目的 探討應(yīng)用帶蒂胸鎖乳突肌移位術(shù)動(dòng)態(tài)修復(fù)晚期面癱畸形的療效。方法 1999年 12月以來 ,采用帶蒂胸鎖乳突肌移位術(shù)修復(fù)7例晚期面癱 ,將胸鎖乳突肌的胸骨頭及鎖骨頭移位至患側(cè)口周 ,替代癱瘓的口周肌肉 ,修復(fù)因面神經(jīng)癱瘓所致的口鼻歪斜畸形及活動(dòng)障礙。保留副神經(jīng)的其余功能。結(jié)果 術(shù)后立即矯正靜態(tài)時(shí)口鼻歪斜畸形 ,1周后已能活動(dòng)患側(cè)口角。術(shù)后1個(gè)月 ,經(jīng)訓(xùn)練能恢復(fù)笑容。經(jīng)10個(gè)月隨訪 ,所有患者口部活動(dòng)恢復(fù)滿意。結(jié)論 帶蒂胸鎖乳突肌移位術(shù)能修復(fù)晚期面癱所致的口鼻畸形 ,并能重建口部表情功能。
目的 探討增生性瘢痕、瘢痕疙瘩及正常皮膚成纖維細(xì)胞中肌動(dòng)蛋白和肌球蛋白 的不同表達(dá)情況及其與瘢痕攣縮的關(guān)系。方法 取增生性瘢痕 15例 ,瘢痕疙瘩 10例 ,正常皮膚 15例 ,用免疫組織化學(xué)方法檢測其中肌動(dòng)蛋白和肌球蛋白 的表達(dá)情況 ,同時(shí)做細(xì)胞培養(yǎng) ,用流式細(xì)胞術(shù)檢測成纖維細(xì)胞中肌動(dòng)蛋白和肌球蛋白 的表達(dá)情況。結(jié)果 增生性瘢痕肌球蛋白 的免疫組織化學(xué)染色呈陽性 ,而瘢痕疙瘩及正常皮膚肌球蛋白 的表達(dá)均為陰性。增生性瘢痕肌球蛋白 的表達(dá)較其它兩種組織有非常顯著性差異 (Plt;0 .0 1) ,而瘢痕疙瘩和正常皮膚無顯著性差異 (Pgt;0 .0 5 )。流式細(xì)胞術(shù)檢測增生性瘢痕、瘢痕疙瘩及正常皮膚三種組織中肌球蛋白 的陽性率分別為 (95 .11± 2 .78) %、(16 .86± 7.11) %及 (5 .31± 1.79) % ,增生性瘢痕肌球蛋白 表達(dá)的陽性率較其它兩種組織有非常顯著性差異 (Plt;0 .0 1) ,而瘢痕疙瘩和正常皮膚無顯著性差異 (Pgt;0 .0 5 )。三種組織中肌動(dòng)蛋白的免疫組織化學(xué)染色均為陽性 ,無顯著性差異 (Pgt;0 .0 5 )。流式細(xì)胞術(shù)檢測三種組織中肌動(dòng)蛋白的陽性率分別為（77.77±15.43）%、（88.89 ±10.29）%及（82.92± 13.48）%，其表達(dá)的陽性率無顯著性差異（Pgt;0 .0 5 ）。結(jié)論 瘢痕攣縮與肌球蛋白 密切相關(guān)，而肌動(dòng)蛋白在細(xì)胞中收縮蛋白之一外，同時(shí)與細(xì)胞的活動(dòng)及運(yùn)動(dòng)有關(guān)，是細(xì)胞生命活動(dòng)中必不可少的蛋白之一。
目的 探討增生性瘢痕、瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞中肌動(dòng)蛋白(actin)與瘢痕攣縮的關(guān)系。方法 取增生性瘢痕10例，瘢痕疙瘩5例，對成纖維細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，并抽提細(xì)胞內(nèi)蛋白成份后用SDS-PAGE電泳，然后通過凝膠掃描儀測定兩種組織來源的成纖維細(xì)胞內(nèi)的總肌動(dòng)蛋白、纖維狀肌動(dòng)蛋白(F肌動(dòng)蛋白)、球形肌動(dòng)蛋白(G肌動(dòng)蛋白)的量，并計(jì)算F/G肌動(dòng)蛋白的比值。結(jié)果 增生性瘢痕細(xì)胞每104個(gè)細(xì)胞內(nèi)含總肌動(dòng)蛋白、F肌動(dòng)蛋白、G肌動(dòng)蛋白分別為2.38ng、0.98ng、1.42ng，F(xiàn)/G肌動(dòng)蛋白的比值為0.68，而瘢痕疙瘩分別為1.68ng、0.46ng、1.26ng及0.36。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，在總肌動(dòng)蛋白、F肌動(dòng)蛋白及F/G肌動(dòng)蛋白的比值上兩種瘢痕有非常顯著性差異(Plt;0.01)，而G肌動(dòng)蛋白在兩種瘢痕中無顯著性差異(Pgt;0.05)。結(jié)論 瘢痕攣縮與細(xì)胞內(nèi)總肌動(dòng)蛋白、F肌動(dòng)蛋白及F/G肌動(dòng)蛋白的值密切相關(guān)，細(xì)胞內(nèi)總肌動(dòng)蛋白、F肌動(dòng)蛋白及F/G肌動(dòng)蛋白的比值不同可作為區(qū)分增生性瘢痕和瘢痕疙瘩的依據(jù)之一。
