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非接觸性共培養(yǎng)BMSCs和髓核細(xì)胞時間差異性的實(shí)驗(yàn)研究

目的 探討在非接觸性共培養(yǎng)環(huán)境下，BMSCs定向分化為類髓核細(xì)胞在共培養(yǎng)時間上的差異性，尋找適合體內(nèi)移植的最佳時間。 方法取6只8周齡健康新西蘭大白兔（體重1.5～2.0 kg）骨髓及椎間盤髓核，分離、培養(yǎng)BMSCs和髓核細(xì)胞并進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定。取原代髓核細(xì)胞和第2代生長良好的BMSCs體外建立非接觸性共培養(yǎng)模型。觀察共培養(yǎng)后第1、3、5代BMSCs的形態(tài)學(xué)變化并繪制生長曲線；RT-PCR檢測共培養(yǎng)5、10、15 d BMSCsⅡ型膠原和蛋白聚糖mRNA表達(dá)；Western blot檢測共培養(yǎng)5、10、15、20、25、30 d BMSCs Ⅱ型膠原和蛋白聚糖蛋白的表達(dá)。 結(jié)果BMSCs相對特異性標(biāo)記物CD44、CD90表達(dá)陽性，造血細(xì)胞表面標(biāo)記物CD34、CD45表達(dá)陰性。髓核細(xì)胞Ⅱ型膠原、蛋白聚糖表達(dá)陽性。共培養(yǎng)后2周BMSCs形態(tài)發(fā)生明顯變化，呈多角形、不規(guī)則形；共培養(yǎng)后3代內(nèi)，BMSCs生長速度無明顯差異，隨著傳代次數(shù)增加，細(xì)胞增殖明顯減慢。RT-PCR檢測示共培養(yǎng)后10、15 d BMSCs蛋白聚糖和Ⅱ型膠原mRNA表達(dá)明顯高于5 d時（P lt; 0.05），而10 d與15 d時差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）。Western blot檢測示共培養(yǎng)后隨時間延長細(xì)胞表達(dá)Ⅱ型膠原和蛋白聚糖蛋白逐漸增加，5、10、15 d間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05），15 d后各時間點(diǎn)間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）。 結(jié)論在非接觸性共培養(yǎng)環(huán)境下，BMSCs在髓核細(xì)胞誘導(dǎo)下可向類髓核細(xì)胞分化，表達(dá)Ⅱ型膠原和蛋白聚糖，在共培養(yǎng)15 d時達(dá)到相對穩(wěn)定，此時較適合進(jìn)行體內(nèi)移植。