目的 觀察色素上皮衍生因子（PEDF）對(duì)糖尿病大鼠視網(wǎng)膜Muuml;ller細(xì)胞谷氨酰胺合成酶（GS）表達(dá)的影響。方法 將Sprague-Dawley大鼠分為模型組、模型對(duì)照組、PEDF干預(yù)組（干預(yù)組）、干預(yù)對(duì)照組，每組均為8只大鼠。模型組、干預(yù)組、干預(yù)對(duì)照組大鼠鏈脲佐菌素誘導(dǎo)糖尿病大鼠模型。模型組大鼠不作任何干預(yù)，模型對(duì)照組為相同月齡的正常大鼠，干預(yù)組大鼠左眼玻璃體腔注射0.1 mu;g/mu;l的PEDF 10 mu;l，干預(yù)對(duì)照組大鼠左眼玻璃體腔注射相同容積的磷酸鹽緩沖液。采用免疫組織化學(xué)法和實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）法檢測(cè)視網(wǎng)膜GS和白細(xì)胞介素-1beta;（IL-1beta;）的表達(dá)變化。將視網(wǎng)膜Muuml;ller細(xì)胞置于高糖環(huán)境下培養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)干預(yù)組中加入100 ng/ml PEDF，空白對(duì)照組加入相同容積的培養(yǎng)液，24 h后通過蛋白質(zhì)免疫印跡（Western blot）法和實(shí)時(shí)熒光PCR法檢測(cè)PEDF對(duì)Muuml;ller細(xì)胞GS和IL-1beta;表達(dá)的改變。流式細(xì)胞儀錨定蛋白-異硫氰酸熒光素和碘化丙啶（Annexin V-FITC-PI）雙染色法檢測(cè)100ng/mlPEDF對(duì)高糖狀態(tài)下Muuml;ller細(xì)胞凋亡的影響。結(jié)果 實(shí)時(shí)熒光PCR法從基因水平和免疫組織化學(xué)法從蛋白質(zhì)水平檢測(cè)均顯示，相對(duì)于模型對(duì)照組大鼠，模型組大鼠視網(wǎng)膜GS表達(dá)降低，而IL-1beta;的表達(dá)升高，實(shí)時(shí)熒光PCR法：GS: t=4.23, P＜0.01；IL-1beta;: t=16.73,P＜0.01；免疫組織化學(xué)法：GS:t=5.13,P＜0.01；IL-1beta;: t=9.32, P＜0.01；干預(yù)組大鼠玻璃體腔注射PEDF 48 h后，IL-1beta;的表達(dá)下降，GS的表達(dá)升高，與干預(yù)對(duì)照組比較，實(shí)時(shí)熒光PCR法：GS: t=3.87,P＜0.01；IL-1beta;: t=3.61,P＜0.05；免疫組織化學(xué)法：GS:t=3.32, P＜0.05；IL-1beta;: t=2.63, P＜0.05。在高糖環(huán)境下，通過實(shí)時(shí)熒光PCR法和Western bot 法檢測(cè)均顯示PEDF可以下調(diào)IL-1beta;的表達(dá)，而上調(diào)GS的表達(dá)，與空白對(duì)照組比較，實(shí)時(shí)熒光PCR法：GS: t=2.89, P＜0.05；IL-1beta;: t=3.37, P＜0.05；Western blot：GS: t=2.66, P＜0.05；IL-1beta;: t=3.23, P＜0.05。流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示，PEDF可以抑制高糖環(huán)境下Muuml;ller細(xì)胞的凋亡，實(shí)驗(yàn)組凋亡率與空白對(duì)照組凋亡率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=3.21,P＜0.05)。結(jié)論 對(duì)于糖尿病大鼠，PEDF可能通過下調(diào)視網(wǎng)膜Muuml;ller細(xì)胞中IL-1beta;的表達(dá)來上調(diào)GS的表達(dá)，從而改善谷氨酸循環(huán)，抑制神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的死亡