目的 脂肪來源干細(xì)胞（adipose-derived stem cells，ADSCs）是組織工程種子細(xì)胞的重要來源之一。探討低溫保存對hADSCs 體外生長特性及成骨分化潛能的影響，驗(yàn)證凍存后的ADSCs 作為組織工程骨種子細(xì)胞的可行性。 方法 取自愿捐獻(xiàn)的經(jīng)脂肪抽吸術(shù)獲取人脂肪組織，采用膠原酶消化法分離hADSCs。取第2 代hADSCs 置于— 196℃液氮保存4 周后，37℃復(fù)蘇并測定細(xì)胞存活率。實(shí)驗(yàn)分為兩組，實(shí)驗(yàn)組為低溫保存的hADSCs，對照組為未經(jīng)低溫保存的hADSCs；均用成骨誘導(dǎo)液誘導(dǎo)培養(yǎng)。采用DNA 定量（Hoechst33258 熒光比色法）測定細(xì)胞體外增殖活性，ALP 染色及茜素紅染色法測定ALP 活性和Ca2+ 含量，觀察低溫凍存對細(xì)胞成骨能力的影響。 結(jié)果 低溫凍存復(fù)蘇后的hADSCs 存活率為90.44% ± 2.62%。兩組細(xì)胞數(shù)量隨成骨誘導(dǎo)時(shí)間延長不斷增加，7 d 達(dá)平臺期；ALP 表達(dá)活性也不斷增加，于成骨誘導(dǎo)11 d 達(dá)平臺期，且2 周時(shí)ALP 染色均呈陽性；成骨誘導(dǎo)3 周時(shí)兩組茜素紅染色均呈強(qiáng)陽性反應(yīng)。兩組各時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞數(shù)量、ALP 活性和Ca2+ 含量比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。 結(jié)論 低溫保存的hADSCs 體外生長及成骨能力未發(fā)生顯著變化，可以作為組織工程骨的種子細(xì)胞。
目的 探討兔口腔黏膜細(xì)胞的體外培養(yǎng)方法，并以其為種子細(xì)胞與異體膀胱黏膜下脫細(xì)胞基質(zhì)（bladder acellular matrix graft，BAMG）復(fù)合，構(gòu)建組織工程尿道。 方法 18 只10 周齡雄性新西蘭大耳白兔，體重0.3 ～ 0.5 kg。取其中12 只兔口腔黏膜組織，分離獲得口腔黏膜細(xì)胞。將口腔黏膜細(xì)胞分別接種于有3T3 細(xì)胞及無3T3細(xì)胞的培養(yǎng)皿進(jìn)行培養(yǎng)，接種后第2 天于倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化，繪制細(xì)胞生長曲線，觀察生長增殖情況，并行免疫熒光組織化學(xué)染色鑒定。取余6 只兔膀胱，經(jīng)脫細(xì)胞處理制備BAMG，隨機(jī)取1 cm × 1 cm 組織行HE 染色，觀察脫細(xì)胞效果。將接種于有3T3 細(xì)胞培養(yǎng)皿培養(yǎng)獲得的第2 代口腔黏膜細(xì)胞種植于BAMG 上，培養(yǎng)1 周后，行HE 染色及掃描電鏡觀察口腔黏膜細(xì)胞與BAMG 的復(fù)合狀況。 結(jié)果 倒置相差顯微鏡下觀察，接種于有3T3 細(xì)胞培養(yǎng)皿的口腔黏膜細(xì)胞可傳至7 ～ 8 代，其細(xì)胞形態(tài)均一，功能良好；無3T3 細(xì)胞培養(yǎng)皿的口腔黏膜細(xì)胞形態(tài)多樣，傳至第2 代時(shí)，即開始出現(xiàn)老化。細(xì)胞生長曲線顯示，兩種方法培養(yǎng)的口腔黏膜細(xì)胞均于第8 天開始呈對數(shù)增長，第14 天達(dá)峰值。