目的 研究神經(jīng)營養(yǎng)因子 3(neurotrophic factor 3,NT-3)基因修飾的SC 對坐骨神經(jīng)缺損后促進(jìn)神經(jīng)再生的作用。 方法 取3 d 齡Wistar 幼鼠雙側(cè)坐骨神經(jīng),采用雙酶消化法及貼壁法分離、培養(yǎng)及純化SC。取第3 代SC 進(jìn)行實驗。采用陽離子脂質(zhì)體將NT-3 質(zhì)粒轉(zhuǎn)入SC,于轉(zhuǎn)染后1、2、4、8 周ELISA 雙抗體夾心法測定NT-3 蛋白的表達(dá);采用DNA 酶切鑒定轉(zhuǎn)染后NT-3 的DNA;免疫組織化學(xué)S-100 染色檢測轉(zhuǎn)染色前后SC 純度。分別將3 × 107 個/mLSC、3 × 107 個/mL NT-3 基因修飾SC、NT-3 基因與等體積的ECM 凝膠混合,取20 μL 注入長15.0 mm、內(nèi)徑1.5 mm、壁厚0.3 mm 的PLGA 管,制備神經(jīng)移植復(fù)合體。取48 只成年SD 大鼠,雌雄不拘,切除右側(cè)坐骨神經(jīng)10 mm 制備神經(jīng)缺損模型。根據(jù)橋接神經(jīng)缺損的不同神經(jīng)復(fù)合體隨機(jī)分為4 組(n=12)。A 組:PLGA 管含ECM 凝膠;B 組:PLGA 管含SC及ECM凝膠;C 組:PLGA 管含NT-3 基因及ECM凝膠;D 組:PLGA 管含NT-3 基因修飾SC 和ECM凝膠。術(shù)后2、4、6、8、12 周觀察各組大鼠一般情況,術(shù)后12 周大體觀察神經(jīng)再生情況,行神經(jīng)電生理檢測、組織學(xué)及透射電鏡觀察。 結(jié)果 轉(zhuǎn)染后1、2、4、8 周NT-3 蛋白表達(dá)量分別為0.39 ± 0.25、0.76 ± 0.22、1.06 ± 0.38、1.61 ± 0.35,比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P lt; 0.05)。轉(zhuǎn)染后NT-3 的DNA酶切鑒定結(jié)果與NT-3 基因片段相符。轉(zhuǎn)染前后SC 純度分別為94.7% ± 2.1%及95.6% ± 2.5%,比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P lt; 0.05)。動物實驗觀察,術(shù)后2 周各組大鼠足底開始紅腫、潰瘍;A組潰瘍逐漸加重,無愈合;B、C 組足底潰瘍8 周開始愈合,但12 周仍殘留創(chuàng)面;D 組6 周潰瘍開始愈合,12 周已完全愈合。術(shù)后12 周大體觀察A 組再生神經(jīng)蒼白,粗細(xì)不均勻,彈性差;B、C 組再生神經(jīng)呈乳白色,質(zhì)韌,彈性可;D 組再生神經(jīng)呈淡紅色,粗細(xì)均勻,彈性佳。B、C、D 組肌肉動作電位潛伏期、波幅、運(yùn)動神經(jīng)傳導(dǎo)速度及再生神經(jīng)軸突數(shù)、髓鞘厚度、神經(jīng)纖維直徑、神經(jīng)組織面積百分比與A 組比較,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P lt; 0.05);B、C 組各指標(biāo)與D 組比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P lt; 0.05);B、C 組比較, 差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P gt; 0.05)。術(shù)后12 周透射電鏡觀察示D 組見有髓神經(jīng)髓鞘成熟最好,板層清晰規(guī)則;B、C 組神經(jīng)髓鞘成熟次之;A 組最差。 結(jié)論 NT-3 基因修飾的SC 與PLGA 管構(gòu)建的神經(jīng)移植復(fù)合體能促進(jìn)大鼠坐骨神經(jīng)缺損再生,其再生效果明顯優(yōu)于單純NT-3 基因和SC。