目的總結(jié) MSCs來源exosomes（MSCs-exosomes）促進(jìn)組織損傷修復(fù)的研究進(jìn)展，分析MSCs-exosomes臨床應(yīng)用的潛能和未來研究方向。 方法廣泛查閱國內(nèi)外有關(guān)MSCs-exosomes促進(jìn)組織損傷修復(fù)研究的文獻(xiàn)，并進(jìn)行綜述。 結(jié)果Exosomes是MSCs旁分泌的一種具有生物學(xué)活性的小囊泡，可在細(xì)胞間傳遞功能性蛋白、RNA和microRNA，通過抑制凋亡、促進(jìn)增殖等方式在多種疾病導(dǎo)致的組織損傷中發(fā)揮修復(fù)作用。 結(jié)論MSCs-exosomes是治療組織修復(fù)損傷的研究新熱點(diǎn)，針對(duì)MSCs-exosomes生物學(xué)功能、細(xì)胞間轉(zhuǎn)運(yùn)和治療機(jī)制的研究將有助于其向臨床應(yīng)用的轉(zhuǎn)化。
目的 探討采用鎖胸部擴(kuò)張皮瓣與逆行皮瓣聯(lián)合修復(fù)燒傷后頸部瘢痕攣縮畸形的方法及臨床意義。方法 2001年4月～2003年5月，收治16例頸部瘢痕攣縮畸形患者。其中男10例，女6例，年齡4～52歲。病程6個(gè)月～17年。伴有不同程度頸部活動(dòng)障礙和面部組織牽拉，牽拉部位包括下唇、口角、鼻翼以及眼部組織等。一期手術(shù)在頸橫動(dòng)脈頸段皮支和胸廓內(nèi)動(dòng)脈第2、3穿支部位埋置擴(kuò)張器，定期注水。二期手術(shù)徹底松解或切除頸部瘢痕，糾正攣縮畸形，鎖胸部擴(kuò)張皮瓣與胸廓內(nèi)動(dòng)脈穿支逆行皮瓣修復(fù)頸部創(chuàng)面，皮瓣切取范圍為9 cm×5 cm～15 cm×7 cm。術(shù)中1例出現(xiàn)胸廓內(nèi)動(dòng)脈穿支逆行皮瓣靜脈回流障礙，經(jīng)對(duì)癥處理后皮瓣血運(yùn)改善。術(shù)后16例皮瓣均成活。獲隨訪6～30個(gè)月，平均9個(gè)月。頸部后仰45°，側(cè)屈旋轉(zhuǎn)自如，外觀改善滿意，頦頸角明顯，無下唇牽拉和乳頭移位等。結(jié)論 采用鎖胸部擴(kuò)張皮瓣與胸廓內(nèi)動(dòng)脈穿支逆行皮瓣聯(lián)合修復(fù)頸部瘢痕攣縮畸形具有較好的臨床效果，后期瘢痕少，發(fā)生再次攣縮的可能性減少。
目的 介紹選擇性脫細(xì)胞豬皮覆蓋大面積燒傷早期創(chuàng)面的研制方法及臨床應(yīng)用效果。方法 2001年1月～2002年5月,對(duì)1例深Ⅱ度15%、Ⅲ度25%燒傷患者的右前臂和右小腿，行選擇性脫細(xì)胞中厚豬皮早期覆蓋。戊二醛交聯(lián)后表皮面黏貼于容器，邊緣包埋。在含0.25%胰酶的PBS液中37℃消化2小時(shí)，去污劑處理24小時(shí)后，漂洗備用。將處理后豬皮應(yīng)用于1例切削痂自體微粒植皮創(chuàng)面覆蓋約2%，大體和光鏡觀察其功能和外觀恢復(fù)情況。結(jié)果 組織學(xué)觀察見表皮層基本完整，真皮內(nèi)無細(xì)胞。初步臨床觀察顯示，選擇性脫細(xì)胞豬皮的真皮可在創(chuàng)基成活，失活表皮可被宿主自體表皮替代。結(jié)論 選擇性脫細(xì)胞豬皮有望替代現(xiàn)有材料用于大面積燒傷切削痂創(chuàng)面的早期覆蓋。
目的綜述MSCs修復(fù)燒傷創(chuàng)面的研究進(jìn)展。 方法廣泛查閱MSCs參與修復(fù)燒傷創(chuàng)面及其相關(guān)機(jī)制方面的文獻(xiàn)，并進(jìn)行分析總結(jié)。 結(jié)果MSCs具有自我更新、快速增殖、分化及旁分泌功能，通過分化為各種皮膚創(chuàng)面細(xì)胞及調(diào)節(jié)創(chuàng)面微環(huán)境，促進(jìn)燒傷創(chuàng)面修復(fù)。 結(jié)論MSCs在燒傷領(lǐng)域具有廣闊應(yīng)用前景，但燒傷創(chuàng)面的惡劣微環(huán)境也對(duì)細(xì)胞生存及轉(zhuǎn)歸提出了挑戰(zhàn)。
