目的 三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)可促進(jìn)脊髓損傷(spinal cord injury,SCI)的修復(fù),通過觀察ATP 聯(lián)合BMSCs 移植治療大鼠SCI 的療效,探討兩者在SCI 修復(fù)中的協(xié)同作用及其聯(lián)合移植治療SCI 的可行性。 方法 取1 只體重120 g 的雄性SD 大鼠股骨和脛骨骨髓,分離獲得BMSCs。將第3 代BMSCs 以BrdU 標(biāo)記,制備濃度為5.0 × 107 個(gè)/mL 的細(xì)胞懸液。將48 只體重240 ~ 260 g 的SD 雌性大鼠,采用改良Allen 打擊法制備T12 節(jié)段SCI 模型后,隨機(jī)分為4 組,每組12 只。聯(lián)合移植組(A 組):將ATP(40 mg/kg)與6 μL BMSCs 細(xì)胞懸液混勻后,注射至損傷脊髓撞擊中央及距頭、尾側(cè)各1 mm 處,細(xì)胞數(shù)量約3.0 × 105 個(gè);BMSCs 移植組(B 組)、ATP 移植組(C 組)及對 照組(D 組):同A 組方法分別移植BMSCs 細(xì)胞懸液6 μL、ATP(40 mg/kg)及PBS(40 mg/kg)。術(shù)后觀察大鼠一般情況, 于 1、3、7、14、21、28 d 采用Tarlov 評分及Rivilin 斜板實(shí)驗(yàn)評分評價(jià)后肢功能恢復(fù)程度;28 d 處死大鼠后取材行組織學(xué)和免疫組織化學(xué)染色觀察SCI 修復(fù)情況。 結(jié)果 術(shù)后A 組1 只,B、C 組各2 只,D 組3 只動物因感染或厭食死亡,其余動物均存活至實(shí)驗(yàn)完成。各組動物術(shù)后均出現(xiàn)后肢癱瘓癥狀,術(shù)后2 ~ 3 周開始有不同程度恢復(fù),A 組最快,B、C 組次之,D組最差。術(shù)后1、3 d 各組間改良Tarlov 評分和Rivilin 斜板實(shí)驗(yàn)評分比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P gt; 0.05);術(shù)后7、14、21、28 d 除B、C 組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P gt; 0.05)外,其余各組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P lt; 0.05)。術(shù)后28 d 組織學(xué)觀察示,A 組大鼠SCI 處無明顯空洞,損傷區(qū)內(nèi)無明顯瘢痕組織,有各種形態(tài)細(xì)胞形成,部分細(xì)胞有明顯分化特征;B、C 組SCI 處可見少量瘢痕組織填充,并有脊髓空洞形成;D 組脊髓斷端被瘢痕組織填充,可見大量炎性細(xì)胞和成纖維細(xì)胞浸潤,并有較大脊髓空洞形成。免疫組織化學(xué)染色觀察顯示,A、B 組可見存活的BrdU 標(biāo)記陽性BMSCs,A 組BrdU 陽性細(xì)胞數(shù)多于B 組,比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P lt; 0.05);C、D 組未見BrdU 標(biāo)記陽性細(xì)胞。A 組神經(jīng)微絲蛋白200 和膠質(zhì)纖維酸性蛋白陽性細(xì)胞面積百分比高于B、C、D 組,B、C 組高于D 組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P lt; 0.05);B、C 組間比較差異無 統(tǒng) 計(jì)學(xué) 意義(P gt; 0.05)。 結(jié)論 ATP 對損傷后的大鼠脊髓有保護(hù)作用,ATP 與BMSCs 聯(lián)合移植可促進(jìn)其損傷脊髓修復(fù)。