接種于有3T3 細(xì)胞培養(yǎng)皿的口腔黏膜細(xì)胞，培養(yǎng)至融合時(shí)所獲得細(xì)胞數(shù)量明顯多于接種于無3T3 細(xì)胞培養(yǎng)皿的口腔黏膜細(xì)胞。兩種方法培養(yǎng)的口腔黏膜細(xì)胞行免疫熒光染色，均呈綠色熒光。HE 染色觀察，BAMG 經(jīng)脫細(xì)胞處理后未見細(xì)胞，脫細(xì)胞效果良好。復(fù)合培養(yǎng)1 周后，HE 染色及掃描電鏡觀察口腔黏膜細(xì)胞與BAMG 復(fù)合良好。 結(jié)論 兔口腔黏膜細(xì)胞可在體外成功培養(yǎng)、擴(kuò)增，與同種異體BAMG 復(fù)合后生長良好，為構(gòu)建組織工程尿道提供了一種新的選擇。
目的研究股內(nèi)側(cè)肌肌皮穿支解剖學(xué)特征，設(shè)計(jì)游離股內(nèi)側(cè)肌穿支皮瓣，為臨床修復(fù)軟組織缺損提供一種新的皮瓣。 方法取6具自愿捐獻(xiàn)的新鮮成人下肢標(biāo)本，以氧化鉛混合紅色乳膠灌注，解剖股內(nèi)側(cè)肌肌皮穿支，并通過血管造影技術(shù)觀測股內(nèi)側(cè)肌肌皮穿支的起源、走行、分布情況。根據(jù)解剖研究，于2009年6月－2011年8月，臨床采用大小為14 cm × 6 cm～20 cm × 5 cm的股內(nèi)側(cè)肌穿支皮瓣修復(fù)4例足部皮膚軟組織缺損，缺損范圍8 cm × 6 cm～12 cm × 8 cm。 結(jié)果股動(dòng)脈恒定發(fā)出的股內(nèi)側(cè)肌動(dòng)脈在內(nèi)側(cè)肌內(nèi)下行至髕旁，終末支與旋股外側(cè)動(dòng)脈終末支吻合形成髕周血管網(wǎng)。沿途發(fā)出3～5支粗大肌皮穿支達(dá)深筋膜內(nèi)，并淺出至股內(nèi)側(cè)肌表面皮膚，構(gòu)成股內(nèi)側(cè)血管網(wǎng)。臨床應(yīng)用4例股內(nèi)側(cè)肌穿支皮瓣均成活，受區(qū)創(chuàng)面及供區(qū)切口均Ⅰ期愈合；患者均獲隨訪，隨訪時(shí)間6～12個(gè)月，皮瓣色澤、質(zhì)地良好，踝關(guān)節(jié)背伸、跖屈活動(dòng)范圍正常。 結(jié)論游離股內(nèi)側(cè)肌穿支皮瓣切取簡便，皮瓣供區(qū)隱蔽，質(zhì)地優(yōu)良，是理想的皮瓣供區(qū)。
目的 磷酸鈣生物材料由于其優(yōu)良的生物相容性而具有廣闊的應(yīng)用前景，但傳統(tǒng)方法難以制備具有復(fù)雜形狀的支架。以快速成形方法制備磷酸鈣多孔陶瓷支架材料，并對其體外成骨性能進(jìn)行初步研究。 方法 采用快速成形方法制備磷酸鈣多孔陶瓷支架材料（直徑10 mm、高度5 mm、孔徑800 μm），取Beagle 犬髂骨髓分離培養(yǎng)BMSCs，接種第3 代BMSCs 于支架材料上。將實(shí)驗(yàn)分為4 組，A 組為成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)的細(xì)胞/ 材料復(fù)合物組，B 組為未經(jīng)成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)的細(xì)胞/ 材料復(fù)合物組，另設(shè)平皿成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)及常規(guī)培養(yǎng)為陽性對照組（C 組）及陰性對照組（D 組）。于接種后第1、3、7 天，利用DNA 定量檢測方法及ALP 定量、定性檢測方法檢測BMSCs 在支架材料上的增殖及ALP 的表達(dá)；并經(jīng)DiO 熒光染色后，應(yīng)用激光共聚焦顯微鏡觀察BMSCs 在材料上的黏附生長情況。 結(jié)果 DNA定量結(jié)果表明，隨培養(yǎng)時(shí)間增加，C、D 組在第3 天時(shí)細(xì)胞生長進(jìn)入平臺期；A、B 組細(xì)胞呈持續(xù)增長趨勢，細(xì)胞培養(yǎng)過程中增殖速度均略低于C、D 組，且未出現(xiàn)明顯的平臺期。