目的 觀察轉(zhuǎn)化生長因子alpha;（TGFalpha;）對(duì)鼠視網(wǎng)膜Muuml;ller細(xì)胞谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體 (GLAST) mRNA、蛋白質(zhì)表達(dá)及攝取活性的調(diào)控作用。方法 取出生后7～10 d 的新生昆明小鼠視網(wǎng)膜組織，體外進(jìn)行Muuml;ller細(xì)胞的培養(yǎng)。同一原代細(xì)胞的第3～4代細(xì)胞培養(yǎng)后隨機(jī)分為2組：①TGFalpha;干預(yù)組：分別加入濃度為50、75、125、150 ng/ml的TGFalpha;，每種濃度3孔；②對(duì)照組：仍用含20%胎牛血清的Dulbeccon改良Eagle培養(yǎng)基培養(yǎng)。采用L-3H-谷氨酸攝取分析方法觀察不同濃度TGFalpha;對(duì)Muuml;ller細(xì)胞GLAST攝取活性的影響；逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)方法分析Muuml;ller細(xì)胞GLAST mRNA表達(dá)的差異；免疫組織化學(xué)染色方法檢測(cè)Muuml;ller細(xì)胞GLAST蛋白質(zhì)表達(dá)的變化。結(jié)果隨著TGFalpha;濃度的增加，L-3H-谷氨酸的攝取量及GLAST mRNA表達(dá)量均逐漸增加，TGFalpha;濃度為125 ng/ml時(shí)，L-3H-谷氨酸的攝取量達(dá)到最大值，為對(duì)照組的266%，同時(shí)GLASTmRNA表達(dá)量也達(dá)到最大值，為對(duì)照組的近4倍。免疫組織化學(xué)染色顯示當(dāng)TGFalpha;濃度為125 ng/ml時(shí)，干預(yù)組Muuml;ller細(xì)胞內(nèi)的GLAST蛋白表達(dá)量明顯高于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論 TGFalpha;可通過上調(diào)GLAST mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)增加視網(wǎng)膜Muuml;ller細(xì)胞谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體GLAST的攝取活性。
目的 研究腺苷（adenosine）對(duì)嘌呤受體P2X7和谷氨酸N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）受體激活誘導(dǎo)的大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞（RGC）死亡的神經(jīng)保護(hù)作用。 方法 （1）對(duì)新生Long-Evan大鼠進(jìn)行上丘注射熒光標(biāo)記物熒光金（aminostilbamidine）以標(biāo)記RGC，檢測(cè)P2X7激動(dòng)劑BzATP（50 mu;mol/L）、谷氨酸NMDA受體激動(dòng)劑（100 mu;mol/L）和腺苷（300 mu;mol/L）對(duì)體外培養(yǎng)RGC存活率的影響;（2）體外培養(yǎng)未經(jīng)熒光金標(biāo)記的新生大鼠RGC，以10 mu;mol/L 鈣離子（Ca2+ ）熒光染料Fura-2乙酸甲酯（Fura-2 Am）標(biāo)記后，利用Ca2+影像測(cè)定儀分別測(cè)定BzATP、NMDA和腺苷對(duì)RGC內(nèi)Ca2+濃度的影響。 結(jié)果 BzATP和NMDA均可引起體外培養(yǎng)的RGC死亡，BzATP在50 mu;mol/L、NMDA在100 mu;mol/L 濃度下，均殺死約30%RGC。而300 mu;mol/L 腺苷則可明顯減輕兩者對(duì)RGC的毒性作用，使RGC 存活率分別從68.9%plusmn;2.3%、69.9%plusmn;3.2% 提高至91.2%plusmn;3.5%（P＜0.001）、102.1%plusmn;3.9%（P＜0.001）。BzATP可引起RGC內(nèi)Ca2+持續(xù)升高，在50 mu;mol/L濃度下可使細(xì)胞內(nèi)Ca2+升高至（1183plusmn;109） nmol/L。在300 mu;mol/L腺苷作用下，BzATP介導(dǎo)的Ca2+升高幅度顯著降低，僅升高為（314plusmn;64）nmol/L（P＜0.001）。 結(jié)論 腺苷能阻止P2X7受體和NMDA受體激活誘導(dǎo)的RGC死亡和細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度升高，具有神經(jīng)保護(hù)作用。 （中華眼底病雜志，2007，23：133-136）
