目的利用近交系大鼠實驗?zāi)Ｐ驮u價同基因細胞源組織工程皮膚修復大鼠全層皮膚缺損的效果，為其臨床應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。 方法取近交系F344大鼠乳鼠皮膚，采用Dispase-胰蛋白酶兩步消化法分離培養(yǎng)表皮細胞；取SD大鼠皮膚，按照高滲鹽-SDS-胰蛋白酶化學處理法制備脫細胞真皮基質(zhì)；依次利用浸沒式培養(yǎng)和氣液分離培養(yǎng)法將第2代表皮細胞與脫細胞真皮基質(zhì)復合體外培養(yǎng)構(gòu)建組織工程皮膚。取4～5周齡近交系F344大鼠36只，于大鼠背部兩側(cè)對稱制備全層皮膚缺損，缺損面積為預(yù)實驗確定的1.5 cm × 1.5 cm。將72個創(chuàng)面隨機分為3組（n=24），兩側(cè)移植不同修復材料：實驗組移植組織工程皮膚、陰性對照組移植同種異體脫細胞真皮基質(zhì)、陽性對照組移植自體全層皮膚（非原位移植）。術(shù)后行大體觀察、皮片成活率、創(chuàng)面收縮率測量及組織學觀察，評價修復效果。 結(jié)果實驗組術(shù)后4周創(chuàng)面可達到Ⅰ期愈合，與周圍組織緊密連接，外觀接近周圍正常皮膚。術(shù)后4周，陰性對照組皮片成活率為0；實驗組為62.5%（15/24），與陽性對照組91.7%（22/24）比較差異有統(tǒng)計學意義（χ2 =5.779，P=0.016）。術(shù)后4周，實驗組和陽性對照組創(chuàng)面收縮率顯著低于陰性對照組（P lt; 0.05），實驗組與陽性對照組間差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。組織學觀察示實驗組術(shù)后1周有輕微炎性反應(yīng)；術(shù)后2周真皮層小血管和成纖維細胞大量增生，表皮層逐漸分化成熟；術(shù)后4周時伴隨新生膠原纖維沉積，移植物真皮層出現(xiàn)膠原改建。 結(jié)論同基因細胞源組織工程皮膚能夠有效修復大鼠全層皮膚缺損，在防止創(chuàng)面收縮和促進創(chuàng)面愈合等方面均可達到類似于自體全層皮膚移植的效果。
目的 了解近年來同種闊筋膜臨床應(yīng)用的研究進展。 方法 查閱國內(nèi)外同種闊筋膜應(yīng)用基礎(chǔ)、處理技術(shù)和臨床應(yīng)用的相關(guān)文獻，進行總結(jié)分析。 結(jié)果 同種闊筋膜具有細胞成分少、膠原纖維平行致密的組織學特點和免疫原性低的特點，經(jīng)過不同方式處理和保存后，以細胞外基質(zhì)為主要成分的支架形式供臨床應(yīng)用，并成功應(yīng)用于眼科、泌尿外科、骨科和整形外科等領(lǐng)域，并已取得較為理想的治療效果。 結(jié)論 同種闊筋膜作為一種天然的生物材料在臨床修復缺損和功能重建中有著獨特優(yōu)勢，隨著生物醫(yī)學技術(shù)的發(fā)展，有望應(yīng)用于更多領(lǐng)域。
目的 研究豬脫細胞真皮基質(zhì)修復兔腹壁缺損的效果，探討異種脫細胞真皮基質(zhì)應(yīng)用的可行性。 方 法 健康小白豬1 頭，取背部及兩側(cè)皮膚制備脫細胞真皮基質(zhì)。26 只日本大耳白兔，雌雄不限，體重2.2 ～ 2.3 kg，隨機分為對照組（n=6）和實驗組（n=20）。對照組制備5.0 cm × 0.5 cm 腹壁缺損，單純縫合關(guān)閉缺損。實驗組制備5.0 cm × 2.5 cm 腹壁缺損，用同樣大小的豬脫細胞真皮基質(zhì)補片（簡稱“補片”）修復，補片基底膜面朝向腸管。術(shù)后觀察是否有疝形成，比較兩組腹腔內(nèi)臟器粘連情況，以及對照組腹壁肌筋膜單純縫合處和實驗組補片- 腹壁肌筋膜吻合處的最大張力，組織學觀察補片是否有纖維血管組織長入及其在體內(nèi)的生物學轉(zhuǎn)歸。 結(jié)果 實驗動物均無疝形成。術(shù)后5 周，實驗組補片和腹壁融為一體，補片皮膚面和臟器面均有纖維血管組織長入，補片處于新生組織摻入重建過程。實驗組1 只動物補片和腹腔內(nèi)臟器粘連較重（2 級），5 只發(fā)生了輕微粘連（1 級），12 只無粘連（0 級）；對照組1 只輕微粘連（1 級），5 只無粘連（0 級）；兩組粘連分級比較差異無統(tǒng)計學意義（Z= —0.798，P=0.425）。術(shù)后5 周，實驗組補片- 腹壁肌筋膜吻合處的最大張力為（13.0 ± 5.5）N，對照組腹壁肌筋膜單純縫合處為（13.6 ± 4.0）N，差異無統(tǒng)計學意義（t= —0.410，P=0.683）。組織學觀察顯示，術(shù)后5 周，實驗組補片中有大量小血管，并有中性粒細胞及淋巴細胞為主的炎性浸潤，補片邊緣偶見巨噬細胞，補片- 腹壁肌筋膜吻合處由纖維結(jié)締組織連接；術(shù)后6 個月，補片及周圍炎性反應(yīng)消退，膠原纖維結(jié)構(gòu)發(fā)生了改建，補片和肌筋膜層由有纖維結(jié)締組織愈合。 結(jié)論 補片修復兔腹壁缺損取得了較好效果，補片- 腹壁肌筋膜層愈合，其吻合處的力學強度達到了自體腹壁單純縫合吻合的力學強度，補片膠原纖維結(jié)構(gòu)發(fā)生了改建。
