目的 構(gòu)建含有人骨形成蛋白4(human bone morphogenetic protein 4，hBMP-4)的非復(fù)制型腺病毒表達(dá)載體pAdE/hBMP-4并檢測(cè)其表達(dá)。 方法 酶切質(zhì)粒pCS2(+)/hBMP-4獲得目的基因片段，克隆至真核表達(dá)載體pcDNA3.1(+)，再亞克隆至pShuttle-CMV，電轉(zhuǎn)化至含有pAdEasy-1骨架質(zhì)粒的E.coli BJ5183/p中進(jìn)行同源重組，重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞包裝成含有hBMP-4基因的非復(fù)制型腺病毒。病毒顆粒感染HEK293和HeLa細(xì)胞，提取總RNA和總蛋白，進(jìn)行RT-PCR和Western- blot檢測(cè)。結(jié)果 獲得了含有目的基因hBMP-4的非復(fù)制型腺病毒表達(dá)載體pAdE/hBMP-4，酶切鑒定提示構(gòu)建正確，RT-PCR檢測(cè)到hBMP-4基因的轉(zhuǎn)錄，Western- blot檢測(cè)到hBMP-4蛋白表達(dá)。 結(jié)論 將目的基因hBMP-4克隆至非復(fù)制型腺病毒表達(dá)載體中，為進(jìn)一步研究其在基因治療骨缺損中的應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。
目的系統(tǒng)評(píng)價(jià)BMP-4基因T538C多態(tài)性與非綜合征性唇腭裂（NSCL/P）的相關(guān)性。 方法計(jì)算機(jī)檢索The Cochrane Library、PubMed、EMbase、CBM、CNKI、VIP和WanFang Data數(shù)據(jù)庫(kù)，搜集BMP-4基因T538C多態(tài)性與NSCL/P相關(guān)性的病例-對(duì)照研究，檢索時(shí)限均為從建庫(kù)至2014年11月。由2位研究者按納入與排除標(biāo)準(zhǔn)獨(dú)立篩選文獻(xiàn)、提取資料并評(píng)價(jià)納入研究的偏倚風(fēng)險(xiǎn)后，采用RevMan 5.2軟件進(jìn)行Meta分析。 結(jié)果共納入6個(gè)病例-對(duì)照研究，包括926例病例和1 110例對(duì)照。Meta分析結(jié)果顯示：BMP-4基因T538C多態(tài)性與NSCL/P發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)無(wú)相關(guān)性［C vs. T：OR=1.14，95%CI（0.78，1.66）；CC vs. TT：OR=0.75，95%CI（0.50，1.11）；CC vs. TT：OR=1.53，95%CI（0.69，3.37）；CC vs. CT+TT：OR=1.80，95%CI（0.96，3.38）；CC +CT vs. TT：OR=0.90，95%CI（0.57，1.43）］。亞組分析結(jié)果顯示，BMP-4基因T538C多態(tài)性在亞洲人群可能增加NSCL/P發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)［C vs. T：OR=1.54，95%CI（1.26，1.87）；CC vs. TT：OR=2.91，95%CI（1.88，4.52）；CC vs. CT+TT：OR=2.99，95%CI（1.99，4.49）］，但在拉美人群可能降低NSCL/P發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)［C vs. T：OR=0.69，95%CI（0.50，0.96）；CT vs. TT：OR=0.52，95%CI（0.40，0.68）；CC+CT vs. TT：OR=0.52，95%CI（0.35，0.78）］。 結(jié)論現(xiàn)有證據(jù)表明，BMP-4基因T538C多態(tài)性可能增加亞洲人群NSCL/P發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，但可能降低拉美人群NSCL/P發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。受納入研究數(shù)量和質(zhì)量所限，上述結(jié)論尚需開(kāi)展更多研究予以驗(yàn)證。
目的觀察并初步探討骨形成蛋白4（BMP4）靶向調(diào)控SMAD9表達(dá)對(duì)Müller細(xì)胞遷移、活性氧（ROS）生成以及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）表達(dá)的影響。方法體外培養(yǎng)的Müller細(xì)胞分為正常對(duì)照組、BMP4組、BMP4+空載質(zhì)粒組（BMP4+NC組）、BMP4+SMAD9小干擾質(zhì)粒組（BMP4+siSMAD9）。BMP4組、BMP4+NC組、BMP4+siSMAD9組細(xì)胞培養(yǎng)基加入100 ng/ml BMP4誘導(dǎo)細(xì)胞24 h。其后，BMP4+NC組轉(zhuǎn)染空載質(zhì)粒；BMP4+siSMAD9組轉(zhuǎn)染SMAD9小干擾質(zhì)粒48 h。