目的 觀察經蛛網膜下腔不同次數移植的 BMSCs 在 Wistar 大鼠損傷脊髓內的存活、遷移及對大鼠脊髓損傷(spinal cord injury,SCI)修復的作用,探討 BMSCs 移植的最佳次數。? 方法 8 只 2 月齡 Wistar 大鼠,體重約120 g。取股骨骨髓體外分離培養(yǎng)第 2 代 BMSCs,用 Hoechst 33342 標記。另取 75 只成年 Wistar 大鼠體重約 220 g,采用改良Allen法制備T9、 10 SCI模型。隨機分為5組(n=15), A組經蛛網膜下腔置管移植1次1 × 107個/mL BMSCs懸液0.1 mL(術后 1 周), B 組 2 次(術后 1、 3 周), C 組 3 次(術后 1、 3、 5 周), D 組 5 次(術后 1、 3、 5、 7、 9 周), E 組于術后 1、 3、 5、 7、9 周各注入 0.2 mL PBS 作為空白對照。SCI 術后不同時間點行大鼠后肢 Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)評分評價神經功能狀況,并行熒光顯微鏡、 HE 染色、免疫組織化學染色觀察 BMSCs 在體內遷移、存活及分化情況。? 結果 術后 3 周,A ~ D 組 BBB 評分均有明顯增加,與 E 組比較差異均有統(tǒng)計學意義(P lt; 0.01)。術后 7、9、12 周,C、D 組 BBB 評分均明顯高于 A、B 組(P lt; 0.01),B 組高于 A 組(P lt; 0.01)。各時間點 C、D 組間比較差異均無統(tǒng)計學意義(P gt; 0.05)。熒光顯微鏡觀察示術后 3 周,移植的 BMSCs 存活于損傷脊髓邊緣, A 組細胞數達高峰;隨后 A 組細胞數逐漸減少, B、 C、 D 組分別于術后5、 7、 7周細胞數達高峰后逐漸下降。12周C、 D組存活細胞數顯著多于A、 B組,差異有統(tǒng)計學意義(P lt; 0.01);各時間點C、 D組間比較差異均無統(tǒng)計學意義(P gt; 0.05)。 HE染色示術后3周損傷脊髓形成的空洞A、 B、 C、 D組逐漸減小,12 周 C、 D 組空洞最小, A、 B 組次之, E 組最大。免疫組織化學染色示神經絲蛋白 200(neuroflament 200, NF-200)細胞數變化趨勢與 BMSCs 存活細胞數類似。術后 12 周 NF-200 陽性細胞數在 C、D 組表達較 A、B 組明顯;神經元樣細胞發(fā)出的神經絲穿過損傷區(qū)在C、 D組最明顯, A、 B組較少。 ? 結論 多次移植BMSCs更有利于SCI修復,移植以3次為最好。
目的 脊髓損傷(spinal cord injury,SCI)后,內源性神經干細胞(neural stem cells,NSCs)能分化成神經元促進脊髓愈合,但其分子機制尚不清楚。研究三磷酸腺苷(adenosine-triphosphate,ATP)激活哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)/ 信號轉錄和轉導激活因子 3(signal transducers and activators of transcription 3,STAT3)通路在 SCI 中的生理和病理機制。? 方法 取 96 只健康成年雌性 SD 大鼠,體重 250 ~ 300 g,隨機分為 4 組(n=24): A、 B、 C 組用改良 Allen 重物打擊法制作 T8 ~ 10 SCI 模型后, A 組以 ATP(40 mg/kg)、 B 組以等量生理鹽水、 C 組以 ATP(40 mg/ kg)加雷帕霉素(3 mg/kg)分別治療 7 d; D 組僅行椎板切除術,不損傷脊髓,等量生理鹽水治療 7 d。術后1、2、3、4 周采用 Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)評分法評估大鼠后肢運動功能恢復情況,各時間點取材行免疫組織化學、Western blot、實時熒光定量 PCR 檢測脊髓細胞標志物神經元特異性烯醇化酶(neuron-specifc enolase,NSE)、巢蛋白(Nestin)、神經膠質原纖維酸性蛋白質(glial fbrillary acidic protein, GFAP)和通路因子mTOR、 STAT3的表達。? 