目的 探討預(yù)輸注5-FU處理的同種異基因淋巴細(xì)胞對(duì)大鼠肝移植免疫耐受的影響。方法 實(shí)驗(yàn)分4組，均行Wistar大鼠至SD大鼠的肝移植。對(duì)照組： 僅行肝移植； 單純淋巴細(xì)胞組： 受體術(shù)前第7天與第4天各輸注Wistar大鼠淋巴細(xì)胞（5×106個(gè)/ml）懸液1 ml； 低濃度5-FU+淋巴細(xì)胞組： 受體術(shù)前第7天與第4天各輸注經(jīng)7.5 μg 5-FU誘導(dǎo)過(guò)的Wistar大鼠淋巴細(xì)胞（5×106個(gè)/ml）懸液1 ml； 高濃度5-FU+淋巴細(xì)胞組： 受體術(shù)前第7天與第4天各輸注經(jīng)15 μg 5-FU誘導(dǎo)過(guò)的Wistar大鼠淋巴細(xì)胞（5×106個(gè)/ml）懸液1 ml。術(shù)后第7天處死SD大鼠觀察移植肝的病理改變。結(jié)果 低濃度5-FU+淋巴細(xì)胞組受體大鼠的肝組織病理改變呈急性輕度排斥反應(yīng)，肝細(xì)胞條索狀排列基本整齊，肝小葉結(jié)構(gòu)存在； 中央靜脈血管周?chē)倭垦仔约?xì)胞浸潤(rùn)； 匯管區(qū)少量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。對(duì)照組肝組織呈急性重度排斥反應(yīng)。單純淋巴細(xì)胞組和高濃度5-FU+淋巴細(xì)胞組肝組織呈急性中度排斥反應(yīng)。結(jié)論 預(yù)輸注經(jīng)低濃度5-FU處理的同種異基因淋巴細(xì)胞可以較好地誘導(dǎo)大鼠肝移植免疫耐受。
目的 分析預(yù)實(shí)驗(yàn)中大鼠原位肝移植常見(jiàn)的失敗原因，并提出相應(yīng)對(duì)策。方法 回顧性分析2008年3月至2009年3月期間預(yù)實(shí)驗(yàn)中采用改良Kamada“二袖套”法行大鼠原位肝移植手術(shù)120例的資料。結(jié)果 120例大鼠原位肝移植預(yù)實(shí)驗(yàn)中失敗原因有： 無(wú)肝期延長(zhǎng)66例, 肝上下腔靜脈吻合失敗61例,肝下下腔靜脈吻合失敗17例,門(mén)靜脈吻合失敗12例,麻醉不滿(mǎn)意8例。成功21例(17.50%)。結(jié)論 加強(qiáng)顯微外科技術(shù)的操作訓(xùn)練，特別是肝上下腔靜脈的吻合，可提高大鼠原位肝移植手術(shù)成功率。
目的 構(gòu)建肝細(xì)胞肝癌特異性表達(dá)反向半胱氨酸蛋白酶3（r-Caspase-3）重組腺病毒，為肝細(xì)胞肝癌的基因治療提供新策略。方法 構(gòu)建甲胎蛋白（AFP）增強(qiáng)子和白蛋白 (ALB) 啟動(dòng)子腺病毒載體（pAdTrack-EAFP-PALB），然后將目的基因r-Caspase-3亞克隆到載體pAdTrack-EAFP-PALB上， 獲得重組腺病毒穿梭載體pAdTrack-EAFP-PALB /r-Caspase-3, 經(jīng)PmeⅠ酶切線(xiàn)性化后與pAdEasy-1同源重組，獲得重組腺病毒骨架pAdEasy-EAFP-PALB /r-Caspase-3； 鑒定正確的pAdEasy-EAFP-PALB/r-Caspase-3 經(jīng)PacⅠ酶切線(xiàn)性化后脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染AD293 細(xì)胞進(jìn)行包裝、擴(kuò)增，獲得病毒。綠色熒光蛋白(green fluorescent protein，GFP)監(jiān)測(cè)病毒滴度和感染效率； RT-PCR和Western blot 法檢測(cè)r-Caspase-3在HepG2細(xì)胞中的表達(dá)； SRB染色法評(píng)估重組腺病毒對(duì)HepG2細(xì)胞的抑制作用，初步觀察HepG2細(xì)胞凋亡狀況。結(jié)果 穿梭載體pAdTrack-EAFP-PALB/r-Caspase-3酶切、測(cè)序正確。穿梭載體、pAdEasy-1載體同源重組后PCR 及PacⅠ酶切鑒定結(jié)果表明pAdEasy-EAFP-PALB/r-Caspase-3 重組成功； 經(jīng)PacⅠ酶切線(xiàn)性化后，pAdEasy-EAFP-PALB/r-Caspase-3 轉(zhuǎn)染AD293 細(xì)胞即可觀察到GFP 的表達(dá)； 回收病毒可重復(fù)感染AD293 細(xì)胞，RT-PCR和Western blot 均可檢測(cè)到r-Caspase-3的表達(dá)，證實(shí)Ad-EAFP-PALB/r-Caspase-3病毒顆粒包裝成功； SRB染色檢測(cè)發(fā)現(xiàn)Ad-EAFP-PALB/r-Caspase-3具有凋亡誘導(dǎo)特異性。結(jié)論 靶向性Ad-EAFP-PALB/r-Caspase-3重組腺病毒構(gòu)建成功，并具有凋亡誘導(dǎo)靶向性，為進(jìn)一步研究靶向性r-Caspase-3基因治療肝細(xì)胞肝癌及其生物學(xué)功能奠定了基礎(chǔ)。