細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)測(cè)定BMP4對(duì)Müller細(xì)胞遷移的影響；流式細(xì)胞儀檢測(cè)BMP4對(duì)Müller細(xì)胞內(nèi)ROS生成的影響；蛋白質(zhì)免疫印跡法（Western blots）、實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（qPCR）檢測(cè)Müller細(xì)胞內(nèi)谷氨酰胺合成酶（GS）、膠質(zhì)纖維酸性蛋白（GFAP）蛋白、mRNA相對(duì)表達(dá)量；免疫熒光檢測(cè)Müller細(xì)胞內(nèi)VEGF的表達(dá)。多組間比較采用單因素方差分析。結(jié)果細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果顯示，BMP4+ siSMAD9組細(xì)胞遷移率較BMP4組、BMP4+NC組顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=68.319，P＜0.001）。流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示，BMP4+siSMAD9組細(xì)胞內(nèi)ROS水平較BMP4組、BMP4+NC組顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=52.158，P＜0.001）。Western blot、qPCR檢查結(jié)果顯示，BMP4+siSMAD9組細(xì)胞內(nèi)GS、GFAP蛋白（F=42.715、36.618）、mRNA相對(duì)表達(dá)量（F=45.164、43.165）較BMP4組、BMP4+NC組顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。免疫熒光檢測(cè)結(jié)果顯示，BMP4組、BMP4+NC組細(xì)胞內(nèi)VEGF熒光強(qiáng)度較BMP4+siSMAD9組顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=46.384，P＜0.05）。結(jié)論BMP4靶向調(diào)控SMAD9表達(dá)，可上調(diào)VEGF表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)Müller細(xì)胞遷移及ROS生成。
目的觀察氧化應(yīng)激條件下骨形成蛋白4（BMP4）對(duì)人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞（RPE）增殖和遷移的影響，初步探討其對(duì)RPE細(xì)胞上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）的作用。方法 將體外培養(yǎng)的人RPE細(xì)胞分為正常組、單純4-羥基壬烯醛（HNE）組（4-HNE組）、4-HNE+空白對(duì)照組（4-HNE+NC組）、4-HNE+小干擾BMP4組（4-HNE+siBMP4組）。噻唑藍(lán)比色法檢測(cè)4-HNE對(duì)RPE細(xì)胞增殖的影響；細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)測(cè)定4-HNE、BMP4對(duì)細(xì)胞遷移能力的影響；免疫熒光染色、蛋白質(zhì)免疫印跡法、實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)細(xì)胞中BMP4的表達(dá)；熒光顯微鏡拍照觀察siBMP4轉(zhuǎn)染效率；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞線粒體活性氧（MitoSOX）水平；免疫熒光實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)EMT標(biāo)志物鈣粘蛋白E（E-cadherin）和纖維連接蛋白（Fibronection）的表達(dá)。兩組間比較采用t檢驗(yàn)，三組間比較采用單因素方差分析。結(jié)果與正常組比較，4-HNE組細(xì)胞增殖、遷移能力明顯增強(qiáng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=21.619、24.469，P＜0.05）；細(xì)胞內(nèi)BMP4表達(dá)明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=19.441，P＜0.05）；BMP4 mRNA、蛋白相對(duì)表達(dá)量亦顯著升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=26.163、37.163，P＜0.05）。轉(zhuǎn)染siBMP4 24 h后，RPE細(xì)胞中BMP4轉(zhuǎn)染效率＞90%。與4-HNE組、4-HNE+NC組比較，正常組、4-HNE+siBMP4組細(xì)胞內(nèi)BMP4蛋白（F=27.241）、mRNA（F=36.943）相對(duì)表達(dá)量、細(xì)胞遷移率（F=46.723）、MitoSOX水平（F=39.721）顯著降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；上皮標(biāo)志物E-cadherin表達(dá)顯著增多，間充質(zhì)標(biāo)志物Fibronection表達(dá)顯著降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F= 51.722、45.153，P＜0.05）。結(jié)論 氧化應(yīng)激條件下BMP4抑制RPE增殖和遷移；BMP4參與誘導(dǎo)RPE細(xì)胞的EMT過(guò)程。