目的 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)（endoplasmic reticulum stress，ERS）介導(dǎo)的凋亡是真核細(xì)胞重要凋亡途徑之一，通過觀察嚴(yán)重?zé)齻笫笮募RS 不同通路蛋白表達(dá)變化，探討其在心肌細(xì)胞凋亡中的可能作用。 方法 雄性7 周齡Wistar 大鼠64 只，體重200 ～ 220 g；隨機(jī)分為兩組，每組32 只。實(shí)驗(yàn)組大鼠背部制備30% 體表面積Ⅲ度燙傷；對(duì)照組制備假傷模型。傷后1、4、7、14 d 兩組各處死8 只大鼠取心肌組織，透射電鏡觀察心肌超微結(jié)構(gòu)變化，TUNEL 法檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡，Western blot 檢測(cè)ERS 相關(guān)蛋白，如葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78（glucose regulated protein 78，GRP 78）、C/EBP 同源蛋白（C/EBP-homologous protein，CHOP）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12（Caspase 12）剪切體表達(dá)變化。 結(jié)果 大鼠均存活至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。透射電鏡觀察示實(shí)驗(yàn)組大鼠心肌細(xì)胞呈凋亡改變。傷后各時(shí)間點(diǎn)實(shí)驗(yàn)組心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)均明顯高于對(duì)照組（P lt; 0.05），傷后1、4、7 d 凋亡指數(shù)逐漸升高，14 d 時(shí)下降，各時(shí)間點(diǎn)間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。實(shí)驗(yàn)組心肌細(xì)胞GRP78、CHOP 及Caspase 12 剪切體蛋白表達(dá)持續(xù)升高，其中各時(shí)間點(diǎn)GRP 78 及Caspase 12 剪切體表達(dá)均較對(duì)照組顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）；除傷后1 d 外，其余各時(shí)間點(diǎn)實(shí)驗(yàn)組CHOP 蛋白表達(dá)均較對(duì)照組升高（P lt; 0.05）。 結(jié)論 嚴(yán)重?zé)齻蟠笫笮募“l(fā)生ERS，其中CHOP、Caspase 12 介導(dǎo)的凋亡通路活化，ERS 可能是心肌細(xì)胞凋亡的途徑之一。
目的 綜述組織工程全層皮膚的研究進(jìn)展，全面了解其研究現(xiàn)狀及應(yīng)用情況，為研制新型組織工程全層皮膚、改善皮膚替代物的性能奠定基礎(chǔ)。 方法 廣泛查閱近年來國內(nèi)外組織工程全層皮膚的相關(guān)文獻(xiàn)，并進(jìn)行綜合分析。 結(jié)果 組織工程全層皮膚在種子細(xì)胞、支架材料及構(gòu)建方面均取得了一定進(jìn)展，在臨床應(yīng)用中已經(jīng)取得了一定的療效，但移植成功率低，也不具備完整的皮膚結(jié)構(gòu)，還不能完全達(dá)到臨床應(yīng)用的要求。 結(jié)論 組織工程全層皮膚是理想的皮膚替代物，發(fā)展前景很大，但在種子細(xì)胞、支架材料及構(gòu)建應(yīng)用等方面仍需進(jìn)一步研究。
目的建立一種簡(jiǎn)便、高效的犬臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞分離方法，并進(jìn)行培養(yǎng)和鑒定。 方法無菌條件下取12只新生比格犬臍帶共12根，臍帶長(zhǎng)（13.0 ± 1.5）cm。PBS液沖洗后，各取4根臍帶注入1%Ⅰ型膠原酶分別消化臍靜脈5、7、10 min后，收集細(xì)胞并行錐蟲藍(lán)計(jì)數(shù)；倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，待細(xì)胞爬滿培養(yǎng)瓶后以1∶2比例傳代。?、裥湍z原酶消化7 min獲得的第3代細(xì)胞，通過免疫熒光染色和流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞中血管假性血友病因子（von Willebrand factor，vWF）和血小板-內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子CD31表達(dá)，進(jìn)行細(xì)胞鑒定；MTT檢測(cè)細(xì)胞增殖。 結(jié)果消化5、10 min后未收集到或偶爾收集到血管內(nèi)皮細(xì)胞；消化7 min可見大量血管內(nèi)皮細(xì)胞，培養(yǎng)24 h后細(xì)胞呈多角形，隨培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)細(xì)胞逐漸呈“鋪路石”樣生長(zhǎng)，細(xì)胞核較大，多為單核，少數(shù)細(xì)胞為雙核，傳代后細(xì)胞形態(tài)無明顯變化。