目的:探討雌激素對(duì)視網(wǎng)膜缺血再灌注（RIR）兔眼模型視網(wǎng)膜組 織中游離谷氨 酸濃度的影響。 方法:新西蘭白兔20只隨機(jī)分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，每組 各10只兔。各組動(dòng)物在行雙眼 閃光視網(wǎng)膜電圖(FERG)后，右眼應(yīng)用前房灌注加壓法使前房?jī)?nèi)壓力升高至120 mm Hg（1 mm Hg=0.133 kPa），維持60 min后再灌注,建立RIR模型；左眼為空白對(duì)照眼。實(shí)驗(yàn)組在前房 灌注前 2 h皮下注射beta;-雌二醇(0.1mg/kg)，對(duì)照組給予等量生理鹽水皮下注射。再灌注即 時(shí)及4、 8、24 h后分別記錄各組右眼FERG,與缺血前FERG比較,觀察a、b波振幅變化。最后一次ERG檢 測(cè)后，立即摘除所有兔雙眼眼球，采集視網(wǎng)膜組織,研磨及蛋白沉淀后，使用日立L-8800氨 基酸自動(dòng)分析儀檢測(cè)游離氨基酸濃度。 結(jié)果:兩組兔右眼在結(jié)束造模后 即時(shí)FERG圖形均呈直線；對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組再灌注各時(shí)段FERG a波振幅差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意 義(t=1.357，0.798，0.835；P＞0.05)；實(shí)驗(yàn)組各時(shí)段b波振幅明顯高于對(duì)照 組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=4.447，2.188，3.106；P＜0.05)。兔視網(wǎng)膜組織中 游離谷氨酸濃度分別為： 對(duì)照 組右眼（0.265plusmn;0.014） g/L，左眼（0.207plusmn;0.013） g/L；實(shí)驗(yàn)組右眼（0.231plusmn;0 .007） g/L，左眼（0.203plusmn;0.014） g/L，兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=50.807,P= 0.000)；對(duì)照組雙眼間、實(shí)驗(yàn)組雙眼間以及右眼兩組間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000 )；兩組左眼間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＝0.505)。 結(jié)論:雌激素可 以阻止RIR眼視網(wǎng)膜組織中游離谷氨酸濃度升高， 從而保護(hù)視網(wǎng)膜組織。
目的 評(píng)價(jià)大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)元（RNs）和Muuml;ller細(xì)胞中熱休克蛋白（HSP）70的誘導(dǎo)表達(dá)，及其對(duì)低糖和谷氨酸損傷的視網(wǎng)膜神經(jīng)元的保護(hù)作用。 方法 大鼠RNs和Muuml;ller細(xì)胞體外培養(yǎng)體系分別經(jīng)過熱休克處理（42℃下1 h）及免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)HSP70表達(dá)的時(shí)間經(jīng)過；并對(duì)RNs進(jìn)行低糖(0.56 mmol/L葡萄糖，作用6 h)和谷氨酸(100 mu;mol/L,作用 6 h)興奮毒性損傷，四唑鹽（MTT）比色法評(píng)價(jià)細(xì)胞存活能力，同時(shí)用HSP70抗體阻斷其表達(dá)。 結(jié)果 熱休克后大鼠RNs和Muuml;ller細(xì)胞中HSP70高效表達(dá)；經(jīng)熱休克預(yù)處理，RNs在低糖和谷氨酸鹽損傷后的細(xì)胞活力明顯提高，該現(xiàn)象可被HSP70抗體阻斷。 結(jié)論 熱休克能夠誘導(dǎo)RNs和Muuml;ller細(xì)胞高效表達(dá)HSP70，從而增強(qiáng)RNs對(duì)低糖和谷氨酸興奮毒性損傷的耐受能力。 (中華眼底病雜志,2005,21:110-113)
目的 了解高眼壓狀態(tài)下視網(wǎng)膜N-甲基-D-天門冬氨酸受體(N-methyl-D-aspartate receptor，NMDAR)的功能亞單位NMDAR1基因mRNA表達(dá)的情況。 方法 采用逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng) (reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR)、beta;-肌動(dòng)蛋白（beta;-actin）作內(nèi)對(duì)照對(duì)高眼壓模型眼視網(wǎng)膜內(nèi)NMDAR1基因的mRNA進(jìn)行半定量分析。16只大白兔的26只眼分成3組。實(shí)驗(yàn)組10只兔10只眼，前房穿刺生理鹽水高壓60 mm Hg（1 mm Hg=0．133 kPa）灌注，持續(xù)4 h。陽性對(duì)照組1 0只兔10只眼，為實(shí)驗(yàn)組的對(duì)側(cè)眼，用實(shí)驗(yàn)組相同的方法以20 mm Hg的壓力前房灌注持續(xù)4 h 作陽性對(duì)照。正常對(duì)照組6只兔6只眼，不作眼球灌注處理。 結(jié)果 實(shí)驗(yàn)組的高眼壓灌注眼與陽性對(duì)照眼NMDAR1的mRNA的水平無明顯差異 (Pgt;0.05)。 結(jié)論 急性高眼壓未改變兔視網(wǎng)膜NMDAR1基因的mRNA表達(dá)水平。 (中華眼底病雜志,2001,17:50-51)
