目的 構建攜帶反義二型基質金屬蛋白酶（MMP2）基因的重組腺病毒。方法 從新鮮肝癌組織中提取總RNA,用RT-PCR法合成MMP2 cDNA序列中5′端轉錄起始位點附近長約500 bp的基因片段，將此片段反義克隆到腺病毒載體(AdEasy)系統(tǒng)的多克隆位點，經轉染293細胞生成攜帶反義MMP2基因的重組腺病毒AdMMP2AS。結果 成功構建并包裝攜帶反義MMP2基因片段的重組腺病毒Ad-MMP2AS，病毒滴度達1×108/ml。結論 構建的重組腺病毒Ad-MMP2AS可望能有效地將反義MMP2基因片段導入人肝癌細胞株，為進一步研究肝癌浸潤和轉移機理以及探討抑制肝癌浸潤和轉移的方法提供實驗基礎。
目的探討β-氨基丙腈（β-aminopropionitrile，BAPN）聯(lián)合血管緊張素Ⅱ（Angiotensin Ⅱ，Ang-Ⅱ）誘導建立SD大鼠主動脈夾層（aortic dissection，AD）模型的最佳給藥組合及其并發(fā)癥。 方法選取3周齡雄性SD大鼠42只，使用完全隨機法將其分為7組，即A組（0.25% BAPN組）、B組（0.40% BAPN組）、C組（0.80% BAPN組）、D組［1 g/（kg·d）BAPN組］、E組［1 g/（kg·d）BAPN+1 μg/（kg·min）生理鹽水組］、F組［1 g/（kg·d）BAPN+1 μg/（kg·min）Ang-Ⅱ組］、G組（對照組），每組6只。干預周期為4周（E、F組為4周+5 d），實驗過程中如有大鼠死亡則立即解剖，干預結束后，存活大鼠通過給予戊巴比妥鈉處死，分離、留取全程主動脈。通過蘇木精-伊紅染色從病理形態(tài)學特征上觀察主動脈變化。 結果BAPN干預4周后各干預組生存率差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；植入微滲泵5 d后，E組大鼠生存率高于F組（P=0.008），AD發(fā)生率低于F組（P=0.001）；BAPN可影響大鼠的飲食量和飲水量；BAPN干預4周后G組大鼠體重大于各干預組（P＜0.05）；BAPN聯(lián)合Ang-Ⅱ可使大鼠主動脈中膜增厚、彈性纖維斷裂、排列紊亂，伴炎癥細胞浸潤，符合AD病理形態(tài)學改變；BAPN還可對精神狀態(tài)和胃腸道造成影響。 結論通過1g/（kg·d）BAPN聯(lián)合1 μg/（kg·min）Ang-Ⅱ的給藥組合可穩(wěn)定地建立大鼠AD模型，這將對深入研究AD發(fā)病機制和治療靶點提供一種穩(wěn)定的載體，但該過程中出現(xiàn)的并發(fā)癥是一種不穩(wěn)定因素，如何平衡AD模型建立過程中BAPN對其他組織器官的影響還有待進一步研究。
目的構建攜帶反義多藥耐藥相關蛋白(MRP)的重組腺病毒并轉染人肝癌耐藥細胞株，為肝癌耐藥的基因治療提供實驗研究基礎。 方法將MRP基因片段反向克隆到腺病毒載體質粒pAdTrackCMV上，與骨架質粒在細菌體內進行同源重組，經293細胞包裝、擴增后得到攜帶反義MRP的重組腺病毒AdEasyGFPASmrp，再用其轉染人肝癌耐藥細胞株SMMC7721/ADM。結果成功地構建了攜帶反義MRP的重組腺病毒，病毒滴度為2.5×109 efu/ml，多重感染復數(shù)為100時對SMMC7721/ADM細胞株轉導效率可達90%以上。結論構建的重組腺病毒AdEasyGFPASmrp可望有效地將反義MRP導入人肝癌耐藥細胞株，為肝癌耐藥機理及其逆轉方式的研究提供實驗基礎。
目的 探討鋅指蛋白A20對同種異體大鼠30%小體積移植肝再生與排斥及受體存活時間的影響。方法 采用急性排斥組合DA (RT1a)大鼠→Lewis (RT1l)大鼠建立同種異體大鼠30%小體積肝移植模型。 75只大鼠均分為A20腺病毒組（A20組）、對照空腺病毒組（rAdEasy組）及對照生理鹽水組（PS組）3組。 供肝切取后采用離體門靜脈灌注法轉基因干預，肝臟灌洗后移植。 觀察受體存活時間及排斥反應，檢測移植肝A20表達、肝細胞再生與凋亡、肝血竇內皮細胞(LSECs)中NF-κB活性與ICAM-1 mRNA表達、移植肝浸潤單核細胞（LIMCs）總數(shù)及自然殺傷(NK)細胞和自然殺傷T（NKT）細胞數(shù)以及血清IFN-γ 水平。 結果 A20組受體大鼠存活時間長于PS組大鼠和rAdEasy組大鼠(P=0.001 8)，而PS組大鼠存活時間又長于rAdEasy組大鼠(P=0.001 8)。 A20促進小體積移植肝再生，肝移植后4 d A20組大鼠肝細胞BrdU標記指數(shù)高于PS組大鼠和rAdEasy組大鼠(P＜0.01)； A20組大鼠肝細胞凋亡指數(shù)低于PS組大鼠和rAdEasy組大鼠(P＜0.01)。 肝移植術后4 d，組織學檢測結果顯示A20組大鼠移植肝有少量細胞浸潤，呈輕度排斥； 而PS 組和rAdEasy組大鼠移植肝有大量細胞浸潤，呈重度排斥。 A20能抑制移植后早期(1 d) LSECs 中NF-κB活性和 ICAM-1 mRNA 表達。 流式細胞術檢測結果顯示A20能下調移植肝LIMCs數(shù)，包括下調NK和NKT 亞群細胞數(shù)，并下調血清IFN-γ 水平(P＜0.05)。 結論 A20能有效促進同種異體大鼠30%小體積移植肝再生，抑制排斥并延長受體存活時間，其功效可能與抑制LSECs中NF-κB活性、抑制LIMCs浸潤及減少NK 細胞和NKT 細胞浸潤入肝以及抑制肝細胞凋亡有關。