目的 探討磷酸化的哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(p-roTOR)在非小細胞肺癌(NSCLC) 中的表達及其對預(yù)后的預(yù)測價值。方法 運用免疫組織化學(xué)EnVision法檢測59例NSCLC肺癌組織和10例非肺癌組織(3例肺結(jié)核和7例炎性假瘤)中p-mTOR蛋白的表達。結(jié)果 p-mTOR在肺 良性疾病組均為陰性，在NSCLC組織中表達的陽性率為40.7％，顯著高于肺良性疾病組（χ2=6.237，P=0.013）；p-mTOR在NSCLC組織中的表達與性別、年齡和pTNM分期有關(guān)，而與其他臨床 病理參數(shù)(腫瘤大小、病理類型和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況)無明顯相關(guān)性。Kaplan-Meire生存分析顯示， p-mTOR與生存期無明顯相關(guān)(Log rank檢驗P=0.055)。結(jié)論 檢測p-mTOR有助于肺部良惡性疾病的鑒別，單獨p-mTOR不能作為判斷NSCLC預(yù)后的參考指標(biāo)。
目的 通過比較瘢痕疙瘩及正常皮膚中細胞外信號調(diào)節(jié)激酶（extracellular signal-regulated kinase，ERK）、應(yīng)激活化蛋白激酶（c-Jun amino-terminal kinase，JNK）信號通路的表達，探討其在瘢痕疙瘩形成中的作用。 方法 取四川大學(xué)華西醫(yī)院燒傷整形科收治的26 例患者皮膚組織，其中行瘢痕疙瘩切除患者（實驗組）16 例，瘢痕疙瘩形成時間8 個月～ 10 年；胸部6 例，耳垂4 例，會陰部2 例，肩部3 例，腹部1 例；均經(jīng)病理檢查確診為瘢痕疙瘩。10 例整形手術(shù)患者自愿捐贈的正常皮膚作為對照組，腹部4 例，大腿3 例，肩部2 例，背部1 例。取標(biāo)本采用Envision 二步法行免疫組織化學(xué)染色，觀察磷酸化及非磷酸化JNK 和ERK 表達情況，并采用Image Pro Plus 4.5 圖像分析系統(tǒng)測定積分吸光度（IA）值，觀察陽性染色強度。 結(jié)果 免疫組織化學(xué)染色觀察顯示，對照組正常皮膚成纖維細胞中未見明顯的磷酸化及非磷酸化ERK、JNK 陽性表達；而實驗組主要在成纖維細胞中表達，陽性顆粒主要位于細胞質(zhì)和細胞核內(nèi)。實驗組磷酸化ERK 及JNK 的IA 值明顯高于對照組（P lt; 0.05），非磷酸化ERK 及JNK 兩組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）。 結(jié)論 磷酸化JNK、ERK 信號通路蛋白在瘢痕疙瘩中異常高表達，提示該通路可能與瘢痕疙瘩形成密切相關(guān)。
目的 通過構(gòu)建殼聚糖/ 亞磷酸化殼聚糖復(fù)合海綿，與人臍帶間充質(zhì)干細胞（human umbilical cord mesenchymal stem cells，hUCMSCs）復(fù)合構(gòu)建組織工程骨并行成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)，探討其異位成骨效果，為骨組織工程尋找理想支架材料。 方法 在殼聚糖分子中引入亞磷酸根基團，制備亞磷酸化殼聚糖，并進行表征。分別將濃度為2% 的殼聚糖和亞磷酸化殼聚糖溶液，按1 ∶ 1 體積比混合均勻，構(gòu)建殼聚糖/ 亞磷酸化殼聚糖復(fù)合海綿；然后在模擬體液中進行原位礦化，通過掃描電鏡觀察礦化前后復(fù)合海綿的結(jié)構(gòu)。用酶消化法分離培養(yǎng)hUCMSCs，取生長良好的第3 代細胞與殼聚糖/ 亞磷酸化殼聚糖復(fù)合海綿復(fù)合培養(yǎng)，構(gòu)建細胞- 支架復(fù)合物，并行成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)。