur bone mineral density，mBMD），并行C、D 組CR 攝片、HE 染色和免疫組織化學(xué)染色。 結(jié)果 B 組大鼠體重從第3 周開始顯著高于A組（P lt; 0.05），絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松模型制備成功。CR攝片示D組骨痂量相對較多，骨折線模糊；C組骨痂量較少，骨折線清晰。B 組tBMD 和dBMD 明顯低于A 組，D 組mBMD 明顯高于C 組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）；D 組tBMD 和dBMD較C 組有增高趨勢，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）。組織學(xué)觀察D 組與C 組比較，骨折端大部分骨性愈合，骨髓腔可見較多毛細血管植入。免疫組織化學(xué)染色示C、D組BMP-2 的積分吸光度（IA）值分別為2.236 6 ± 0.181 8 和3.727 3 ± 0.874 2，VEGF 的IA 值分別為2.835 5 ± 0.537 0 和3.839 6 ± 0.223 0，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）。 結(jié)論 仙靈骨葆可促進卵巢切除大鼠股骨骨折愈合，加快編織骨向板層骨的轉(zhuǎn)化，這可能與上調(diào)BMP-2 和VEGF 表達相關(guān)。
研究雷洛昔芬（raloxifene，RLX）對兔骨折愈合的影響。 方法 健康新西蘭大白兔80 只，雌性44 只，雄性36 只，體重1.9 ～ 2.1 kg。取72 只動物制備左前肢橈骨中段0.5 cm 骨缺損模型，按給藥不同分為4 組，每組18 只（雌性10 只，雄性8 只）。A、B、C組分別于術(shù)后第2 天給予7.5、15.0、30.0 mg（/ kg·d） RLX至50 d，D組不作處理。 剩余8 只不作任何處理，作為血清骨鈣素檢測正常對照。于術(shù)后不同時間點行骨密度、生物力學(xué)測定、X 線片組織學(xué)和免疫組織化學(xué)染色觀察，測定血清雌二醇、血漿膽固醇含量、血清骨鈣素水平及子宮干重/ 體重比。 結(jié)果 術(shù)后20 d 各組骨密度達峰值，A、B、C 組骨密度均高于D 組（P lt; 0.05）；但A、B、C 組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）。術(shù)后30、50 d，A、B、C 組最大破壞載荷和最大位移均較D 組大（P lt; 0.05） ；A、B、C 組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）。術(shù)后7、20、30 d，A、B、C 組骨折X 線評分較D 組高（P lt; 0.05）；50 d 時B、C 組與D 組間及A、C 組間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05），B、C組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）。術(shù)后30、50 d，A、B、C組骨折愈合處新骨面積百分比均高于D組（P lt; 0.05）。術(shù)后30 d，B、C 組骨折愈合處Col Ⅱ蛋白分泌較D 組增多（P lt; 0.05），A、D 組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）；50 d 時各組間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）。術(shù)后10、30 及50 d 各組血清骨鈣素水平均較正常對照動物明顯增高（P lt; 0.05）；B、C 組均較D 組高（P lt; 0.05）；A 組與D 組比較，A、B、C 組間比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）。術(shù)后30 d，各組血漿膽固醇含量無明顯變化（P gt; 0.05）；50 d 時A、B、C 組均明顯降低，與D 組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）。術(shù)后30、50 d，B、C 組血清雌二醇含量與D 組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05），余各組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）。術(shù)后30、50 d，B、C 組子宮干重/ 體重小于D 組（P lt; 0.05），A、D 組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）。 結(jié)論 以7.5 mg/（kg·d）劑量口服RLX 可安全有效促進兔橈骨缺損骨折模型骨折愈合。
【摘 要】 目的 綜述細胞因子在骨折愈合過程中的應(yīng)用與研究進展。 方法 廣泛查閱近年國內(nèi)外相關(guān)文獻進行回顧與綜合分析。 結(jié)果 在骨折愈合過程中有多種細胞因子參與并促進骨折愈合。 結(jié)論 目前從細胞水平方面的研究比較詳細，但在骨折愈合過程中，各細胞因子間的相互作用及作用機制尚未完全清楚，進一步明確作用機制，尤其是各細胞因子之間的相互作用是今后要研究的問題。