目的 探討谷氨酸對(duì)視網(wǎng)膜內(nèi)層神經(jīng)細(xì)胞(inner stratum retinal neurons, ISRN)的影響及其毒性作用的量效關(guān)系。 方法 將30只新生小鼠神經(jīng)層視網(wǎng)膜組織塊均勻接種于2塊24孔培養(yǎng)板(48孔)，將其 分成正常對(duì)照組、谷氨酸作用24 h組和正常培養(yǎng)18 h后，谷氨酸繼續(xù)作用6 h組。培養(yǎng)24 h 后， 將視網(wǎng)膜組織塊常規(guī)進(jìn)行切片，HE染色，油鏡下觀察視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層(retinal ganglion cells, RGCs)和內(nèi)核層(inner nuclear layer, INL)的細(xì)胞形態(tài)，并分別計(jì)算細(xì)胞形態(tài)正常的RGCs數(shù)和INL細(xì)胞數(shù) 。 結(jié)果 視網(wǎng)膜組織正常培養(yǎng)24 h后，ISRN(RGCs和INL細(xì)胞)中可見少數(shù)細(xì)胞胞核固縮和壞死。谷氨酸作用24 h組：當(dāng)谷氨酸濃度為2、4 mmol時(shí)，ISRN的細(xì)胞形態(tài)與對(duì)照組之間差異無顯著性意義(Pgt;0.05)；谷氨酸濃度ge;6 mmol，視網(wǎng)膜內(nèi)層形態(tài)正常的神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量明顯較對(duì)照組減少(Plt;0.05)，且隨著谷氨酸濃度的增加，其數(shù)量逐漸減少。谷氨酸后6 h作用組：谷氨酸濃度為6 mmol時(shí)，INL中形態(tài)正常的細(xì)胞數(shù)量明顯較對(duì)照組減少(P lt;0.05)，而RGCs層中形態(tài)正常的細(xì)胞數(shù)量與對(duì)照組之間差異無顯著性的意義(Pgt;0.0 5)； 谷氨酸濃度ge;8 mmol時(shí)，RGCs層和INL中形態(tài)正常的細(xì)胞數(shù)量均較對(duì)照組明顯減少(Plt;0. 05)。 結(jié)論 谷氨酸對(duì)離體視網(wǎng)膜內(nèi)層神經(jīng)細(xì)胞具有毒性作用,其毒性作用呈劑量依賴性。 (中華眼底病雜志,2001,17:311-314)
目的 探討血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、谷氨酸與-gamma;-氨基丁酸(gamma;- aminobutyric acid,GABA)在增生性糖尿病視網(wǎng)膜病變(proliferative diabetic retinopathy,PDR)新生血管形成中的作用。 方法 用定量雙夾心酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)25例PDR患者27只眼玻璃體VEGF含量，用高效液相色譜法檢測(cè)其玻璃體氨基酸含量,并與14例特發(fā)性黃斑裂孔患者14只眼中玻璃體VEGF、谷氨酸和GABA的含量相比較。分析玻璃體VEGF含量與氨基酸含量的相關(guān)關(guān)系。 結(jié)果 PDR組患者玻璃體VEGF含量(中位數(shù)0.41 ng/ml,四分位間距0.54 ng/ml)顯著高于對(duì)照組(中位數(shù)0.017 ng/ml,四分位間距0.01 ng/ml)(Plt;0.001)。PDR組患者玻璃體谷氨酸含量[(11.7plusmn;3.0) mu;mol/L]和GABA含量[(7.2plusmn;3.9)mu;mol/L]亦顯著高于對(duì)照組谷氨酸含量[(5.8plusmn;0.7)mu;mol/L]和GABA含量[(3.3plusmn;2.9)mu;mol/L](Plt;0.05)。 相關(guān)分析表明，谷氨酸、GABA均與VEGF含量有顯著正相關(guān)關(guān)系。 結(jié)論 PDR患者玻璃體谷氨酸、GABA含量增高表明有視網(wǎng)膜缺血，它們與VEGF含量的正相關(guān)關(guān)系為視網(wǎng)膜缺血誘導(dǎo)新生血管產(chǎn)生提供了生物化學(xué)依據(jù),也為PDR的治療提供了新思路。 (中華眼底病雜志,2000,16:162-165)