成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)1、2 周，分別于光鏡及掃描電鏡下觀察細胞黏附情況；培養(yǎng)1、2、3、4、5、6 d 時，MTT 法分析細胞增殖情況。取3 ～ 4 月齡新西蘭大白兔40只，雌雄不限，體重2.1 ～ 3.2 kg，平均2.5 kg；制備雙側(cè)豎脊肌肌袋，在每只兔右側(cè)肌袋內(nèi)植入細胞- 支架復(fù)合物（A 組，n=40），于其中20 只兔左側(cè)肌袋植入殼聚糖/ 亞磷酸化殼聚糖復(fù)合海綿（B 組，n=20），剩余20 只兔左側(cè)肌袋不植入材料（C組，n=20）。術(shù)后觀察動物一般情況，4 周后處死動物取材，行大體及組織學(xué)觀察。 結(jié)果 亞磷酸化殼聚糖分析表明亞磷酸化反應(yīng)主要發(fā)生在羥基上，其質(zhì)子類型和化學(xué)位移強度與化學(xué)結(jié)構(gòu)一致。掃描電鏡觀察到殼聚糖/ 亞磷酸化殼聚糖復(fù)合海綿孔洞均勻，孔壁較??；原位礦化后孔壁表面有鈣磷涂層，晶體顆粒生成；細胞在殼聚糖/ 亞磷酸化殼聚糖復(fù)合海綿支架上黏附、生長良好。體內(nèi)實驗大體觀察A 組可見細胞- 支架復(fù)合物大小、形態(tài)基本保持原狀，質(zhì)地有所增韌，材料周圍有薄層結(jié)締樣組織；B 組復(fù)合海綿體積縮小，質(zhì)地松軟；C 組肌袋手術(shù)創(chuàng)口已愈合。組織學(xué)觀察A 組支架材料部分吸收，邊緣有均質(zhì)類骨物質(zhì)出現(xiàn)，并見成骨細胞；B 組植入?yún)^(qū)形成圓形空腔，殘留殼聚糖支架網(wǎng)絡(luò)；C 組創(chuàng)面基本愈合，肌肉纖維間可見少量淋巴細胞浸潤。 結(jié)論 殼聚糖/ 亞磷酸化殼聚糖復(fù)合海綿是一種具有良好生物相容性的支架材料，與hUCMSCs 復(fù)合構(gòu)建的組織工程骨在兔體內(nèi)可異位成骨。
目的 探討血小板源性生長因子(platelet-derived growth factor, PDGF)刺激成骨細胞，對磷酸化細胞外信號調(diào)節(jié)激酶1/2(phosphorylation extracellular signalregulated kinase1/2, pERK1/2)位置的影響。方法出生3 d清潔級健康小鼠10只，雌雄不拘，體重6～9 g。取小鼠顱骨，分離培養(yǎng)原代成骨細胞。取第6代成骨細胞，1%血清培養(yǎng)液培養(yǎng)12 h后, 隨機分成經(jīng)10 μmol/L PP2處理30 min組(實驗組)和未處理組(對照組)，每組再隨機分成2個亞組: 其中一組用PDGF (20 ng/ml)刺激10 min，另一組不用PDGF刺激，采用免疫組織化學(xué)染色檢測pERK1/2分布。另取第6代成骨細胞，當(dāng)細胞生長至80%融合時，用細胞刮隨機分成2組，一組用10 μmol/L PP2預(yù)處理30min（實驗組），另一組不用PP2作用（對照組），再用20 ng/ml PDGF培養(yǎng)12 h，采用劃痕愈合法檢測PP2對成骨細胞在PDGF刺激下遷移能力的影響。另取第6代成骨細胞，調(diào)整細胞濃度1×106/ml，隨機分成2組，分別經(jīng)DMSO（對照組）和10 μmol/LPP2(實驗組)預(yù)處理30min，每組再隨機分成2個亞組: 其中一組用PDGF(20 ng/ml)刺激10 min，另一組不用PDGF剌激，采用Western blot檢測細胞骨架蛋白內(nèi)pERK1/2活性。結(jié)果 免疫熒光染色結(jié)果顯示，PDGF促進pERK1/2定位于成骨細胞的局部黏附和細胞核內(nèi); 而PP2顯著抑制了由PDGF刺激引起的pERK1/2定位于成骨細胞的局部黏附, 但并不影響pERK1/2定位于細胞核內(nèi)。細胞劃痕愈合實驗顯示，PP2明顯抑制了由PDGF所誘導(dǎo)的成骨細胞遷移。Western blot檢測結(jié)果顯示，PP2明顯抑制了由PDGF所誘導(dǎo)的成骨細胞局部黏附內(nèi)ERK1/2的磷酸化。結(jié)論 PDGF通過激活Src活性，促進pERK1/2定位于成骨細胞的局部黏附內(nèi);PP2通過抑制pERK1/2定位于成骨細胞的局部黏附，從而抑制由PDGF所誘導(dǎo)的成骨細胞遷移。