目的? 比較豬脫細胞真皮基質(zhì)（porcine acellular dermal matrix，PADM）加大鼠自體刃厚皮與單純大鼠自體刃厚皮修復全層皮膚缺損的效果，組織學觀察 PADM 在大鼠體內(nèi)的轉(zhuǎn)歸。? 方法 健康雌性 SD 大鼠 20 只，體重 200 ～ 225 g。于每只大鼠背部左側(cè)翻起 4.0 cm × 2.5 cm 皮瓣，達深筋膜，皮下植入 4.0 cm × 2.5 cm 拉網(wǎng)的 PADM，10 ～ 14 d 待植入的 PADM 血管化后，沿原切口處將左側(cè) 4.0 cm × 2.5 cm 皮瓣切下，右側(cè)背部也制作 4.0 cm × 2.5 cm 全層皮膚缺損創(chuàng)面，兩側(cè)切除的全層皮膚用鼓式取皮機反取為 0.2 mm 厚刃厚皮片，分別植入左側(cè) PADM 上（實驗組）和右側(cè)皮膚缺損（對照組）。術(shù)后 2、4、8、20 周，觀察創(chuàng)面愈合情況，計算創(chuàng)面愈合率和創(chuàng)面收縮率，并對創(chuàng)面行組織學觀察。? 結(jié)?果 術(shù)后2周大體觀察，實驗組自體刃厚皮與PADM貼合良好，大部分復合皮泛紅成活；對照組自體刃厚皮創(chuàng)面絕大部分泛紅成活。組織學觀察，實驗組 PADM 內(nèi)有大量成纖維細胞長入，少量中性粒細胞和淋巴細胞浸潤，周圍可見巨噬細胞；對照組自體刃厚皮下纖維結(jié)締組織充填。術(shù)后4～8周大體觀察，實驗組大部分創(chuàng)面愈合，復合皮挾起時皮片厚，柔軟、豐滿，有彈性；對照組創(chuàng)面基本愈合，但挾起時皮片薄弱。組織學觀察，實驗組 PADM 內(nèi)炎性浸潤逐步消退；對照組自體刃厚皮下層狀排列的膠原纖維束平行于表面。術(shù)后 20 周大體觀察，實驗組復合皮與周圍皮膚結(jié)合部平坦，復合皮柔軟、豐滿；對照組皮片薄，彈性較差。組織學觀察， PADM 內(nèi)及周圍未見炎性浸潤，膠原纖維組織結(jié)構(gòu)與自體皮接近；對照組自體刃厚皮皮片薄，內(nèi)見殘存皮膚附件結(jié)構(gòu)，皮下被平行于表面的瘢痕組織充填。實驗組 4、8 周創(chuàng)面愈合率低于對照組（P lt; 0.05）；創(chuàng)面收縮率有較對照組低的趨勢，但差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。? 結(jié)論 大鼠自體刃厚皮與 PADM 支架復合移植修復全層皮膚缺損，復合皮片厚，彈性好， PADM 在體內(nèi)逐步被自體膠原所替代。
目的 探討熒光染料PKH26 在構(gòu)建組織工程骨中作為細胞示蹤劑的可行性。 方法 取1 周齡新西蘭大白兔骨髓分離培養(yǎng)BMSCs，以PKH26 標記第3 代BMSCs，熒光顯微鏡觀察并采用流式細胞儀檢測標記率；以成骨誘導培養(yǎng)基誘導標記后BMSCs 向成骨細胞分化，倒置相差顯微鏡觀察誘導后7、14 d 細胞形態(tài)變化，并于14 d 采用鈣鈷法檢測ALP 活性，茜素紅礦化結(jié)節(jié)染色觀察誘導結(jié)果。將PKH26 標記的BMSCs 接種于生物衍生骨材料，48 h 后熒光顯微鏡觀察細胞與材料的復合情況；將細胞- 材料復合物植入成年新西蘭大白兔雙后肢肌袋，14、28 d 后熒光顯微鏡觀察標記細胞的轉(zhuǎn)歸。 結(jié)果 熒光顯微鏡觀察PKH26 標記的BM SCs 呈球形，呈現(xiàn)均勻分布的紅色熒光；培養(yǎng)24 h 后細胞貼壁伸展，輪廓清晰可見。流式細胞儀檢測細胞染色陽性率達97.2%。經(jīng)成骨誘導后，細胞由長梭形變?yōu)槎噙呅位蛄⒎叫危珽CM 分泌增多，ALP 及茜素紅染色均呈陽性反應(yīng)。PKH26 標記細胞與生物衍生骨材料復合培養(yǎng)48 h 后，熒光顯微鏡觀察可見材料表面及內(nèi)部發(fā)出紅色熒光。標記細胞- 支架材料復合物植入肌袋后14 d，在植入?yún)^(qū)可見發(fā)出紅色明亮熒光的標記細胞； 術(shù)后28 d，在植入?yún)^(qū)仍可見發(fā)出紅色熒光的細胞，但數(shù)量較14 d 時少，熒光強度也較弱。 結(jié)論 PKH26 標記BMSCs 可作為一種體外構(gòu)建組織工程骨及短期體內(nèi)示蹤的有效手段。