目的 研究植入了感覺神經(jīng)束和血管束的組織工程骨修復(fù)兔股骨缺損對(duì)神經(jīng)激肽1 受體（neurokinin 1 receptor，NK1R）和血管活性腸肽受體1（vasoactive intestinal peptide type 1 receptor，VIPR1）表達(dá)的影響。 方 法 5 月齡健康新西蘭大白兔54 只，抽取髂骨紅骨髓，全骨髓貼壁篩選法分離、培養(yǎng)BMSCs。取第3 代BMSCs 成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)7 d后，與β 磷酸三鈣支架復(fù)合培養(yǎng)制備組織工程骨。將54 只兔制備單側(cè)股骨1.5 cm 缺損模型，隨機(jī)分成3 組（n=18），分別在修復(fù)缺損的組織工程骨側(cè)槽中植入感覺神經(jīng)束（A 組）、股血管束（B 組），以及空白對(duì)照（C 組）。術(shù)后4、8、12 周各組分別處死6 只兔，對(duì)修復(fù)骨段進(jìn)行大體觀察、X 線片檢查成骨情況，提取總RNA 行實(shí)時(shí)熒光定量PCR 檢測(cè)NK1R mRNA 和VIPR1 mRNA 的表達(dá)情況，并行免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)NK1R 和VIPR1 的表達(dá)情況。 結(jié)果 大體觀察和X 線片檢查均顯示A、B 組成骨情況優(yōu)于C 組。各組X 線片評(píng)分隨時(shí)間延長(zhǎng)逐漸升高。術(shù)后4 周B 組X 線片評(píng)分高于A、C 組（P lt; 0.05），A、C 組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）；術(shù)后8、12 周A、B 組X 線片評(píng)分高于C 組（P lt; 0.05）；A、B 組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。實(shí)時(shí)熒光定量PCR 檢測(cè)示各組NK1R mRNA 和VIPR1 mRNA 的表達(dá)量均于術(shù)后8 周達(dá)峰值，各時(shí)間點(diǎn)間表達(dá)量差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）；各時(shí)間點(diǎn)A、B 組NK1R mRNA 和VIPR1 mRNA 表達(dá)均高于C 組（P lt; 0.05）， B 組高于A 組（P lt; 0.05）。免疫組織化學(xué)染色顯示，各組NK1R 和VIPR1 的陽(yáng)性表達(dá)均在術(shù)后8 周最強(qiáng)，且A、B 組的表達(dá)強(qiáng)于C 組。 結(jié)論 血管束植入法可以替代感覺神經(jīng)束植入法構(gòu)建血管、神經(jīng)化組織工程骨，并能促進(jìn)神經(jīng)肽受體的表達(dá)，避免因感覺神經(jīng)束植入導(dǎo)致支配區(qū)的感覺缺失，是一種較理想的復(fù)合組織工程骨構(gòu)建方法。
目的 構(gòu)建功能化組織工程骨是目前骨組織工程研究過渡到臨床應(yīng)用的重要方向。通過組織工程骨的神經(jīng)化構(gòu)建，在體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上探討神經(jīng)因素在骨組織工程中的作用。 方法 5 ～ 6 月齡健康新西蘭大白兔54只，雌雄不限，體重2 ～ 3 kg，從骨髓中分離培養(yǎng)BMSCs；制備兔外周感覺神經(jīng)勻漿和運(yùn)動(dòng)神經(jīng)勻漿，按1 ∶ 10（V/V）加入LG-DMEM 培養(yǎng)基，培養(yǎng)第2 代BMSCs。對(duì)照組以LG-DMEM 培養(yǎng)基培養(yǎng)。通過MTT 實(shí)驗(yàn)、ALP 染色和Ⅰ型膠原免疫細(xì)胞化學(xué)染色鑒定，觀察感覺、運(yùn)動(dòng)神經(jīng)勻漿在體外對(duì)BMSCs 增殖和成骨分化的影響。將體外經(jīng)成骨誘導(dǎo)的BMSCs復(fù)合β 磷酸三鈣（β tricalcium phosphate，β-TCP）制備組織工程骨，植入兔體內(nèi)修復(fù)15 mm 股骨與骨膜缺損。將兔隨機(jī)分為3 組，每組18 只，A 組在β-TCP 生物支架材料的側(cè)槽中植入感覺神經(jīng)束，B 組植入運(yùn)動(dòng)神經(jīng)束，C 組為單純組織工程骨；分別于術(shù)后4、8、12 周通過X 線片、骨密度檢測(cè)和免疫組織化學(xué)染色觀察神經(jīng)化組織工程骨的成骨效應(yīng)。 結(jié) 果 MTT法檢測(cè)示，各組吸光度（A）值隨培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)均逐漸增加，從6 d 開始，感覺神經(jīng)組和運(yùn)動(dòng)神經(jīng)組的A 值均低于對(duì)照組（P lt; 0.01）；8 d 和10 d 時(shí)，感覺神經(jīng)組A 值低于運(yùn)動(dòng)神經(jīng)組（P lt; 0.05）。培養(yǎng)7 d 后，感覺神經(jīng)組和運(yùn)動(dòng)神經(jīng)組ALP 染色陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)均明顯少于對(duì)照組；培養(yǎng)14 d 后，感覺神經(jīng)組和運(yùn)動(dòng)神經(jīng)組的細(xì)胞未見Ⅰ型膠原陽(yáng)性表達(dá)，對(duì)照組的細(xì)胞Ⅰ型膠原表達(dá)呈陽(yáng)性。兔大段骨缺損修復(fù)區(qū)的術(shù)后X 線片及Yang 評(píng)分提示，隨著時(shí)間延長(zhǎng)，各組Yang 評(píng)分逐步升高，8 周后A 組評(píng)分高于B、C 組（P lt; 0.01），B、C 組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。術(shù)后12 周骨密度檢測(cè)顯示A 組骨缺損修復(fù)良好，骨密度值高于B、C 組（P lt; 0.01），B、C 組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。術(shù)后12 周組織工程骨成骨局部的免疫組織化學(xué)染色顯示，S-100 在A 組表達(dá)量較高，B 組表達(dá)量較少，C 組偶見表達(dá)；降鈣素基因相關(guān)肽在A 組表達(dá)量高，B、C 組表達(dá)量較少。 結(jié)論 感覺、運(yùn)動(dòng)神經(jīng)勻漿抑制BMSCs 增殖和成骨分化，神經(jīng)化組織工程骨的成骨和塑形與感覺神經(jīng)作用更為密切。