• 1.四川大學(xué)華西醫(yī)院普外科（成都610041);;
  • 2.成都地奧制藥集團(tuán)有限公司新藥部（成都610041）;;
  • 通迅作者： 嚴(yán)律南;

目的構(gòu)建攜帶多藥耐藥相關(guān)蛋白(MRP)全長基因的真核表達(dá)載體，并研究其在人肝癌細(xì)胞株HepG2中的表達(dá)特性。
方法雙酶切克隆質(zhì)粒pGEM-mrp1，獲得含mrp1全長的cDNA片段，再將此片段定向克隆到哺乳動(dòng)物真核表達(dá)載體pCI-neo的多克隆位點(diǎn)，經(jīng)脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞，G418篩選獲得穩(wěn)定表達(dá)的轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系HepG2/mrp1。RT-PCR檢測HepG2/mrp1細(xì)胞mrp1 mRNA表達(dá)，流式細(xì)胞儀檢測HepG2/mrp1細(xì)胞MRP的含量。
結(jié)果本實(shí)驗(yàn)所構(gòu)建的攜帶mrp1全長基因的表達(dá)載體pCI-mrp1能在HepG2細(xì)胞中表達(dá)，形成穩(wěn)定的多藥耐藥細(xì)胞系HepG2/mrp1，其多藥耐藥性、MRP含量及mrp1 mRNA表達(dá)均較未轉(zhuǎn)染該載體的HepG2細(xì)胞顯著增加。結(jié)論將攜帶全長人多藥耐藥相關(guān)蛋白基因mrp1的載體導(dǎo)入人肝癌細(xì)胞株能夠建立高效、穩(wěn)定的多藥耐藥細(xì)胞株，為進(jìn)一步研究多藥耐藥的機(jī)理及逆轉(zhuǎn)多藥耐藥提供理想的細(xì)胞模型。

引用本文： 王新平,嚴(yán)律南,潘光棟,夏冬,張明滿,茍興華,趙蘭英. 多藥耐藥真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其生物學(xué)特性. 中國普外基礎(chǔ)與臨床雜志, 2006, 13(2): 163-166. doi: 復(fù)制

版權(quán)信息： ?四川大學(xué)華西醫(yī)院華西期刊社《中國普外基礎(chǔ)與臨床雜志》版權(quán)所有，未經(jīng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、改編

