華西醫(yī)學(xué)期刊出版社
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找到 關(guān)鍵詞 包含"骨形成蛋白4" 4條結(jié)果
  • 表達(dá)人骨形成蛋白4的非復(fù)制型腺病毒的構(gòu)建與鑒定

    目的 構(gòu)建含有人骨形成蛋白4(human bone morphogenetic protein 4,hBMP-4)的非復(fù)制型腺病毒表達(dá)載體pAdE/hBMP-4并檢測(cè)其表達(dá)。 方法 酶切質(zhì)粒pCS2(+)/hBMP-4獲得目的基因片段,克隆至真核表達(dá)載體pcDNA3.1(+),再亞克隆至pShuttle-CMV,電轉(zhuǎn)化至含有pAdEasy-1骨架質(zhì)粒的E.coli BJ5183/p中進(jìn)行同源重組,重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞包裝成含有hBMP-4基因的非復(fù)制型腺病毒。病毒顆粒感染HEK293和HeLa細(xì)胞,提取總RNA和總蛋白,進(jìn)行RT-PCR和Western- blot檢測(cè)。結(jié)果 獲得了含有目的基因hBMP-4的非復(fù)制型腺病毒表達(dá)載體pAdE/hBMP-4,酶切鑒定提示構(gòu)建正確,RT-PCR檢測(cè)到hBMP-4基因的轉(zhuǎn)錄,Western- blot檢測(cè)到hBMP-4蛋白表達(dá)。 結(jié)論 將目的基因hBMP-4克隆至非復(fù)制型腺病毒表達(dá)載體中,為進(jìn)一步研究其在基因治療骨缺損中的應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

    發(fā)表時(shí)間:2016-09-01 09:22 導(dǎo)出 下載 收藏 掃碼
  • BMP-4基因T538C多態(tài)性與非綜合征性唇腭裂相關(guān)性的Meta分析

    目的系統(tǒng)評(píng)價(jià)BMP-4基因T538C多態(tài)性與非綜合征性唇腭裂(NSCL/P)的相關(guān)性。 方法計(jì)算機(jī)檢索The Cochrane Library、PubMed、EMbase、CBM、CNKI、VIP和WanFang Data數(shù)據(jù)庫(kù),搜集BMP-4基因T538C多態(tài)性與NSCL/P相關(guān)性的病例-對(duì)照研究,檢索時(shí)限均為從建庫(kù)至2014年11月。由2位研究者按納入與排除標(biāo)準(zhǔn)獨(dú)立篩選文獻(xiàn)、提取資料并評(píng)價(jià)納入研究的偏倚風(fēng)險(xiǎn)后,采用RevMan 5.2軟件進(jìn)行Meta分析。 結(jié)果共納入6個(gè)病例-對(duì)照研究,包括926例病例和1 110例對(duì)照。Meta分析結(jié)果顯示:BMP-4基因T538C多態(tài)性與NSCL/P發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)無(wú)相關(guān)性[C vs. T:OR=1.14,95%CI(0.78,1.66);CC vs. TT:OR=0.75,95%CI(0.50,1.11);CC vs. TT:OR=1.53,95%CI(0.69,3.37);CC vs. CT+TT:OR=1.80,95%CI(0.96,3.38);CC +CT vs. TT:OR=0.90,95%CI(0.57,1.43)]。亞組分析結(jié)果顯示,BMP-4基因T538C多態(tài)性在亞洲人群可能增加NSCL/P發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)[C vs. T:OR=1.54,95%CI(1.26,1.87);CC vs. TT:OR=2.91,95%CI(1.88,4.52);CC vs. CT+TT:OR=2.99,95%CI(1.99,4.49)],但在拉美人群可能降低NSCL/P發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)[C vs. T:OR=0.69,95%CI(0.50,0.96);CT vs. TT:OR=0.52,95%CI(0.40,0.68);CC+CT vs. TT:OR=0.52,95%CI(0.35,0.78)]。 結(jié)論現(xiàn)有證據(jù)表明,BMP-4基因T538C多態(tài)性可能增加亞洲人群NSCL/P發(fā)病風(fēng)險(xiǎn),但可能降低拉美人群NSCL/P發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。受納入研究數(shù)量和質(zhì)量所限,上述結(jié)論尚需開(kāi)展更多研究予以驗(yàn)證。

    發(fā)表時(shí)間:2016-10-02 04:54 導(dǎo)出 下載 收藏 掃碼
  • 骨形成蛋白4靶向調(diào)控SMAD9表達(dá)影響Müller細(xì)胞遷移和活性氧產(chǎn)生

