目的 觀察給予己酮可可堿( PTX) 預(yù)處理對(duì)失血性休克致急性肺損傷( ALI) 小鼠的影響, 初步探討PTX 的作用機(jī)制。方法 小鼠分為對(duì)照組、失血性休克組及PTX 組。通過肺組織HE染色觀察病理改變, 同時(shí)檢測(cè)肺干濕比( W/D) 和髓過氧化物酶( MPO) 活性。通過ELISA 方法檢測(cè)肺組織腫瘤壞死因子α( TNF-α) 和IL-1β變化, 通過逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)( RT-PCR) 檢測(cè)肺組織Toll 樣受體4( TLR4) mRNA 的表達(dá), 通過Western blot 檢測(cè)肺組織TLR4 蛋白的變化。結(jié)果 失血性休克誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生ALI, 肺W/D 和MPO 活性明顯增加, TNF-α、IL-1β、TLR4 mRNA 和TLR4 蛋白表達(dá)也增高, 與對(duì)照組有顯著性差異( P lt; 0. 01) 。PTX 預(yù)處理能減輕失血性休克所致ALI, 降低肺W/D 和MPO 活性, 同時(shí)導(dǎo)致TNF-α、IL-1β、TLR4 mRNA 和TLR4 蛋白表達(dá)下降。結(jié)論 PTX 預(yù)處理對(duì)失血性休克所致ALI 起保護(hù)作用, 可能與通過下調(diào)TLR4 抑制促炎癥因子表達(dá)有關(guān)。
目的 探討核因子κB 圈套寡核苷酸( NF-κB decoy ODN) 轉(zhuǎn)染對(duì)小鼠成熟樹突狀細(xì)胞( DCs) 生物學(xué)特性的影響。方法 體外誘導(dǎo)Balb/c 小鼠骨髓細(xì)胞生成未成熟DCs( imDCs) , 經(jīng)抗原 OVA 以及LPS孵育后成為OVA 沖擊的骨髓來源成熟DCs( mDCs) , 流式細(xì)胞儀檢測(cè)DCs 表面分子CD11c 以及MHC-Ⅱ的表達(dá)予以鑒定; 將NF-κB decoy ODN 體外轉(zhuǎn)染小鼠骨髓來源成熟DCs, 同時(shí)設(shè)立陰性對(duì)照組( 轉(zhuǎn)染NF-κB“變異”O(jiān)DN) 以及未轉(zhuǎn)染組, EMSA 檢測(cè)轉(zhuǎn)染后NF-κB 的活性變化; 流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組DCs 表面共刺激分子( CD40、CD80、CD86) 的表達(dá); 混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)觀察各組DCs 對(duì)OVA 致敏的T淋巴細(xì)胞增殖的影響。結(jié)果 成功培養(yǎng)出骨髓來源成熟DCs; NF-κB decoy ODN 轉(zhuǎn)染DCs 的NF-κB活性明顯降低( P lt;0. 05) , DCs 表面CD40、CD80 共刺激分子的表達(dá)與陰性對(duì)照組、未轉(zhuǎn)染組比較無明顯改變( P gt; 0. 05) , 而CD86 的表達(dá)與其他各組比較明顯降低( P lt;0. 05) ; 在混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)中,NF-κB decoy ODN轉(zhuǎn)染DCs 對(duì)T細(xì)胞的增殖有抑制作用( P lt; 0.05) , 而陰性對(duì)照組與未轉(zhuǎn)染組的DCs具有強(qiáng)烈的激發(fā)T細(xì)胞增殖的能力( P lt; 0. 05) 。結(jié)論 NF-κB decoy ODN 轉(zhuǎn)染DCs 可能通過CD86 的表達(dá)降低顯著抑制抗原特異性T細(xì)胞活化, 該改良的DCs 有可能用于哮喘的免疫治療。