目的 研究磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）和磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）在人膀胱尿路上皮癌組織中的表達特征及臨床意義。 方法 2005年6月－2010年7月，采用免疫組織化學(xué)法檢測40例膀胱尿路上皮癌組織及10例正常膀胱組織PI3K與p-Akt的表達，并對結(jié)果進行統(tǒng)計學(xué)分析。 結(jié)果 PI3K和p-Akt在正常膀胱黏膜組織陽性表達率均低于膀胱尿路上皮癌組織中，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。同一標(biāo)本中PI3K和p-Akt的表達不具有相關(guān)性（r=0.051，P=0.747）。 結(jié)論 PI3K、p-Akt在膀胱尿路上皮癌中高表達，兩者在膀胱尿路上皮癌中共同促其發(fā)展，但其在膀胱尿路上皮癌的預(yù)后和進展中的作用尚不明確。
目的 通過檢測異染色質(zhì)蛋白1α（HP1α）在DNA損傷后的磷酸化狀況，介紹一種用磷酸化標(biāo)簽(phos-tag)試劑檢測磷酸化蛋白質(zhì)的新方法。 方法 取雄雌C57小鼠交配后孕13.5 d胚胎，分離并原代培養(yǎng)小鼠胚胎成纖維細胞。對照組及實驗組(6個損傷時間點)各取2個100 mm培養(yǎng)皿的細胞進行實驗，實驗組細胞用喜樹堿進行DNA損傷；對照組用等量的二甲基亞砜處理。用摻入phos-tag的十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離蛋白并轉(zhuǎn)印，將膜用抗HP1α的抗體孵育，用偶聯(lián)辣根過氧化物酶的抗體做二抗，通過成像系統(tǒng)檢測蛋白。 結(jié)果 實驗組存在一條與HP1α有明顯不同遷移率的磷酸化HP1α條帶，與對照組相比DNA損傷后磷酸化HP1α含量一過性增多。 結(jié)論 HP1α被DNA損傷誘導(dǎo)為磷酸化狀態(tài)，提示其可能在DNA修復(fù)過程中扮演重要角色。 Phos-tag 蛋白質(zhì)印跡法可采用普通抗體檢測磷酸化的蛋白，是一種簡便易行的檢測未知磷酸化蛋白質(zhì)的新方法。
目的 總結(jié)鈣離子結(jié)合酪氨酸磷酸化調(diào)解基因的特征及其在腫瘤發(fā)病中的意義。方法 通過復(fù)習(xí)國內(nèi)外文獻，回顧分析鈣離子結(jié)合酪氨酸磷酸化調(diào)解基因參與調(diào)節(jié)的信號通路及其在多種腫瘤中的研究現(xiàn)狀。結(jié)果 鈣離子結(jié)合酪氨酸磷酸化調(diào)解基因通過多種機理誘導(dǎo)細胞增殖異常，多種腫瘤的發(fā)生與鈣離子結(jié)合酪氨酸磷酸化調(diào)解基因的異常表達密切相關(guān)。在分布不同的上皮性腫瘤中，鈣離子結(jié)合酪氨酸磷酸化調(diào)解基因參與調(diào)節(jié)的通路相同，作用靶點相似。結(jié)論 鈣離子結(jié)合酪氨酸磷酸化調(diào)解基因的進一步深入研究有望為闡明腫瘤的發(fā)生、發(fā)展機理提供新的途徑，并且可以作為早期診斷及輔助治療的重要手段。
