目的 研究CoCl2 對體外培養(yǎng)的鼠下頜骨成骨細胞的作用,觀察缺氧條件對成骨細胞VEGF 及TGF-β1 表達的影響,為臨床牽張成骨技術(shù)的分子生物學機制研究提供理論依據(jù)。 方法 取新生24 h 內(nèi)Wistar 大鼠下頜骨,改良酶消化法培養(yǎng)和純化成骨細胞,采用HE 染色、ALP 組織化學染色、Ⅰ型膠原免疫組織化學、鈣結(jié)節(jié)染色行細胞形態(tài)學及組織學鑒定,并繪制生長曲線。取第3 代最佳生長狀態(tài)的鼠下頜骨成骨細胞,用150 μmol/L CoCl2 處理(實驗組),設正常狀態(tài)下培養(yǎng)為對照組,分別于培養(yǎng)后0、3、6、9、12、24 h,采用免疫熒光技術(shù)檢測VEGF 及TGF-β1 表達。 結(jié) 果 HE染色示成骨細胞形態(tài)多樣,呈三角形、多角形、圓形及鱗片形等不規(guī)則形態(tài),突起長短不一向外伸展,胞核清晰可見;胞漿豐富,呈粉紅色,胞核藍紫色,有時可見2 個細胞核,密集處細胞形態(tài)不明顯,分界模糊,僅見大圓核細胞。ALP 組織化學染色示細胞胞質(zhì)呈黑色顆粒,細胞核輪廓不清,細胞密集區(qū)可見大量陽性細胞。Ⅰ型膠原免疫組織化學染色示實驗組陽性細胞均勻可見,胞漿呈棕黃色,胞核周圍尤為明顯,空白對照組細胞未見棕黃色顆粒。鈣結(jié)節(jié)染色示成骨細胞于蓋玻片上培養(yǎng)15 d 后,細胞聚集成不透明區(qū)域,呈結(jié)節(jié)樣;茜素紅染色后,有橙紅色著色。培養(yǎng)各時間點對照組細胞激光共聚焦顯微鏡下可見較弱的VEGF 表達熒光;實驗組細胞隨缺氧時間延長,VEGF 表達熒光強度值增加,于術(shù)后9 h 達高峰,隨后降至正常水平。培養(yǎng)各時間點激光共聚焦顯微鏡下可見兩組細胞均有TGF-β1 表達熒光,對照組各時間點熒光強度值均略高于VEGF 對照組;實驗組TGF-β1 表達在缺氧3 h 短期成倍增加,隨缺氧時間延長表達逐漸降低。 結(jié)論 經(jīng)新生大鼠下頜骨培養(yǎng)的成骨細胞性狀穩(wěn)定;適當缺氧可誘導成骨細胞VEGF 和TGF-β1表達增強。