熒光倒置顯微鏡下觀察，培養(yǎng)細(xì)胞vWF和CD31表達(dá)陽性；流式細(xì)胞儀檢測(cè)示培養(yǎng)細(xì)胞 vWF陽性表達(dá)率為99.0% ± 0.7%，CD31陽性表達(dá)率為98.0% ± 1.2%，提示培養(yǎng)細(xì)胞為血管內(nèi)皮細(xì)胞。MTT檢測(cè)示，隨培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)，血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖速度明顯提高。 結(jié)論采用酶消化法從犬臍靜脈中分離培養(yǎng)血管內(nèi)皮細(xì)胞操作簡(jiǎn)便，且細(xì)胞數(shù)量多、純度高。
目的 探討風(fēng)箏樣切口聯(lián)合全厚皮片移植修復(fù)嚴(yán)重指蹼瘢痕攣縮畸形的療效。 方法2008年6月－2011年9月，收治 指蹼瘢痕攣縮畸形患者31例（87個(gè)指蹼）。男24例，女7例；年齡5～43歲，中位年齡22歲。致傷原因：火焰燒傷26例，熱液燙傷3例，電弧燒傷1例，化學(xué)燒傷1例。損傷分度：深Ⅱ度14例，Ⅲ度17例。受傷至該次手術(shù)時(shí)間10個(gè)月～17年，中位時(shí)間2.2年。設(shè)計(jì)風(fēng)箏樣切口，切除相鄰掌指關(guān)節(jié)間的菱形瘢痕并充分松解指蹼間瘢痕粘連，繼發(fā)創(chuàng)面采用全厚皮片移植修復(fù)。供皮區(qū)拉攏縫合。 結(jié)果術(shù)后全厚皮片均成活，供皮區(qū)切口Ⅰ期愈合。29例（82個(gè)指蹼）獲隨訪；隨訪時(shí)間6～18個(gè)月，平均13個(gè)月。再造指蹼大小及深度均類似正常指蹼，無繼發(fā)攣縮，各手指活動(dòng)度良好。 結(jié)論采用風(fēng)箏樣切口聯(lián)合全厚皮片移植修復(fù)嚴(yán)重指蹼瘢痕攣縮畸形可獲得較好近期療效，遠(yuǎn)期療效需進(jìn)一步觀 察。
目的 總結(jié)采用預(yù)擴(kuò)張全厚皮片修復(fù)全手背瘢痕攣縮切除后繼發(fā)創(chuàng)面的療效。 方法2008年2月－2011年2月，收治全手背瘢痕攣縮患者15例（19手）。男12例（14手），女3例（5手）；年齡18～43歲，平均28.6歲。瘢痕形成時(shí)間6～22個(gè)月，平均13.2個(gè)月。均伴不同程度掌指關(guān)節(jié)背伸畸形和指間關(guān)節(jié)屈曲畸形。一期在擬供皮處植入軟組織擴(kuò)張器，注水?dāng)U張4～5個(gè)月；二期切除瘢痕后缺損范圍為14 cm × 9 cm～25 cm × 16 cm，采用預(yù)擴(kuò)張全厚皮片修復(fù)創(chuàng)面。 結(jié)果一期術(shù)后除1例患者擴(kuò)張皮瓣中央皮膚部分缺血壞死外，其余擴(kuò)張皮瓣均血運(yùn)良好。二期術(shù)后18手皮片成活；1手可見散在表皮下積液，給予引流后愈合。供區(qū)切口愈合良好?；颊呔@隨訪，隨訪時(shí)間6～18個(gè)月，平均13.7個(gè)月。皮片光滑平整，色澤質(zhì)地優(yōu)良，彈性良好，皮片邊緣及接縫處無明顯瘢痕形成。手部功能恢復(fù)良好，腕關(guān)節(jié)、掌指關(guān)節(jié)及各指間關(guān)節(jié)屈伸正常。 結(jié)論采用預(yù)擴(kuò)張全厚皮片修復(fù)全手背瘢痕切除后繼發(fā)創(chuàng)面，術(shù)后手部外觀及功能恢復(fù)良好。
目的 總結(jié)臍帶Wharton 膠來源MSCs（Wharton’s jelly-MSCs，WJ-MSCs）生物學(xué)特性及其優(yōu)越性的研究進(jìn)展。 方法 查閱近年來關(guān)于WJ-MSCs 的生物學(xué)特性及其與臍帶血MSCs（umbilical cord blood MSCs，UBMSCs）和BMSCs 相比較的文獻(xiàn)，進(jìn)行綜述分析。 結(jié)果 從臍帶Wharton 膠中可分離獲得大量具有自我復(fù)制、自我更新、高度增殖和多向分化潛能的MSCs。與UBMSCs 和BMSCs 相比較，WJ-MSCs 在分離時(shí)間、分離成功率、倍增時(shí)間、傳代數(shù)量和擴(kuò)增潛能等方面均具有優(yōu)越性。 結(jié)論 WJ-MSCs 具有取材簡(jiǎn)便、來源豐富、相對(duì)純凈、無倫理問題等優(yōu)點(diǎn)，是細(xì)胞移植治療、基因治療和組織工程器官構(gòu)建的理想種子細(xì)胞，為組織再生修復(fù)與原位重建提供了新思路。