目的 通過研究大鼠股骨干骨折合并腦外傷時骨痂組織內(nèi)PDGF 表達水平的變化，探討腦外傷對骨折愈合的影響及作用機制。 方法 取12 周雄性SD 大鼠64 只，體重（356 ± 25）g，隨機分成8 組，每組8 只。A1、B1、C1、D1 組分別為骨折合并腦外傷1、2、3、4 周組，制作腦外傷和股骨干骨折模型；A2、B2、C2、D2 組分別為單純骨折1、2、3、4 周組，制作單純股骨干骨折模型作對照。各組攝CR 片后截取骨痂，行HE 染色觀察骨痂生長情況及其組織形態(tài)，免疫組織化學(xué)染色測定PDGF 表達，原位雜交檢測PDGF mRNA 表達。 結(jié)果 CR 片示在同一時間點A1、B1、C1、D1 組較A2、B2、C2、D2 組骨折端骨痂形成早，骨痂多，骨折愈合快。HE 染色示A1 組可見較多早期軟骨細胞、成纖維細胞，A2組骨折間隙可見成纖維細胞，僅夾雜有少量的早期軟骨細胞；B1 組骨折端有新生骨小梁長入，B2 組未見骨小梁形成；C1組骨折端有大量編織骨形成且骨小梁間有少量成熟軟骨細胞，C2 組少量骨小梁向骨折端長入；D1 組編織骨向板層骨轉(zhuǎn)化，D2 組骨折端為不成熟骨小梁。免疫組織化學(xué)染色和原位雜交實驗均可見成纖維細胞、間充質(zhì)細胞、血管內(nèi)皮細胞、早期軟骨細胞、成骨細胞、破骨細胞胞漿出現(xiàn)廣泛的強陽性反應(yīng)，A1、B1、C1、D1 組PDGF 和PDGF mRNA 陽性細胞百分?jǐn)?shù)均高于同一時間點A2、B2、C2、D2 組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）。 結(jié)論 腦外傷對骨折愈合有促進作用，可能與腦外傷后PDGF 表達水平升高有關(guān)。
目的 通過研究大鼠股骨干骨折合并腦外傷時骨痂組織內(nèi)骨形成蛋白2（bone morphogenetic protein 2,BMP2）表達水平的變化，探討腦外傷對骨折愈合的影響及作用機制。 方法 取12周雄性SD大鼠32只，體重368±25 g。隨機分成4組，每組8只：A組為骨折合并腦外傷1周組，B組為單純骨折1周組，C組為骨折合并腦外傷2周組，D組為單純骨折2周組。A、C組制作腦外傷和股骨干骨折模型，B、D組制作單純股骨干骨折模型作對照。各組攝X線片后截取骨痂，行HE染色觀察骨痂生長情況及其組織形態(tài)，免疫組織化學(xué)染色測定BMP-2表達，RT-PCR檢測BMP-2 mRNA水平。結(jié)果 X線片示A組骨折端有較少量骨痂形成，骨折線較清晰；B組骨折線清晰；C組骨折端有較多骨痂形成，骨折線已模糊；D組僅有少量骨痂形成，骨折線較清晰。HE染色A組可見較多早期軟骨細胞、成纖維細胞；B組骨折間隙可見成纖維細胞，僅夾雜有少量的早期軟骨細胞；C組骨折端有新生骨小梁長入；D組未見有骨小梁形成。免疫組織化學(xué)染色可見成纖維細胞、間充質(zhì)細胞、血管內(nèi)皮細胞、早期軟骨細胞、成骨細胞胞漿均出現(xiàn)廣泛的強陽性反應(yīng)，A組陽性細胞數(shù)量多于B組，并且顯色強；C組陽性細胞數(shù)量多于D組，并且顯色強。分析顯示A、C組平均陽性細胞百分?jǐn)?shù)為0.762%±0.052%、0.756%±0.079%，分別高于同一時間點B、D組的0.702%±0.052%、0.672%±0.044%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。RT- PCR分析顯示：A～D組骨痂BMP-2 mRNA 含量依次遞減，A、C組骨痂BMP-2 mRNA 含量為1.07±0.13、0.78±0.11，均顯著高于同一時間點B、D組的0.91±0.12、0.61±0.08，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。 結(jié)論 腦外傷對骨折愈合有促進作用，可能與腦外傷后BMP2表達水平升高有關(guān)。
目的 觀察苯妥英對骨折愈合的促進作用。方法 選擇40 例脛腓骨閉合性骨折患者，隨機分為兩組，治療組用苯妥英和接骨丹口服，對照組僅用接骨丹口服。術(shù)后分期觀察一般情況，縱向叩擊痛，骨折臨床愈合時間，X線片骨痂生長情況。結(jié)果 全部患者骨折均在傷后3個月內(nèi)愈合，但治療組縱向叩擊痛、臨床愈合時間及X線片骨痂生長均明顯優(yōu)于對照組。結(jié)論 口服苯妥英有明顯的促進骨折愈合的作用。由于中成藥接骨丹含有鈣成分，避免了單用苯妥英使血鈣降低的可能性。
為探討無名異接骨沖劑加速骨折愈合的作用機理，選用５５只新西蘭大白兔，隨機選擇５只作為正常組；另５０只在無菌條件下造成雙橈骨標(biāo)準(zhǔn)骨折模型。將５０只骨折兔隨機平均分為實驗組和對照組，實驗組用無名異接骨沖劑每天４ｇ／ｋｇ溶于２０ｍｌ蒸餾水中分早晚兩次灌胃；對照組用２０ｍｌ蒸餾水灌胃。于骨折后第１，２，３，４及５周用斷頸法每次每組處死５只兔，取骨痂進行抗骨形態(tài)發(fā)生蛋白（ＢＭＰ）單克隆抗體免疫組化染色，并用ＣＭＩＡＳ型圖像分析儀對ＢＭＰ含量進行定量分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：實驗組骨折局部ＢＭＰ含量明顯高于正常組（Ｐ＜０．０１）；第１，２周實驗組明顯高于對照組（Ｐ＜０．０１）；實驗組ＢＭＰ高峰出現(xiàn)在第２周，而對照組出現(xiàn)在第３周。認(rèn)為，無名異接骨沖劑能促進成骨細胞合成ＢＭＰ，使ＢＭＰ峰值提前，從而加速骨折愈合。
為了觀察苯妥英在骨折愈合中的作用，選用健康家兔７２只，手術(shù)造成雙側(cè)橈骨骨折模型。隨機分為三組：全身用藥組，局部用藥組及對照組。分別于骨折后第９，１６及３０ｄ處死動物，采用Ｘ線攝片、骨痂重量測定及組織學(xué)檢查等方法觀察苯妥英局部應(yīng)用和全身應(yīng)用在促進骨折愈合中的作用。結(jié)果表明：苯妥英局部應(yīng)用和全身應(yīng)用均有促進骨折愈合的作用。