目的 探討在體神經(jīng)元缺氧缺血條件下缺氧誘導(dǎo)因子1α(hypoxia inducible factor 1α,HIF-1α)蛋白的表達(dá)及三磷酸肌醇激酶(phosphoinositid 3-kinase/Akt,PI3K/Akt)信號通路的激活,推測PI3K/Akt 信號通路與神經(jīng)元HIF-1α 表達(dá)調(diào)節(jié)的關(guān)系,以期更確切地闡明PI3K/Akt 在發(fā)育期腦缺氧缺血性損傷(hypoxia ischemia brain damage,HIBD)神經(jīng)元HIF-1α 表達(dá)中的作用。 方法 10 d 齡SD 大鼠56 只,分為正常對照組(n=12)、假手術(shù)組(n=12)、實(shí)驗(yàn)組(n=24)、wortmannin 干預(yù)組(n=4)和溶劑干預(yù)組(n=4)。實(shí)驗(yàn)組在乙醚麻醉下行右側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎,氮氧混合氣(92% N2、8% O2)缺氧2.5 h,即為HIBD 模型;假手術(shù)組不結(jié)扎頸總動(dòng)脈,不作缺氧處理;正常對照組不作任何處理。wortmannin 干預(yù)組和溶劑干預(yù)組分別在側(cè)腦室內(nèi)注射wortmannin 和DMSO、PBS 3 μL,30 min 后制備HIBD 模型。分別于建模后4、8 及24 h處死動(dòng)物取腦組織,應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測HIF-1α、Akt 蛋白的分布和表達(dá),Western blot 檢測HIF-1α、Akt 及p-Akt 蛋白含量。 結(jié) 果 實(shí)驗(yàn)組HIF-1α 蛋白表達(dá)在術(shù)后4 h 明顯升高,8 h 達(dá)高峰,24 h 后下降;p-Akt 蛋白于術(shù)后4 h 明顯升高,8 h 后下降。正常對照組各時(shí)間點(diǎn)HIF-1α 和p-Akt 均有極少量弱陽性表達(dá)。實(shí)驗(yàn)組各時(shí)間點(diǎn)HIF-1α 蛋白表達(dá)明顯高于正常對照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P lt; 0.01) ;實(shí)驗(yàn)組p-Akt 于4 h 和8 h 明顯高于正常對照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P lt; 0.05)。Akt 蛋白表達(dá)隨術(shù)后時(shí)間的延長無明顯變化,與正常對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P gt; 0.05)。術(shù)后4 h wortmannin 干預(yù)組的HIF-1α 蛋白的表達(dá)明顯下降,與溶劑干預(yù)組及實(shí)驗(yàn)組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P lt; 0.01)。 結(jié)論 發(fā)育期HIBD 時(shí),可激活PI3K/Akt 信號通路,并誘導(dǎo)HIF-1α 表達(dá)增加,可針對PI3K/Akt 信號通路和HIF-1α 尋找新生兒HIBD新的治療靶點(diǎn)。
目的 探討三磷酸肌醇(IP3)和bcl-2基因表達(dá)變化在槲皮素治療裸鼠移植人肝細(xì)胞癌中的作用。方法 建立裸鼠移植人肝細(xì)胞癌模型,對照組腹腔注入含0.4% DMSO的RPMI 1640培養(yǎng)基0.05 ml/(g·d),槲皮素治療組腹腔注入槲皮素 50 mg/(kg·d),3周后觀察肝癌生長情況,并應(yīng)用IP3-[3H] Birtrak Assay試劑盒檢測肝癌組織中IP3的含量,RT-PCR檢測肝癌組織中bcl-2 mRNA的表達(dá),Western blot檢測肝癌組織中bcl-2蛋白的表達(dá)。結(jié)果 槲皮素治療組移植瘤體積和重量均明顯小于或輕于對照組〔體積: (15.8±10.1) mm3比(52.3±26.5) mm3,重量: (44.8±10.4) mg比(91.3±31.4) mg,P<0.01〕; 肝癌組織中IP3含量明顯低于對照組〔(13.4±1.4) pmol/mg prot比(35.3±6.6) pmol/mg prot,P<0.01〕,bcl-2 mRNA表達(dá)低于對照組但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義〔RI(相對灰度與面積之積): 0.55±0.05比0.79±0.19,P>0.05〕,bcl-2蛋白的表達(dá)則明顯低于對照組〔RI: 1.07±0.12比6.69±1.80,P<0.01〕。結(jié)論 槲皮素能減少IP3的生成,下調(diào)肝癌組織中bcl-2基因的表達(dá),抑制裸鼠移植人肝細(xì)胞癌的生長。