DiO 熒光染色示，BMSCs 在以快速成形方法制備的磷酸鈣多孔陶瓷支架材料上黏附、生長狀態(tài)良好。ALP 染色示，隨培養(yǎng)時(shí)間延長，A、B 組支架上細(xì)胞染色均逐漸加深，A 組各時(shí)間點(diǎn)染色程度均明顯強(qiáng)于B 組。培養(yǎng)后第1、3 天，4 組ALP 表達(dá)均較低，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）；培養(yǎng)第7 天，各組ALP 表達(dá)均明顯升高，A 組比其他各組明顯高表達(dá)（P lt; 0.05），B 組及C 組均明顯高于D 組（P lt; 0.05）。 結(jié)論 快速成形的多孔磷酸鈣陶瓷具有良好的細(xì)胞相容性，BMSCs 與支架復(fù)合在體外誘導(dǎo)培養(yǎng)可以進(jìn)行成骨分化。因此通過快速成形技術(shù)制備的磷酸鈣多孔陶瓷是骨組織工程可選的細(xì)胞支架。
目的 初步確立hBMSCs 的二維生物打印方法，實(shí)現(xiàn)對細(xì)胞噴射過程的控制并保持打印后細(xì)胞活力。 方法 取健康志愿者骨髓5 mL，常規(guī)培養(yǎng)hBMSCs 至第2 代，調(diào)整為1 × 106 個(gè)/mL 單細(xì)胞懸液。實(shí)驗(yàn)分3 組：打印組1 細(xì)胞先行碘化丙啶（propidium iodide，PI）熒光標(biāo)記，快速成型組織打印機(jī)進(jìn)行二維細(xì)胞打印，x 軸間隔300 μm，y 軸間隔1 500 μm，激光共聚焦顯微鏡觀察。打印組2 細(xì)胞未行PI 標(biāo)記，經(jīng)生物打印后培養(yǎng)2 h，Live/Dead viability Kit 測定細(xì)胞活力，激光共聚焦顯微鏡觀察細(xì)胞熒光染色情況；取1 份未經(jīng)Live/Dead viability Kit 測試的打印組2 細(xì)胞，培養(yǎng)7 d 后倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)，貼壁后常規(guī)培養(yǎng)，動(dòng)態(tài)觀察細(xì)胞生長狀態(tài)。對照組除細(xì)胞懸液不行打印，其余操作同打印組2。 結(jié)果 打印組1 細(xì)胞激光共聚焦顯微鏡觀察，“細(xì)胞墨滴”在二維組織中規(guī)則且均勻分布，滿足二維設(shè)計(jì)細(xì)胞打印要求；每個(gè)“細(xì)胞墨滴”包含細(xì)胞15 ～ 35 個(gè)。打印組2 細(xì)胞經(jīng)活力測試，細(xì)胞孵育30 min 后激光共聚焦顯微鏡觀察顯示細(xì)胞熒光染色情況。對照組細(xì)胞活力與打印組2 無明顯區(qū)別。打印后細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)7 d，細(xì)胞可正常貼壁生長，形態(tài)、生長狀態(tài)良好。 結(jié)論 通過生物打印技術(shù)可實(shí)現(xiàn)hBMSCs 在二維平面上的定向、定量規(guī)則分布，并為進(jìn)一步的細(xì)胞三維打印乃至器官打印體系奠定基礎(chǔ)。
研究人脂肪干細(xì)胞（adipose derived stem cells，ADSCs）在體外單層培養(yǎng)條件下誘導(dǎo)為血管平滑肌細(xì)胞（vascular smooth muscle cells，VSMCs）的可行性。 方法 應(yīng)用酶消化法消化人脂肪組織獲得ADSCs，基礎(chǔ)培養(yǎng)液培養(yǎng)傳代，取第1 代細(xì)胞用于誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)分兩組，ADSCs 以含5 ng/mL TGF-β1 及50 ng/mL PDGF-BB 的M-199 誘導(dǎo)液聯(lián)合誘導(dǎo)，作為誘導(dǎo)組；以含10% FBS 的M-199 培養(yǎng)液培養(yǎng)ADSCs 作為未誘導(dǎo)組。