結果 術后 1 ~ 4 周,A 組大鼠 BBB 評分呈持續(xù)升高趨勢,均高于 B、C 組,低于 D 組,差異均有統(tǒng)計學意義(P lt; 0.01)。實時熒光定量 PCR 檢測顯示,術后 1 ~ 4 周 A 組 mTOR、STAT3、NSE mRNA 表達持續(xù)升高,Nestin mRNA 表達逐漸降低,但各時間點均高于 B、C、D 組,差異有統(tǒng)計學意義(P lt; 0.01);而 A 組 GFAP mRNA 表達持續(xù)升高,但各時間點均低于 B、C組,高于 D 組,差異有統(tǒng)計學意義(P lt; 0.01);各時間點 B、C 組各指標 mRNA 表達與 D 組比較差異均有統(tǒng)計學意義(P lt; 0.01),?B、C 組間 mTOR、P-mTOR、STAT3、P-STAT3 mRNA 比較差異有統(tǒng)計學意義(P lt; 0.05),余指標表達差異無統(tǒng)計學意義(P gt; 0.05)。Western blot蛋白檢測結果與mRNA變化相似。? 結論 在大鼠體內ATP能激活mTOR/STAT3通路,誘導內源性 NSCs 增殖、分化為神經元,有助于 SCI 愈合。
目的利用 CT 三維重建技術對鉤椎關節(jié)區(qū)域進行應用解剖測量研究,并輔助鉤椎關節(jié)融合器參數設計。方法通過病歷與影像系統(tǒng)篩選,納入符合選擇標準的 60 例患者頸椎 CT 掃描數據,其中男 30 例,女 30 例;年齡 39~60 歲。將 DICOM 格式原始數據導入 Mimics19.0 軟件進行三維重建,測量 C3~C7 雙側鉤突高、鉤突基底寬、鉤突基底長、鉤椎關節(jié)椎間孔部移行距離,C3~C7 鉤椎關節(jié)前緣間距、鉤椎關節(jié)后緣間距,以及 C2、3~C6、7 鉤椎關節(jié)間隙高度、椎間隙中心高度、椎間隙前后徑。將上述測量結果用 SPSS22.0 統(tǒng)計軟件計算均值、標準差、最小值和最大值,用于輔助鉤椎關節(jié)融合器參數設計。結果C3~C7 各椎體鉤突高、鉤突基底寬、鉤突基底長、鉤椎關節(jié)椎間孔部移行距離以及 C2、3~C6、7 鉤椎關節(jié)間隙高度左右側比較,差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05);鉤椎關節(jié)間隙高度男女差異亦無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。C3~C7 各椎體鉤椎關節(jié)前緣間距均顯著大于鉤椎關節(jié)后緣間距(P<0.05),鉤椎關節(jié)向后呈內聚形狀。各節(jié)段椎間隙中心高度男性高于女性,但僅 C2、3 和 C5、6 節(jié)段差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);各節(jié)段椎間隙前后徑男性均顯著大于女性(P<0.05)。椎間隙中心高度為(4.94±0.49)mm(3.81~5.90 mm),椎間隙前后徑為(15.78±1.23)mm(12.94~18.85 mm),鉤椎關節(jié)前緣間距為(17.19±2.39)mm(13.39~24.63 mm),鉤椎關節(jié)后緣間距為(10.84±2.12)mm(7.19~16.64 mm)。根據上述測量結果設計鉤椎關節(jié)融合器體部高度為 5、6、7、8 mm 4 種規(guī)格,深度為 12、13、14、15、16 mm 5 種規(guī)格,寬度為 14~18 mm;兩翼設計為弧形且寬 2、3 mm 兩種規(guī)格。結論不同節(jié)段鉤椎關節(jié)解剖測量指標存在一定差異,基于解剖研究測量結果設計的鉤椎關節(jié)融合器規(guī)格能夠滿足不同患者需求。