目的 研究胰腺癌和慢性胰腺炎組織中胸苷磷酸化酶（TP）表達水平和淋巴管計數(shù)，探討兩者的臨床病理意義及在胰腺癌中的相互關(guān)系。方法 51例胰腺癌和10例慢性胰腺炎手術(shù)切除標(biāo)本常規(guī)制作石蠟包埋切片，TP表達的檢測和淋巴管計數(shù)均采用SP免疫組化法。結(jié)果 胰腺癌TP表達陽性率（54.9%）和淋巴管計數(shù)〔（12.5±4.3） 個/HP〕明顯高于慢性胰腺炎TP表達陽性率（20.0%）和淋巴管計數(shù)〔（5.2±2.4）個/HP〕，P＜0.05， P＜0.01； 高分化胰腺癌和未轉(zhuǎn)移病例TP表達陽性率和淋巴管計數(shù)明顯低于低分化胰腺癌和轉(zhuǎn)移病例（P＜0.05，P＜0.01）； TP表達陽性的胰腺癌淋巴管計數(shù)明顯高于陰性表達者〔(13.8±3.4)個/HP vs （10.9±3.2）個/HP〕，P＜0.01。 結(jié)論 TP表達和淋巴管計數(shù)均為反映胰腺癌進展、轉(zhuǎn)移等生物學(xué)特性及預(yù)后的重要標(biāo)記物，胰腺癌細胞分泌的TP可能促進淋巴管生成。
【摘要】目的通過臨床肝臟能量代謝研究，探索一套評價肝儲備功能，減少手術(shù)侵襲及合理進行術(shù)后保肝支持治療的圍手術(shù)期處理方案。方法回顧性分析我院1990年1月至2004年1月共14年間收治的2 143例肝癌病例的術(shù)前資料、手術(shù)治療情況、術(shù)后處理和臨床過程以及隨訪資料。將病例分為前期組（前7年）和后期組（后7年）進行比較，同時對術(shù)前磷酸化耐受指數(shù)（RTI）測定、術(shù)中半肝血流阻斷及術(shù)后連續(xù)定時的動脈血酮體比率（AKBR）測定進行分析，并比較其價值。結(jié)果①兩組比較顯示，后期組小肝癌比例增加，手術(shù)切除率增加，術(shù)后并發(fā)癥及死亡率下降，長期生存率提高； ②采用術(shù)前RTI測定來指導(dǎo)手術(shù)方式選擇，使術(shù)后并發(fā)癥發(fā)生率由21.1%降至11.0%，手術(shù)死亡率由1.6%降至0.3%； ③術(shù)中采用全入肝血流阻斷（n=476）與半肝血流阻斷技術(shù)（n=523）相比較，術(shù)后并發(fā)癥率及手術(shù)死亡率分別由25.8%及2.3%降至11.9%及0.6%，住院時間平均縮短3.5 d； ④術(shù)后采用連續(xù)AKBR監(jiān)測以指導(dǎo)術(shù)后保肝、支持治療，對及時處理和預(yù)防肝衰有重要價值。結(jié)論肝切除術(shù)圍手術(shù)期采用肝能量代謝指標(biāo)（RTI、AKBR）測定，可以準(zhǔn)確、有效地評價肝儲備功能，指導(dǎo)手術(shù)切除范圍并合理進行術(shù)后保肝、支持治療； 術(shù)中采用半肝血流阻斷技術(shù)可有效降低手術(shù)侵襲，保護殘肝功能。合理的圍手術(shù)期處理是降低手術(shù)并發(fā)癥及死亡率的重要因素。
目的檢測大腸癌組織中尿激酶型纖溶酶原激活劑（uPA）和糖原合成酶激酶-3β磷酸化（P-GSK3β）的表達并探討其意義。 方法選取2006年1月－2010年12月大腸癌手術(shù)切除標(biāo)本78例，采用微波EliVisionTM免疫組織化學(xué)法檢測78例大腸癌、30例大腸腺瘤和20例正常大腸黏膜中uPA和P-GSK3β的表達。 結(jié)果大腸癌組織中uPA和P-GSK3β陽性表達定位于細胞質(zhì)，其表達明顯高于正常大腸黏膜組織和大腸腺瘤組織（P＜0.05）。uPA和P-GSK3β陽性表達與組織分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床病理分期有關(guān)（P＜0.05）；兩者間表達呈正相關(guān)（P＜0.05）。 結(jié)論uPA和P-GSK3β在大腸癌中呈高表達，且與大腸癌的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。