目的 通過線栓法制備大鼠慢性后肢缺血模型,將其與急性后肢缺血模型進行比較研究。方法 采用線栓法制備Lewis大鼠慢性后肢缺血模型,分別于術(shù)后第7、14、28、42及49天進行激光多普勒血流分析及血管造影。每組動物在血管造影后處死,分別取其健側(cè)和患側(cè)股四頭肌和腓腸肌行HE染色及α-actin免疫組織化學(xué)染色,并計算小動脈密度。結(jié)果 慢性后肢缺血模型組動物術(shù)后未出現(xiàn)明顯的跛行和肢體壞死。血流分析發(fā)現(xiàn),慢性后肢缺血模型在術(shù)后第49天仍處于缺血狀態(tài)。后肢肌肉組織病理學(xué)檢查未發(fā)現(xiàn)急性壞死和肌肉纖維化的表現(xiàn)。術(shù)后第7天,慢性缺血組股四頭肌的小動脈密度低于急性缺血組(0.015 2比0.036 4)。結(jié)論 線栓法制備大鼠慢性后肢缺血模型與目前采用的急性動物后肢缺血模型制備方法有顯著的不同, 其缺血肢體較少受到代償機制的影響且缺血時間維持較長,此為進一步研究缺血后血管新生的機理和治療嚴重的下肢缺血提供了一種新的動物模型。
目的 利用細胞示蹤技術(shù)探討骨髓間充質(zhì)干細胞(MSCs)治療慢性后肢缺血的相關(guān)機理。方法 采用密度梯度離心法結(jié)合直接貼壁法分離和培養(yǎng)大鼠MSCs,并以5-溴脫氧尿嘧啶核苷(BrdU)標記。采用線栓法制備8只Lewis大鼠慢性后肢缺血模型,將其隨機均分為MSCs移植組和對照組,分別于患側(cè)后肢肌肉注射MSCs和生理鹽水。分別于移植術(shù)后第7天和第14天,對其進行臨床觀察、后肢血流量測定及后肢血管造影,再于相應(yīng)時間點處死大鼠,取患側(cè)后肢股四頭肌和腓腸肌,行HE染色及BrdU免疫組化染色。結(jié)果 移植術(shù)后14d,8只大鼠全部成活,移植部位均無壞死和腫瘤形成;MSCs移植組大鼠患側(cè)/健側(cè)后肢的血流灌注比值明顯增高(1.773比1.279),而血管造影結(jié)果提示2組大鼠的側(cè)支血管數(shù)量比值未見顯著增加(0.908比0.835)。HE染色結(jié)果示2組大鼠的股四頭肌及腓腸肌并未發(fā)生特殊的病理學(xué)變化。BrdU免疫組化結(jié)果顯示,陽性顆粒定位為股四頭肌及腓腸肌的間質(zhì)細胞和血管內(nèi)皮細胞;且MSCs的分布存在差異,移植術(shù)后7d腓腸肌內(nèi)陽性細胞所占比例明顯高于股四頭肌,而14d時則相反。結(jié)論 MSCs移植在術(shù)后早期可以提高血流灌注量,但這并非為增加了側(cè)支血管數(shù)量使然,MSCs移植后所引起的旁分泌效應(yīng)可能在術(shù)后早期起著重要的作用。
目的應(yīng)用激光多普勒血流探測儀(LDF)和激光多普勒血流成像儀(LDPI)監(jiān)測Lewis大鼠后肢急性缺血模型血流和血壓的動態(tài)變化,探討大鼠后肢急性缺血后血流變化特點。方法切除大鼠左后肢股動脈制備急性后肢缺血模型,于術(shù)后2、7、14、28及49 d對手術(shù)側(cè)和非手術(shù)側(cè)肢體采用LDF進行血流、血壓檢測,于術(shù)后7 d采用LDPI進行血流檢測。結(jié)果所有大鼠術(shù)后均成活,未發(fā)現(xiàn)后肢壞死; 在術(shù)后14 d內(nèi)手術(shù)側(cè)后肢平均分為2分,在49 d平均分為1分。大鼠手術(shù)側(cè)和非手術(shù)側(cè)肢體血流比值在術(shù)后2 d由術(shù)前的1上升至1.31±0.439(P=0.021),術(shù)后7 d和14 d分別為0.82±0.538和0.93±0.294,兩者比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.502),但均明顯低于術(shù)后2 d的值(P=0.032和P=0.019); 術(shù)后28 d下降到最低點(0.41±1.970),明顯低于術(shù)后2、7和14 d值(P=0.004、P=0.007和P=0.006); 在術(shù)后49 d手術(shù)側(cè)后肢血流恢復(fù)到接近術(shù)前值(0.98±0.093),明顯低于術(shù)后2 d(P=0.010)而高于術(shù)后28 d值(P=0.005),與術(shù)后7 d和14 d的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.126和P=0.382)。大鼠手術(shù)側(cè)和非手術(shù)側(cè)肢體血壓比值術(shù)后2 d由術(shù)前的1明顯下降至0.47±0.375(P=0.031); 術(shù)后7 d繼續(xù)下降至0.44±0.118,與術(shù)后2 d比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.203); 術(shù)后14 d下降到最低點(0.35±0.115),明顯低于術(shù)后2 d和7 d值(P=0.001和P=0.036); 術(shù)后28 d開始上升(0.54±0.146),明顯高于術(shù)后14 d值(P=0.008),但與術(shù)后2 d(P=0.493)和7 d(P=0.551)的差異無統(tǒng)計學(xué)意義; 術(shù)后49 d恢復(fù)接近術(shù)前值(0.97±0.094),明顯高于術(shù)后2、7、14和28 d值(P=0.013、P=0.021、P=0.002和P=0.031)。結(jié)論切除大鼠后肢股動脈及分支的方法制備后肢急性缺血模型,在術(shù)后14~28 d患肢缺血處于最嚴重階段。LDF和LDPI可以動態(tài)監(jiān)測肢體血流及血壓的變化,對監(jiān)測大鼠后肢術(shù)后缺血的動態(tài)演變過程有著重要的作用。