    目的觀察并初步探討骨形成蛋白4(BMP4)靶向調(diào)控SMAD9表達(dá)對(duì)Müller細(xì)胞遷移、活性氧(ROS)生成以及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)表達(dá)的影響。方法體外培養(yǎng)的Müller細(xì)胞分為正常對(duì)照組、BMP4組、BMP4+空載質(zhì)粒組(BMP4+NC組)、BMP4+SMAD9小干擾質(zhì)粒組(BMP4+siSMAD9)。BMP4組、BMP4+NC組、BMP4+siSMAD9組細(xì)胞培養(yǎng)基加入100 ng/ml BMP4誘導(dǎo)細(xì)胞24 h。其后,BMP4+NC組轉(zhuǎn)染空載質(zhì)粒;BMP4+siSMAD9組轉(zhuǎn)染SMAD9小干擾質(zhì)粒48 h。細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)測(cè)定BMP4對(duì)Müller細(xì)胞遷移的影響;流式細(xì)胞儀檢測(cè)BMP4對(duì)Müller細(xì)胞內(nèi)ROS生成的影響;蛋白質(zhì)免疫印跡法(Western blots)、實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(qPCR)檢測(cè)Müller細(xì)胞內(nèi)谷氨酰胺合成酶(GS)、膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)蛋白、mRNA相對(duì)表達(dá)量;免疫熒光檢測(cè)Müller細(xì)胞內(nèi)VEGF的表達(dá)。多組間比較采用單因素方差分析。結(jié)果細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果顯示,BMP4+ siSMAD9組細(xì)胞遷移率較BMP4組、BMP4+NC組顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=68.319,P<0.001)。流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示,BMP4+siSMAD9組細(xì)胞內(nèi)ROS水平較BMP4組、BMP4+NC組顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=52.158,P<0.001)。Western blot、qPCR檢查結(jié)果顯示,BMP4+siSMAD9組細(xì)胞內(nèi)GS、GFAP蛋白(F=42.715、36.618)、mRNA相對(duì)表達(dá)量(F=45.164、43.165)較BMP4組、BMP4+NC組顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。免疫熒光檢測(cè)結(jié)果顯示,BMP4組、BMP4+NC組細(xì)胞內(nèi)VEGF熒光強(qiáng)度較BMP4+siSMAD9組顯著升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=46.384,P<0.05)。結(jié)論BMP4靶向調(diào)控SMAD9表達(dá),可上調(diào)VEGF表達(dá),進(jìn)而促進(jìn)Müller細(xì)胞遷移及ROS生成。

    發(fā)表時(shí)間:2023-09-12 09:11 導(dǎo)出 下載 收藏 掃碼
  • 骨形成蛋白4調(diào)控視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞遷移

    目的觀察氧化應(yīng)激條件下骨形成蛋白4(BMP4)對(duì)人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞(RPE)增殖和遷移的影響,初步探討其對(duì)RPE細(xì)胞上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)的作用。方法 將體外培養(yǎng)的人RPE細(xì)胞分為正常組、單純4-羥基壬烯醛(HNE)組(4-HNE組)、4-HNE+空白對(duì)照組(4-HNE+NC組)、4-HNE+小干擾BMP4組(4-HNE+siBMP4組)。噻唑藍(lán)比色法檢測(cè)4-HNE對(duì)RPE細(xì)胞增殖的影響;細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)測(cè)定4-HNE、BMP4對(duì)細(xì)胞遷移能力的影響;免疫熒光染色、蛋白質(zhì)免疫印跡法、實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)細(xì)胞中BMP4的表達(dá);熒光顯微鏡拍照觀察siBMP4轉(zhuǎn)染效率;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞線粒體活性氧(MitoSOX)水平;免疫熒光實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)EMT標(biāo)志物鈣粘蛋白E(E-cadherin)和纖維連接蛋白(Fibronection)的表達(dá)。兩組間比較采用t檢驗(yàn),三組間比較采用單因素方差分析。結(jié)果與正常組比較,4-HNE組細(xì)胞增殖、遷移能力明顯增強(qiáng),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=21.619、24.469,P<0.05);細(xì)胞內(nèi)BMP4表達(dá)明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=19.441,P<0.05);BMP4 mRNA、蛋白相對(duì)表達(dá)量亦顯著升高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=26.163、37.163,P<0.05)。轉(zhuǎn)染siBMP4 24 h后,RPE細(xì)胞中BMP4轉(zhuǎn)染效率>90%。與4-HNE組、4-HNE+NC組比較,正常組、4-HNE+siBMP4組細(xì)胞內(nèi)BMP4蛋白(F=27.241)、mRNA(F=36.943)相對(duì)表達(dá)量、細(xì)胞遷移率(F=46.723)、MitoSOX水平(F=39.721)顯著降低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);上皮標(biāo)志物E-cadherin表達(dá)顯著增多,間充質(zhì)標(biāo)志物Fibronection表達(dá)顯著降低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F= 51.722、45.153,P<0.05)。結(jié)論 氧化應(yīng)激條件下BMP4抑制RPE增殖和遷移;BMP4參與誘導(dǎo)RPE細(xì)胞的EMT過(guò)程。

    發(fā)表時(shí)間:2024-04-10 09:54 導(dǎo)出 下載 收藏 掃碼
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