目的研究BMP-14與軟骨細(xì)胞共同誘導(dǎo)脂肪來(lái)源干細(xì)胞（adipose-derived stem cells，ADSCs）向軟骨細(xì)胞分化是否具有協(xié)同作用，優(yōu)化軟骨組織工程種子細(xì)胞來(lái)源。 方法取2只雄性新西蘭大白兔（體重1.5、2.0 kg）關(guān)節(jié)軟骨和皮下脂肪組織，分離、培養(yǎng)軟骨細(xì)胞和ADSCs，取第3代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。對(duì)ADSCs行成骨（茜素紅染色）、成軟骨（阿利新藍(lán)染色）和成脂（油紅O染色）誘導(dǎo)鑒定。測(cè)定Ad-巨細(xì)胞病毒-BMP-14-內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)-人源化海腎綠色熒光蛋白1轉(zhuǎn)染的最佳感染復(fù)數(shù)（multiplicity of infection，MOI）并以其轉(zhuǎn)染ADSCs。實(shí)驗(yàn)分為5組：A組，采用Transwell小室將BMP-14轉(zhuǎn)染的ADSCs與軟骨細(xì)胞共培養(yǎng)（1∶1）；B組，采用Transwell小室將未轉(zhuǎn)染的ADSCs與軟骨細(xì)胞共培養(yǎng)（1∶1）；C組，單純BMP-14轉(zhuǎn)染的ADSCs培養(yǎng)；D組，單純軟骨細(xì)胞培養(yǎng)；E組，單純ADSCs培養(yǎng)。培養(yǎng)3周后，取細(xì)胞采用阿利新藍(lán)法檢測(cè)糖胺聚糖（glycosaminoglycan，GAG）含量，Western blot檢測(cè)BMP-14和Ⅱ型膠原蛋白表達(dá)，RT-PCR檢測(cè)Sox-9基因表達(dá)。 結(jié)果培養(yǎng)細(xì)胞經(jīng)鑒定提示為ADSCs。倒置熒光顯微鏡觀察示，MOI值為150時(shí)轉(zhuǎn)染效果最好。A、C組GAG含量、BMP-14和Ⅱ型膠原蛋白表達(dá)以及Sox-9基因表達(dá)均明顯高于其余3組，A組高于C組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）；B、D組均明顯高于E組（P lt; 0.05），B、D組間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。 結(jié)論BMP-14與軟骨細(xì)胞能共同誘導(dǎo)并促進(jìn)兔ADSCs向軟骨細(xì)胞分化，兩者之間具有協(xié)同作用。
目的 比較腺病毒載體Ad-BMP-2-內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)（internal ribosome entry site，IRES）-低氧誘導(dǎo)因子1α突變型（hypoxia inducible factor 1αmu，HIF-1αmu）與Ad-巨細(xì)胞病毒（cytomegalovirus，CMV）-BMP-2-IRES-人源化海腎綠色熒光蛋白1（human renilla reniformis green fluorescent protein 1，hrGFP-1）分別轉(zhuǎn)染BMSCs后的成骨效應(yīng)，優(yōu)化成骨細(xì)胞種子來(lái)源。 方法取1月齡新西蘭大白兔骨髓分離培養(yǎng)BMSCs。取第3代BMSCs進(jìn)行病毒液轉(zhuǎn)染，根據(jù)轉(zhuǎn)染病毒液不同將實(shí)驗(yàn)分為4組，A、B、C組分別采用感染復(fù)數(shù)（multiplicity of infection，MOI）為50、100、150和200的Ad-BMP-2-IRES-HIF-1αmu、Ad-CMV-BMP-2-IRES-hrGFP-1、Ad-CMV-IRES-hrGFP-1（空腺病毒載體）轉(zhuǎn)染細(xì)胞，D組為未被轉(zhuǎn)染的BMSCs。選擇最佳MOI值進(jìn)行觀察。轉(zhuǎn)染后采用免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)BMP-2表達(dá)，Western blot檢測(cè)BMP-2和HIF-1α蛋白表達(dá)，ALP活性測(cè)定和鈣結(jié)節(jié)茜素紅染色檢測(cè)細(xì)胞成骨分化能力。 結(jié)果A、B、C組最佳MOI值分別為200、150和100。免疫組織化學(xué)染色示，A、B組BMP-2染色呈陽(yáng)性，C、D組呈陰性；A組陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯多于B組（P lt; 0.05）。Western blot檢測(cè)示，A、B組BMP-2蛋白表達(dá)明顯高于C、D組（P lt; 0.05），A組高于B組（P lt; 0.05）；A組HIF-1α蛋白表達(dá)明顯高于其余3組（P lt; 0.05），其余3組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。A、B組ALP活性明顯高于C、D組（P lt; 0.05），A組高于B組（P lt; 0.05）。茜素紅染色示，A、B組可見(jiàn)明顯鈣結(jié)節(jié)，C、D組未見(jiàn)鈣結(jié)節(jié)形成；且A組鈣結(jié)節(jié)數(shù)量多于B組（P lt; 0.05）。 結(jié)論單載體雙基因Ad-BMP-2-IRES-HIF-1αmu與單載體單基因Ad-CMV-BMP-2-IRES-hrGFP-1分別轉(zhuǎn)染兔BMSCs后，前者BMP-2和成骨效應(yīng)表達(dá)均高于后者。