1. [Ｊ]. Mol Cancer Ther， 2003； 2(3)∶307.
2. Nagata J， Kijima H， Hatanaka H， et al. Reversal of drug resistance using hammerhead ribozymes against multidrug resistanceassociated protein and multidrug resistance 1 gene [Ｊ]. Int J Oncol， 2002; 21(5)∶ 1021.
3. Lage H, Perlitz C, Abele R, et al. Enhanced expression of human ABCtransporter tap is associated with cellular resistance to mitoxantrone [Ｊ]. FEBS Lett， 2001； 503(2-3)∶179.
4. Stavrovskaya AA. Cellular mechanisms of multidrug resistance of tumor cells [Ｊ]. Biochemistry， 2000； 65(1)∶95.
5. Ruefli AA, Smyth MJ, Johnstone RW. HMBA induces activation of a caspaseindependent cell death pathway to overcome Pglycoproteinmediated multidrug resistance [Ｊ]. Blood， 2000； 95(7)∶2378.
6. Loe DW, Deeley RG, Cole SPC. Biology of the multidrug resistanceassociated protein, MRP [Ｊ]. Euro J Cancer,1996； 32A（6）∶945.
7. 姚輝華, 劉忠， 嚴(yán)律南， 等. 多藥耐藥相關(guān)蛋白基因在原發(fā)性肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及意義 [Ｊ]. 中國普外基礎(chǔ)與臨床雜志， 2003； 10（6）∶576.
8. 戴越盟， 林萍. 多藥耐藥相關(guān)蛋白在阿霉素誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞SMMC7721耐藥性產(chǎn)生中的作用及機(jī)理 [Ｊ]. 中國普外基礎(chǔ)與臨床雜志， 2001； 8（1）∶8.
9. Mavel S, Dikic B, Palakas S, et al. Synthesis and biological evaluation of a series of flavone derivatives as potential radioligands for imaging the multidrug resistanceassociated protein 1 (ABCC1/MRP1) [Ｊ]. Bioorg Med Chem， 2005； 28(4)∶521.
10. Godinot N, Iversen PW, Tabas L, et al. Cloning and functional characterization of the multidrug resistanceassociated protein (MRP1/ABCC1) from the cynomolgus monkey.
11. 陳永兵， 余少鴻， 嚴(yán)律南， 等. 多藥耐藥真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其在人肝癌細(xì)胞HepG2中表達(dá) [Ｊ]. 中國普外基礎(chǔ)與臨床雜志， 2005； 12（3）∶254.
12. 翟寶進(jìn)， 伍烽， 邵澤勇, 等. 阿霉素誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞多藥耐藥株的建立及其生物學(xué)特性評價(jià) [Ｊ]. 癌癥， 2004； 23（4）∶391.
13. 邵澤勇， 沈鼎明， 伍烽, 等. 人肝癌原發(fā)性耐藥細(xì)胞亞系的建立及耐藥機(jī)制的初步探討 [Ｊ]. 腫瘤, 2004； 24（5）∶455.
14. 顧玲， 劉霆， 龔玉萍. Mdr1單因素耐藥白血病細(xì)胞株的構(gòu)建 [Ｊ]. 四川大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版）， 2005； 36（4）∶475.
15. 章小平， 楊紅枚， 魯功成. 膀胱癌MRP亞克隆的建立及其MDR表型 [Ｊ]. 中華腫瘤雜志， 2000； 22（4）∶273.
  1. 1. [Ｊ]. Mol Cancer Ther， 2003； 2(3)∶307.
  2. 2. Nagata J， Kijima H， Hatanaka H， et al. Reversal of drug resistance using hammerhead ribozymes against multidrug resistanceassociated protein and multidrug resistance 1 gene [Ｊ]. Int J Oncol， 2002; 21(5)∶ 1021.
  3. 3. Lage H, Perlitz C, Abele R, et al. Enhanced expression of human ABCtransporter tap is associated with cellular resistance to mitoxantrone [Ｊ]. FEBS Lett， 2001； 503(2-3)∶179.
  4. 4. Stavrovskaya AA. Cellular mechanisms of multidrug resistance of tumor cells [Ｊ]. Biochemistry， 2000； 65(1)∶95.
  5. 5. Ruefli AA, Smyth MJ, Johnstone RW. HMBA induces activation of a caspaseindependent cell death pathway to overcome Pglycoproteinmediated multidrug resistance [Ｊ]. Blood， 2000； 95(7)∶2378.
  6. 6. Loe DW, Deeley RG, Cole SPC. Biology of the multidrug resistanceassociated protein, MRP [Ｊ]. Euro J Cancer,1996； 32A（6）∶945.
  7. 7. 姚輝華, 劉忠， 嚴(yán)律南， 等. 多藥耐藥相關(guān)蛋白基因在原發(fā)性肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及意義 [Ｊ]. 中國普外基礎(chǔ)與臨床雜志， 2003； 10（6）∶576.
  8. 8. 戴越盟， 林萍. 多藥耐藥相關(guān)蛋白在阿霉素誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞SMMC7721耐藥性產(chǎn)生中的作用及機(jī)理 [Ｊ]. 中國普外基礎(chǔ)與臨床雜志， 2001； 8（1）∶8.
  9. 9. Mavel S, Dikic B, Palakas S, et al. Synthesis and biological evaluation of a series of flavone derivatives as potential radioligands for imaging the multidrug resistanceassociated protein 1 (ABCC1/MRP1) [Ｊ]. Bioorg Med Chem， 2005； 28(4)∶521.
  10. 10. Godinot N, Iversen PW, Tabas L, et al. Cloning and functional characterization of the multidrug resistanceassociated protein (MRP1/ABCC1) from the cynomolgus monkey.
  11. 11. 陳永兵， 余少鴻， 嚴(yán)律南， 等. 多藥耐藥真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其在人肝癌細(xì)胞HepG2中表達(dá) [Ｊ]. 中國普外基礎(chǔ)與臨床雜志， 2005； 12（3）∶254.
  12. 12. 翟寶進(jìn)， 伍烽， 邵澤勇, 等. 阿霉素誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞多藥耐藥株的建立及其生物學(xué)特性評價(jià) [Ｊ]. 癌癥， 2004； 23（4）∶391.
  13. 13. 邵澤勇， 沈鼎明， 伍烽, 等. 人肝癌原發(fā)性耐藥細(xì)胞亞系的建立及耐藥機(jī)制的初步探討 [Ｊ]. 腫瘤, 2004； 24（5）∶455.
  14. 14. 顧玲， 劉霆， 龔玉萍. Mdr1單因素耐藥白血病細(xì)胞株的構(gòu)建 [Ｊ]. 四川大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版）， 2005； 36（4）∶475.
  15. 15. 章小平， 楊紅枚， 魯功成. 膀胱癌MRP亞克隆的建立及其MDR表型 [Ｊ]. 中華腫瘤雜志， 2000； 22（4）∶273.