鏡下觀察細(xì)胞生長情況；免疫熒光和RT-PCR 方法檢測平滑肌細(xì)胞特異標(biāo)記的表達(dá)情況；流式細(xì)胞儀檢測誘導(dǎo)陽性率。 結(jié)果 誘導(dǎo)組細(xì)胞形態(tài)形成平滑肌細(xì)胞特有的“峰- 谷”生長模式，未誘導(dǎo)組細(xì)胞形態(tài)未發(fā)生改變，與原代ADSCs 相似呈成纖維細(xì)胞樣生長。誘導(dǎo)培養(yǎng)14 d，誘導(dǎo)組細(xì)胞體外擴(kuò)增能力較未誘導(dǎo)組顯著降低（P lt; 0.01）。免疫熒光檢測：誘導(dǎo)組表達(dá)平滑肌特異標(biāo)記α 平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）、平滑肌肌球蛋白重鏈（smooth muscle-myosin heavy chain，SMMHC）和Calponin，未誘導(dǎo)組無表達(dá)。細(xì)胞誘導(dǎo)前α-SMA、SM-MHC及Calponin 陽性表達(dá)率分別為3.26% ± 1.31%、3.55% ±1.60%、4.02% ± 1.81%；誘導(dǎo)組陽性表達(dá)率分別為48.13% ± 8.31%、45.33% ± 10.68%、39.13% ± 9.42%；誘導(dǎo)前、后差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.01）。RT-PCR 檢測：誘導(dǎo)組表達(dá)平滑肌特異標(biāo)記α-SMA、SM-MHC、Calponin 和SM-22α，未誘導(dǎo)組無表達(dá)。 結(jié) 論 脂肪干細(xì)胞經(jīng)體外培養(yǎng)及誘導(dǎo)后，呈明顯的VSMCs 特性，有可能成為血管組織工程新的種子細(xì)胞來源。
目的研究化學(xué)萃取同種異體肌腱移植聯(lián)合注射同種異體軟骨細(xì)胞重建兔肩關(guān)節(jié)前盂唇損傷的效果。方法成年新西蘭大白兔 45 只，體質(zhì)量 2.5～3.0 kg。取其中 15 只兔的跟腱，采用化學(xué)萃取法進(jìn)行抗原滅活制備同種異體肌腱，將萃取后肌腱與未處理肌腱行 HE 染色和 Masson 染色對比；取膝關(guān)節(jié)軟骨，采用胰蛋白酶法分離培養(yǎng)軟骨細(xì)胞并行Ⅱ型膠原免疫組織化學(xué)染色鑒定。取剩余 30 只兔制備肩關(guān)節(jié)前盂唇缺損模型，將同種異體肌腱移植至受損盂唇后，隨機(jī)分為兩組（每組 15 只），A 組移植術(shù)后即刻關(guān)節(jié)內(nèi)注射同種異體軟骨細(xì)胞，B 組不作任何處理。術(shù)后 4、6、8 周每組各取 5 只兔的移植肌腱，大體觀察后采用 HE 染色觀察細(xì)胞核數(shù)量，Masson 染色觀察肌纖維組織膠原纖維的表達(dá)情況，AB 染色檢測移植后糖胺聚糖含量，評估兩組同種異體肌腱組織內(nèi)細(xì)胞生長情況。結(jié)果 HE 染色、Masson 染色顯示，采用化學(xué)萃取法制備的同種異體肌腱抗原被滅活且纖維組織結(jié)構(gòu)保持完好；Ⅱ型膠原免疫組織化學(xué)染色示，培養(yǎng)細(xì)胞為軟骨細(xì)胞。肌腱移植術(shù)后 AB 染色示，各時(shí)間點(diǎn) A 組糖胺聚糖含量均顯著高于 B 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。術(shù)后 6 周 HE 染色示，A 組肌腱組織內(nèi)的細(xì)胞核數(shù)量明顯多于 B 組（t=20.043，P=0.000）。術(shù)后 6 周 Masson 染色示，A 組肌腱組織中的細(xì)胞核明顯增多，肌纖維及膠原纖維相互交錯(cuò)，組織結(jié)構(gòu)更加緊湊，肌腱組織以藍(lán)染為主；而 B 組細(xì)胞核較少，主要為原移植物的膠原纖維。結(jié)論經(jīng)化學(xué)萃取法滅活抗原的同種異體肌腱，能夠修復(fù)重建兔肩關(guān)節(jié)前盂唇缺損，且聯(lián)合同種異體軟骨細(xì)胞移植能夠促進(jìn)移植肌腱的愈合。