【摘要】 乙酰肝素酶（heparanase，HPA）是目前發(fā)現(xiàn)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞中唯一能切割細(xì)胞外基質(zhì)中硫酸肝素蛋白多糖側(cè)鏈的內(nèi)源性糖苷酶。因其可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的浸潤和轉(zhuǎn)移，還可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長和微血管形成，而被視為是抗腫瘤、抗炎癥的理想靶點(diǎn)。研究表明HPA可以降解腎小球基底膜硫酸乙酰肝素多糖側(cè)鏈，造成腎小球基底膜選擇性濾過蛋白質(zhì)功能下降，與糖尿病腎?。╠iabetic nephropathy，DN）蛋白尿的產(chǎn)生密切相關(guān)。HPA活性的高低對(duì)糖尿病腎病的研究有著重要的意義?，F(xiàn)將HPA與DN之間的研究進(jìn)展作一綜述。
目的 根據(jù)基因庫中的人肝素酶（HPSE）基因序列，構(gòu)建針對(duì)肝素酶基因的小干擾RNA（siRNA）及其表達(dá)載體，轉(zhuǎn)染MDA-MB-231細(xì)胞后觀察其對(duì)肝素酶基因的干擾作用。 方法 設(shè)計(jì)肝素酶靶向的發(fā)夾狀siRNA，合成2條互補(bǔ)的寡核苷酸鏈共4對(duì)，退火后連接入pGPU6/GFP/Neo載體，轉(zhuǎn)化后進(jìn)行序列鑒定，轉(zhuǎn)染MDA-MB-231細(xì)胞，熒光照片，RT-PCR （real-time PCR）檢測(cè)肝素酶mRNA的表達(dá)情況。 結(jié)果 設(shè)計(jì)出4條針對(duì)肝素酶的siRNA，將退火后的雙鏈寡核苷酸片段克隆到pGPU6/GFP/Neo載體，經(jīng)過陽性菌落酶切鑒定與測(cè)序，結(jié)果正確。再將siRNA載體轉(zhuǎn)染到MDA-MB-231細(xì)胞株，RT-PCR檢測(cè)肝素酶mRNA表達(dá)明顯降低（Plt;0.05）。結(jié)論 成功構(gòu)建了針對(duì)肝素酶基因的siRNA載體，轉(zhuǎn)染到MDA-MB-231細(xì)胞株后細(xì)胞肝素酶基因的表達(dá)明顯降低，從而為腫瘤治療提供了一種新的方法。
目的 研究乙酰肝素酶（HPA1）在結(jié)直腸癌中的表達(dá)，探討其與腫瘤生長和預(yù)后的關(guān)系。方法 采用RT-PCR和免疫組織化學(xué)技術(shù)，從mRNA和蛋白水平對(duì)HPA1在結(jié)直腸癌及其周圍組織中的表達(dá)進(jìn)行定性和定位研究，初步分析其與結(jié)直腸癌臨床病理特征和臨床預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果 HPA1 mRNA在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)明顯高于周圍正常組織，HPA1 mRNA在正常腸道組織中的表達(dá)與是否患結(jié)直腸腺瘤呈正相關(guān)（r=0.352，P=0.024）； 免疫組化結(jié)果發(fā)現(xiàn)，HPA1蛋白主要表達(dá)在結(jié)直腸癌組織、腫瘤邊緣的浸潤組織和血管內(nèi)皮細(xì)胞； HPA1陰性患者的2年無病生存率（88.9%）高于HPA1陽性患者（50.0%），但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.078）。結(jié)論 HPA1在結(jié)直腸癌組織中呈高表達(dá)，與腫瘤的發(fā)生和預(yù)后有一定的關(guān)系。